摘要：以苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)4.0718菌株伴孢晶体65 kD原毒素为材料,比较了几种染色-脱色方法对电洗脱回收蛋白的影响.蛋白纯化的步骤包括SDS-PAGE分离、采用自制蛋白回收装置电洗脱回收杀虫晶体蛋白及抗胰蛋白酶核心多肽、超滤法脱盐、冷丙酮沉淀法除去考马斯亮蓝及SDS.经SDS-PAGE检测,呈现出均一的蛋白带,回收蛋白达到了电泳纯.以双向凝胶电泳(2-DE)技术分析了苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种HD-1和4.0718菌株伴孢晶体内的蛋白质组分.结果表明,两者相互匹配的蛋白点有54个,HD-1菌株的130kD亚基有2个点,其等电点在5.25～5.75之间,65kD亚基在等电点3.4～8.3之间具有广泛的分布,130与65 kD之间的亚基的等电点集中在3.5～4.2之间,65 kD以下亚基的等电点集中在3.5～6.2之间;4.0718菌株的130 kD亚基仅有1个点,65 kD亚基的蛋白点比HD-1菌株更多,130与65 kD之间的亚基、65 kD以下的亚基蛋白点均比HD-1菌株多且等电点分布范围更广.

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