摘要:以萱草属的3种植物为材料,对影响ISSR—PCR扩增效果的因素Taq酶用量、Mg^2+浓度、dNTP用量、引物用量、模板DNA浓度以及退火温度等指标进行单因子筛选和优化,建立了适合萱草属植物ISSR—PCR分析的最佳PCR反应体系:20μL反应体系中Taq酶0.6U、Mg^2+ 1.8mmol/L、1×Buffer 2μL、dNTP0.2mmol/L、引物0.6mmol/L、DNA模板10ng/μL。扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性40s,52℃退火45s,72℃延伸1.50min,共39个循环;72℃完全延伸5min,4℃保持。该反应体系及扩增程序扩增谱带清晰,产物量多,为利用ISSR—PCR分子标记研究萱草属植物的遗传多样性提供标准反应条件。
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