摘要:提取地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)基因组,通过PCR克隆了该菌的β-1,3-1,4.葡聚糖酶基因全长。该基因全长818bp,ORF为732bp,编码243个氨基酸,计算分子量为27.35kD,等电点为8.31。经Blast分析,该序列与短小芽孢杆菌(B.pumilus)同源性最高(99%),而与基因库中地衣芽孢杆菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225317)。用BamHI和XhoⅠ双酶切目的片断和表达载体pET-30a(+)后相连接,构建重组表达载体pET-lic,并导人大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中表达。酶学特性表明:SDS-PAGE电泳在27kD左右有表达蛋白带,该工程菌总酶活达67.34U/mL,是出发菌的60倍,最适温度在50℃左右,最适pH在5~6之间。该工程菌可作为材料构建耐热性好和酶活高的杂合基因工程菌。
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