摘要：Bt25是中国自行分离的对小菜蛾(Plutella xylotella)具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)，经PCR-RFLP鉴定含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法，设计1对特异引物，以Bt25质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因。序列测定结果表明，该基因编码区为3552bp，编码1183个氨基酸，分子量为133．7kD，pI4．755。该基因序列已在GenBank注册，登记号为AY197341，并获得正式命名cry1Aa14。在氨基酸序列918～1180间，和已知的11种cry1Aa存在22-23个氨基酸的差异(其中1094～1097的4个氨基酸无对应序列)，而这段区域和Cry1Ab氨基酸序列的对应区域无差异。cry1Aa14全长基因插入Bt表达载体，获得了重组表达质粒pBYB1，转化Bt无晶体突变株HD73cry-，经过抗性筛选、DNA酶切分析和PCR检测，证实转化成功。SDS-PAGE分析表明，该基因在上述受体中能正常表达133kD蛋白。杀虫生物测定结果表明，cry1Aa14表达产物对小菜蛾幼虫具有显著的毒杀作用，与cry1Aa12进行比较，毒力无明显差异。这种单基因菌株的发现及其基因的获得，为害虫抗性研究和高效工程菌的构建提供了重要实验材料。

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