生物技术通讯杂志

利用CRISPR/Cas9技术构建FHL1基因敲除的HepG2稳定细胞株及其功能鉴定

作者：张亚楠; 常振宇; 刘婕; 丁丽华; 叶棋浓 刊期：2018年第06期

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除人肝癌细胞HepG2中的四个半LIM结构域蛋白1(FHL1)基因,构建FHL1基因敲除的HepG2稳定细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性识别FHL1基因第三外显子相关序列的上下游小向导RNA,构建真核重组表达质粒,测序鉴定后,将重组质粒包装慢病毒感染HepG2细胞,用嘌呤霉素抗性筛选稳定敲除FHL1基因的细胞...

肾透明细胞癌中长链非编码RNA SNHG12的生物信息学分析

作者：张晓彤; 周亚男; 朱玉翠; 胡成进; 曹源 刊期：2018年第06期

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNHG12在肾透明细胞癌(ccRCC)中的意义,并对SNHG12进行靶基因预测,为SNHG12在ccRCC中的进一步研究提供借鉴。方法:利用UALCAN数据库分析ccRCC中SNHG12的差异表达,并对SNHG12进行生存分析;利用RegRNA2.0、HMDD、targetscan、starBasev3.0、microT-CDS平台预测SNHG12的靶基因,构建SNHG12-microRNAs-mRNAs调控网络;...

炎症条件下Ltbp2促进淋巴细胞跨内皮细胞迁移

作者：骈亚亚; 聂晶晶; 高振祥; 胡继红 刊期：2018年第06期

目的:探讨组织内转化生长因子β结合蛋白2(Ltbp2)在炎症条件下促进淋巴细胞及其亚群跨内皮细胞的迁移。方法:利用CRISPR/Cas9敲除MS1细胞上的Ltbp2基因;淋巴细胞与内皮细胞黏附实验比较淋巴细胞对MS1细胞和敲除细胞Ltbp2^-/- MS1的黏附能力,RT-PCR及流式细胞术比较MS1细胞和敲除细胞Ltbp2^-/- MS1表面黏附分子的表达情况;Transwell实验比较淋巴细...

重组人表皮生长因子包涵体的表达、纯化及复性

作者：王强; 段云飞; 徐燕; 张超; 冷晓燕 刊期：2018年第06期

目的:通过优化人表皮生长因子(hEGF)基因序列,利用大肠杆菌大量表达重组hEGF(rhEGF)包涵体,经过包涵体纯化复性获得高活性的rhEGF。方法:采用全基因合成优化后的序列,克隆至pET-30a表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,将rhEGF包涵体用尿素溶解后过Ni柱纯化并稀释复性,根据药典对得到的rhEGF进行纯度及活性测定。结果:构建了rhEGF...

树鼩IgE高亲和力受体α亚基单克隆抗体的制备及鉴定

作者：张晶晶; 肖红剑; 龙琼; 浦滔; 李智华; 寸韡 刊期：2018年第06期

目的:制备抗树鼩IgE高亲和力受体α亚基(FcεRIα)的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行检测。方法:采用大肠杆菌原核表达树鼩IgEFcεRIα蛋白,经过纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合;通过ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;利用Protein A纯化单克隆抗体,Western印迹检测其特异性,间接免疫荧光及免疫组化对单克隆抗体进行分析。结果...

嗜水气单胞菌十一碳焦磷酸合成酶XreF的原核表达及分离纯化

作者：刘艳菊; 许永斌; 王路路; 陈金利; 苏晓燕; 黄丽菲; 桂瑞英; 张贺航 刊期：2018年第06期

目的:构建嗜水气单胞菌十一碳焦磷酸合成酶XreF基因的原核表达载体,转入大肠杆菌诱导表达高活性的XreF蛋白。方法:从嗜水气单胞菌中提取基因组DNA,以基因组DNA为模板进行PCR扩增,构建pPROEX-HTa-XreF重组载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)表达目的蛋白;用镍离子亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析分离纯化目的蛋白XreF;用分析型凝胶过滤柱检测XreF...

RBM10通过影响miR-21稳定性参与调控人乳腺癌细胞增殖及转移活性

作者：刘涵; 李天牧; 李晓达 刊期：2018年第06期

目的:分析miR-21和RNA结合基序(RBM)在人乳腺癌组织及相应肿瘤细胞中的表达相关性和功能联系。方法:通过Oncomine或starBase数据库分析miR-21和RBM10表达数据,揭示其在人乳腺癌和对照组织中的表达差异;采用人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和永生化的人乳腺正常上皮细胞MCF-10A进一步分析miR-21和RBM10在乳腺癌细胞和正常乳腺细胞中的表达差异;采...

CD31启动子表达载体的构建与功能鉴定

作者：毛杨柳; 常振宇; 丁丽华; 刘婕; 叶棋浓 刊期：2018年第06期

目的:构建CD31启动子的绿色荧光蛋白和萤光素酶真核表达载体,转染至内皮细胞系HUVEC和BEND3细胞中,对其生物学功能和活性进行初步检测,作为鉴定内皮细胞的新方法。方法:从基因组中钓取CD31启动子的核酸序列,将其插入pGL4.0萤光素酶载体和慢病毒表达载体pCDH-copGFP,经限制性内切酶酶切和测序验证后瞬时转染HUVEC和BEND3内皮细胞系及对照MCF7乳腺...

利用报告基因的人7型腺病毒中和抗体检测方法的建立

作者：李建华; 王步森; 吴诗坡; 王玉东; 赵拯浩; 侯利华 刊期：2018年第06期

Vero细胞培养A/Shanghai/02/2013(H7N9)Va流感病毒适宜条件研究

作者：非成瑞; 马磊; 高菁霞; 崔兆海; 宋绍辉; 李卫东; 廖国阳 刊期：2018年第06期

目的:优化Vero细胞培养H7N9流感病毒的培养条件,建立细胞培养病毒高产培养系统。方法:采用不同病毒接种MOI、培养温度、pH值和TPCK胰酶等条件优化培养H7N9流感病毒Vero细胞适应株A/Shanghai/02/2013(H7N9)Va的条件,并将其连续传代后扩大至细胞工厂大规模培养。结果:Vero细胞高产H7N9流感病毒培养条件为DMEM/F12和MEM以1∶1混合,并添加0.3mg/mL牛...

一株耐铅菌株NY-3的分离鉴定及其吸附特性研究

作者：张晓青; 杜瑾; 曹军瑞; 司晓光; 张爱君; 任华峰 刊期：2018年第06期

目的:以天津滨海近岸沉积物为材料,进行耐铅优势菌株的分离鉴定,探讨影响菌株铅吸附的因素。方法:通过生理生化特征、16SrDNA序列相似性分析对菌株进行初步鉴定,考察pH值、吸附剂投加量、Pb^2+的初始浓度、吸附时间等不同条件下菌株对Pb^2+的吸附效果。结果:分离出一株耐铅菌株NY-3,鉴定为Oceanimonas sp.,菌株最大耐Pb2+浓度为300mg/L。在pH值...

CAR-T细胞制备过程中磁珠法激活T细胞条件的优化

作者：张章; 邱顺芳; 王潇霖; 丁乾; 王晶; 于长明; 徐俊杰; 张晓鹏 刊期：2018年第06期

目的:研究CAR-T细胞制备过程中,磁珠法体外激活人类原代T细胞的最佳条件。方法:新鲜分离的人外周血单个核细胞(PBMCs)与anti-CD3/CD28抗体包被的Dynabeads磁珠按3种不同的比例,于22℃混合孵育30min,以激活T细胞。随后,通过细胞自动计数,检测不同激活条件对细胞活力和直径的影响;利用流式细胞术检测CD3+T细胞所占比例;连续监测并绘制T细胞生长曲...

基于模板转换的微量RNA测序建库方案探索

作者：陆泓雨; 刘波; 秦超勇; 张彦 刊期：2018年第06期

目的:建立一套简便、对RNA样本起始量要求很低的RNA测序建库方法,在此基础上引入分子条形码技术,从而使RNA-seq的数据所反映的表达丰度更加客观真实。方法:将微量RNA用RNaseⅢ片段化后,利用反转录酶的反转录活性、模板转换活性以及DNA依赖的DNA聚合酶活性,一步实现从RNA到cDNA文库的反应,再通过PCR扩增获得适合测序仪的测序文库,通过测序分析验...

奥美拉唑诱导非小细胞肺癌细胞对新型分子靶向药物仑伐替尼的耐受

作者：王琳琳; 姜棋予; 秦萌萌; 马壮 刊期：2018年第06期

目的:检测奥美拉唑对新型分子靶向药物仑伐替尼杀伤非小细胞肺癌(NSCLC)的影响并阐明其分子机制。方法:体外培养人NSCLC细胞系A549和H460,用奥美拉唑处理细胞,检测奥美拉唑对芳香烃受体(AhR)转录因子活性及下游基因表达的影响;在此基础上用奥美拉唑及仑伐替尼处理A549、H460细胞,检测奥美拉唑对仑伐替尼杀伤A549、H460细胞的影响;培养A549、H460...

阿霉素载药微球在免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤组织内缓释作用与长效抗肿瘤活性研究

作者：武瑾; 赵鹏; 姜棋予; 马燕; 张木子荷; 李树; 王威; 郭妤姝 刊期：2018年第06期

目的:建立免疫缺陷大鼠肝脏原位肿瘤模型,以阿霉素为模型药物,在肿瘤组织注射吸附有阿霉素的载药微球,建立肿瘤组织内抗肿瘤药物缓释与长效作用的研究方法。方法:利用MHCC-97H高侵袭肝细胞癌细胞系在免疫缺陷裸鼠皮下成瘤后,解剖瘤块并切割,种植于免疫缺陷大鼠肝脏原位;进行开腹给药,将阿霉素载药微球精准注射进大鼠肝脏原位肿瘤组织中;收集大鼠...