摘要：【目的】以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的sortase A为＂分子订书机＂,用于（S）-羰基还原酶Ⅱ分子之间的连接,获得催化功能与稳定性增强的氧化还原酶寡聚体,高效催化2-羟基苯乙酮,合成（S）-苯基乙二醇。【方法】从S.aureus基因组中克隆sortase A基因,在大肠杆菌中表达,通过镍柱和凝胶层析纯化重组酶,获得纯酶sortase A。通过基因工程手段在（S）-羰基还原酶Ⅱ的C末端添加GGGGSLPETGG序列,蛋白纯化获得（S）-羰基还原酶Ⅱ-GGGGSLPETGG,摸索了sortase A催化（S）-羰基还原酶Ⅱ-GGGGSLPETGG的分子连接,形成（S）-羰基还原酶Ⅱ寡聚体的最佳条件,并研究了寡聚体酶学性质及生物转化（S）-苯基乙二醇的效率。【结果】（S）-羰基还原酶Ⅱ寡聚体比酶活力为38.5 U/mg,比原始型（S）-羰基还原酶Ⅱ提高了6倍,最适反应温度为50°C,最适pH为6.0,在50°C放置1 h后酶活仍旧保持90%以上;蛋白质变性实验结果显示,（S）-羰基还原酶Ⅱ寡聚体的变性温度为60.1°C,比原始酶提高了10°C;生物转化结果显示（S）-羰基还原酶Ⅱ寡聚体在3 h内完全转化5 g/L 2-羟基苯乙酮,产生光学纯度为100%的（S）-苯基乙二醇,相比于重组大肠杆菌（S）-羰基还原酶Ⅱ全细胞催化时间缩短了16倍。【结论】本研究首次将sortase A应用于氧化还原酶的分子连接,显著提高了酶的催化效率和热稳定性,表明sortase在手性催化中有很大的潜在应用价值。

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