首页 期刊 农业生物技术学报 胚柄特异性表达顺式元件结合蛋白酵母单杂交文库的构建 【正文】

胚柄特异性表达顺式元件结合蛋白酵母单杂交文库的构建

作者:宋国琦; 王兴军; 赵传志; 夏晗 山东省农业科学院高新技术研究中心山东省作物与畜禽品种改良生物技术重点实验室; 山东省作物与畜禽品种改良生物技术重点实验室; 农业部黄淮海作物遗传改良与生物技术重点开发实验室; 济南250100
胚柄特异基因   顺式元件   酵母单杂交  

摘要:旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因G564启动子顺式元件结合的转录因子。本研究根据植物胚柄特异表达基因G564启动子关键序列(GAAAAGCGAA)合成了5次串联重复序列,并与报告质粒pHIS2.1连接构建诱饵载体pHIS2.1-G564-5A;以纯化的拟南芥(Arabidopsis thaliana)幼嫩种子mRNA为模板,合成SMARTTMⅢ和CDSⅢ锚定末端dscDNA;并将dscDNA与线性化融合表达载体pGADT7-Rec2以及诱饵载体pHIS2.1-G564-5A共转化到酵母Y187,构建酵母单杂交文库。文库的共转化效率为5.53×10^5cfu/μg。对文库中的阳性克隆进行测序,获得117条可读序列。对其进行基因功能注释并进一步分析基因的功能发现,具有DNA结合功能的蛋白14个,具有蛋白质结合功能的蛋白8个。上述22个蛋白包括TATA结合蛋白1(TBP1),支架结构相关区(SAR)DNA-结合蛋白,胚珠发育蛋白,G-box结合因子1(GBF1),组蛋白H3等。本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因。

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