首页 期刊 农业生物技术学报 利用Cre/loxp定位重组系统构建雄性不育基因和恢复基因表达载体 【正文】

利用Cre/loxp定位重组系统构建雄性不育基因和恢复基因表达载体

作者:宋洪元; 曹必好; 丁建刚; 雷建军; 宋明 西南农业大学园艺园林学院,重庆400716; 华南农业大学园艺系,广州510642
基因表达载体   雄性不育基因   系统构建   定位   除草剂basta  

摘要:结合Cre/lox定位重组系统和杂种一代的育种特点,构建了反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pCABARTAAct和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pSTAAct中的反义肌动蛋白雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、反向插入TA29启动子下游的Actin基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp两个同向lox位点之间,再将上述表达盒连同lox位点切下插入pcAMBar,获得以除草剂Basta为筛选剂的反义肌动蛋白雄性不育基因表达载体pcABARTAAct。PCR方法从溶原菌BM25.8基因组DNA扩增出Cre基因,克隆测序验证无误后插入PBl525 CaMV35S-35S双启动子和Nos终止子之间,再将表达盒切下插入pBINPLUS质粒相应位点,得到恢复基因植物表达载体pBINPLUSCre。

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