首页 期刊 农业生物技术学报 香鱼抗凝血酶基因(AT)cDNA的克隆、序列分析及组织表达特征 【正文】

香鱼抗凝血酶基因(AT)cDNA的克隆、序列分析及组织表达特征

作者:李长红; 陈炯; 史雨红; 陆新江 宁波大学应用海洋生物技术教育部重点实验室; 宁波315211
抗凝血酶   克隆   序列分析   组织表达特征   实时荧光定量pcr  

摘要:抗凝血酶(antithrombin,AT)主要抑制凝血酶(thrombin)及其它凝血因子的活性,并具有重要的抗炎活性。本实验从香鱼(Plecoglossus altivelis)肝组织cDNA文库中成功获得了香鱼AT基因的cDNA全序列(EMBL登录号:FN429980)。测序结果表明,香鱼AT基因cDNA全长1487个核苷酸,包含1个大的开放阅读框(ORF),推测编码1个由453个氨基酸组成的蛋白,N端23个氨基酸为信号肽序列。成熟AT具有与哺乳动物AT相似的特征结构,包括:羧基末端附近的丝氨酸蛋白酶活性中心、6个保守的Cys残基形成的3个二硫键结构和4个N-糖基化位点。氨基酸序列分析表明,香鱼AT与大西洋鲑(Salmo salar)AT氨基酸序列同源性最高,为81%。系统进化树分析表明,物种AT的进化关系与目前接受的物种分类关系基本一致,香鱼AT位于鱼类AT簇中,与大西洋鲑、红鳍东方豚(Takifugu rubripes)和斑马鱼(Danio rerio)AT进化相关性最高。AT mRNA在健康香鱼的肝组织中表达量最大,在脾、肾和脑中表达量较低。实时荧光定量PCR结果表明,在鳗利斯顿氏菌(Listonella anguillarum)侵染4和8h的香鱼肝组织中AT mRNA表达量显著下调(P〈0.05),但随着病程发展,12~36h,AT mRNA表达水平显著上调(P〈0.05),揭示AT是一个病程相关蛋白,并参与香鱼细菌感染导致的急性期反应。

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