首页 期刊 热带亚热带植物学报 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)cDNA文库构建及功能基因筛选 【正文】

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)cDNA文库构建及功能基因筛选

作者:李钢; 刘敏; 蒋彦; 乔代蓉; 曹毅 四川大学生命科学学院,四川成都610064
盐生杜氏藻   cdna文库   功能基因组学  

摘要:采用Qiagen公司的植物总RNA提取技术、Clonmch公司的Creator^-TM技术平台以及SMART^TM技术进行cDNA文库构建。从杜氏藻中提取出了高质量的总RNA,通过PowerScript反转录酶反转录杜氏藻的总RNA,采用LD-PCR、酶处理等方法对cDNA进行等比例扩增、纯化,同时使用CHROMA SPIN-400柱子将cDNA分段化,最后将长片段连入pDNR-LIB质粒,1.5kV,25μF电转化大肠杆菌JM109,得到含1.5×10^6个克隆子的原始文库,滴度为1.5×10^6cfu ml^-1。结合酶切和PCR,对该文库的质量进行了鉴定和统计,文库的平均片段插入长度为1.5kb。采用烯醇酶和UDP葡萄糖脱氢酶的EST作为同源探针,对文库中的功能基因进行筛选,并采用放射性原位杂交法,对扩增文库进行了初筛和复筛,得到了含这两条基因全编码序列的cDNA,烯醇酶为1.8kb,UDP葡萄糖脱氢酶为1.9kb,为今后对该种进行大规模功能基因组学研究奠定基础。

注:因版权方要求,不能公开全文,如需全文,请咨询杂志社

学术咨询 免费咨询 杂志订阅