摘要：原始生殖细胞（primordial germ cells, PGCs）作为精细胞的祖细胞，广泛用于研究精子的发生。成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor, FGF）家族对PGCs的形成至关重要。为了探究成纤维生长因子8（FGF8）的具体功能，本研究通过构建家鸡（Gallus domesticus） FGF8的短发夹RNA （short hairpin RNA, shRNA）慢病毒干扰载体，获得稳定低表达FGF8的鸡胚胎干细胞株，并进一步研究FGF8在鸡胚胎干细胞（embryonic stem cells, ESCs）向PGCs分化中的功能。根据家鸡FGF8的转录本设计3个RNA干扰靶点，连接到pGMVL-SC5干扰载体，瞬时转染鸡胚成纤维细胞DF1。以qRT-PCR技术检测各靶点对FGF8的干扰效率，将干扰效率最佳的shRNA载体进行慢病毒包装。在以慢病毒敲低FGF8的ESCs中进行视黄酸（retinoic acid, RA）诱导，观察各组细胞形态变化，收集不同时间的各组细胞，利用qRT-PCR、间接免疫荧光以及流式细胞术等方法，分析检测生殖相关标记基因的表达变化和PGCs形成效率。结果表明，FGF8慢病毒干扰载体构建成功，分别命名为shFGF8-1、shFGF8-2、shFGF8-3，其中shFGF8-2干扰效率最佳。将shFGF8-2进行慢病毒包装，获得滴度为5×108 TU/mL、干扰效率为（70±4.31）%的慢病毒载体。对于FGF8表达抑制的ESCs，体外RA诱导4 d后，PGC样细胞显著增加，ESC标记基因Nanog表达极显著下调（P＜0.01），PGC标记基因Cvh、C-kit表达极显著上调（P＜0.01）。此外，免疫荧光及流式细胞术分析结果也进一步证实，诱导4 d后与对照组比较，FGF8低表达使CVH＋PGCs比例显著增加（P＜0.01）。本研究成功构建了稳定转染鸡胚胎干细胞的FGF8特异性慢病毒载体，并证实FGF8在体外参与调控PGCs的形成。

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