摘要：目的建立和优化地龙ISSR-PCR反应体系。方法以地龙药材为实验试材,采用异丙醇沉淀法提取了地龙总DNA模板,对地龙ISSR-PCR反应体系中各个主要影响因子进行了优化和筛选。结果建立了标记位点清晰、稳定、重复性好,可用于地龙ISSR分析的最佳反应体系,50μl体系中含有：1×Taq酶配套缓冲液,DNA模板50ng,2.5UTaqDNA聚合酶,2mmol/LMgCl2,0.8μmol/L引物,0.2mmol/LdNTPs。扩增程序为：94℃预变性5min;94℃变性30s,（据不同引物的退火温度）复性30s,72℃延伸1.5min,共35个循环;72℃延伸5min,反应结束后,4℃保存。结论这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术进行地龙类药用动物鉴定及种质资源遗传多样性分析奠定了基础。

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