首页 期刊 时珍国医国药 沉香随机扩增多态性DNA反应体系的建立 【正文】

沉香随机扩增多态性DNA反应体系的建立

作者:邵敏; 周鹤峰; 唐历波; 刘银花; 李官成 遵义医学院珠海校区; 广东珠海519041
沉香   rapd   基因组dna   反应体系  

摘要:目的对影响沉香随机扩增多态性DNA(RAPD)反应的各因素进行优化,建立适用于沉香RAPD的最佳反应体系。方法采用改良的CTAB法提取基因组DNA,变化单一因素的方法对模板DNA浓度、Taq酶用量、dNTPs、引物浓度、Mg^2+浓度、退火温度对RAPD影响进行分析。结果建立了适合沉香RAPD分析的最佳反应体系:在20μl反应体系中,模板DNA用量20ng、Taq酶1.0U、dNTPs浓度为0.3~0.4mmol·L^-1、随机引物浓度为0.6μmol·L、Mg^2+浓度1.5—2.0mmol·L^-1、PCR反应条件:94℃,10min;94℃,1min;36℃,1min;72℃,2min;45个循环,72℃,8min。结论该反应体系具有良好的稳定性和重复性。

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