作者:卓一南; 曾湘达; 李俊仁; 何瑞; 詹若挺 期刊:《分子植物育种》 2018年第12期
为建立穿心莲甲基化敏感扩增多态性(methylation sensitivity amplification polymorphism,MSAP)反应体系,本研究以穿心莲叶片为材料,提取总基因组DNA,采用L25(55)正交试验对穿心莲MSAP的预扩增和选择性扩增的相关参数进行了优化,并对MSAP引物进行了筛选,以期建立穿心莲MSAP最佳反应体系。优化后的体系具有稳定的图谱,清晰丰富的条带。运用优化后的体系,在穿心莲MSAP的80对引物中筛选出8对有效引物。筛选出的引物组合特异性良...
作者:王晓醒; 李淑娟; 谢永丽; 李长慧 期刊:《江苏农业科学》 2017年第16期
利用梭罗草(Kengyilia thoroldiana)基因组DNA优化并建立的梭罗草扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,简称AFLP)反应体系。预扩增反应体系25μL:连接产物1μL,10×PCR Buffer 2.5μL,d NTP 0.375μL,Mg~(2+)1μL,Taq DNA聚合酶0.5μL,EcoRⅠ预扩引物1μL,MseⅠ预扩引物1.2μL,dd H2O加至25μL;选扩增反应体系25μL:预扩产物(稀释20倍)2.0μL,10×PCR Buffer 2.5μL,d NTP 0.60μL,Mg~(2+)2μL,Taq DNA聚合酶...
作者:李剑峰 张跃强 樊哲儒 王岩军 王浩 曲延英 范玲 期刊:《新疆农业科学》 2010年第03期
【目的】建立并优化小麦叶片cDNA—AFLP扩增反应体系,进行cDNA—AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因。【方法】在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA—AFLP的试验中,分别对20μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg^2+及TaqDNA聚合酶的用量。【结果】PCR预扩增20止反应体系中,引物(40mM)1.0μL、dNTP(2.5mM)1.8μL、Mg^2+(25mM)2.2μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5μ...