摘要：【背景】漆酶和锰过氧化物酶（Manganese peroxidase,Mnp）是木质素降解的主要酶,二者有协同效应。Mnp活性依赖于Mn^2＋,而Mn^2＋是大多数漆酶的抑制剂。【目的】获得耐Mn^2＋的细菌漆酶用于木质素降解。【方法】构建许昌市某污水河污泥宏基因组文库,通过活性筛选获得细菌漆酶基因lac1542。使用大肠杆菌异源表达Lac1542,研究纯化后的重组蛋白酶学性质并进一步检测了含Lac1542复合酶系降解木质素能力。【结果】测序结果显示lac1542编码一个含513个氨基酸的蛋白。以ABTS为底物Lac1542最适反应pH为4.0,在pH 3.0-6.5范围内酶活性稳定。最适反应温度是75°C,在70°C以下酶活性稳定;100 mmol/L的Mn^2＋仍能提高酶的活性。动力学参数研究发现,该酶的最适底物顺序为：ABTS〉丁香醛联氮〉儿茶酚〉2,6-DMP〉愈创木酚。Lac1542/Mnp复合酶系对木质素降解率为47.8%,比单独使用Mnp木质素降解率（22.4%）提高25.4%。Lac1542/Mnp/灰盖鬼伞过氧化物酶（Coprinus cinereus Peroxidase,CIP）复合酶系木质素降解高达71.5%,比Mnp/CIP酶系木质素降解率（48.9%）提高22.6%,加入Lac1542后的复合酶系能明显提高木质素的降解率。【结论】Lac1542的可溶性表达、耐受高浓度Mn^2＋、热稳定性使得Lac1542可以替代一些经典的真菌漆酶应用于制浆、造纸、纤维素乙醇生产、染料脱色等工业。

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