作者:李刚; 清源; 张守武 期刊:《信息周刊》 2018年第23期
原生质体是组成细胞的一个形态结构单位,香菇的原生质体是指脱去细胞壁的香菇细胞,对香菇进行诱变育种是指通过物理的辐射作用以及化学反应的方法,诱发植物体产生遗产变异,然后再对变异体进行 直接筛选或者利用突变体进行杂交,从而形成新的香菇品种。在香菇的生产中采用此育种方法是因为其突变率较高,变异普广泛,而且诱变育种可以产生点突变,能够有效改进品种的个别性状,对提升香菇的品质以及产量具有重要意义。不仅如此,其具有变...
作者:江银辉; 杨碧; 吴昌学; 周建奖 期刊:《贵州医科大学学报》 2019年第12期
目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用聚乙二醇(PEG)介导黄曲霉菌原生质体转化法,将携带ptrA的质粒pPTRI整合到黄曲菌株LD-F基因组DNA中,随机挑选7个转化子,通过聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,验证ptrA是否整合到黄曲菌基因组DNA中。结...
作者:赵明阳; 徐玲玲; 邓百万; 周敏; 吴一凡 期刊:《辽宁农业科学》 2019年第06期
通过正交设计法探究了菌丝体菌龄、酶液浓度、稳渗剂种类、酶解时间等不同因素对天麻萌发菌原生质体制备的影响。结果表明,稳渗剂种类对天麻萌发菌原生质体制备产量的影响最显著;天麻萌发菌菌丝体在改良PDB液体培养基中25℃培养3 d,该菌丝最适于原生质体的制备;其最优制备条件为MNM作为稳渗剂、酶液浓度1.0%、酶解时间7 h,此时原生质体产量最大,达到11.17×10^6个/ml。
作者:张娅; 刘晓烽; 张婧; 何弦; 袁媛; 吕美玲; 黄晨星; 郑祥梓; 缪颖; 伍炳华 期刊:《福建农林大学学报·自然科学版》 2019年第06期
探索了茉莉花原生质体瞬时转化的方法,发现室外种植盛开的茉莉花花瓣更适于分离有活力的原生质体,在15 g·L^-1纤维素酶、8 g·L^-1果胶酶和4 g·L^-1离析酶共同作用下,于25℃黑暗条件酶解5 h,所获得的原生质体产量和活性最佳.当细胞浓度为4×10^5个·mL^-1,外源质粒DNA含量为75μg·mL^-1原生质体时,在200 g·L^-1的PEG-4000介导转化2~10 min,可获得较高的转化效率.利用本研究建立的茉莉花原生质体瞬时转化体系成功鉴定了3个茉莉花来源蛋...
作者:王珺华; 王凯琪; 王凯; 孙志宏; 曹园; 齐向英 期刊:《中国农学通报》 2019年第34期
本研究旨在建立山丹高效原生质体分离体系,为山丹种质资源的有效利用提供科学依据。以山丹鳞茎胚性愈伤组织为材料,通过酶解法获得山丹原生质体,进一步采用3因素4水平L16(34)正交试验,对原生质体分离条件进行优化研究。结果表明:(1)在预处理条件下(0.015 g/mL纤维素酶+0.005 g/mL果胶酶+0.65 mol/L甘露醇)得出最佳酶解时间为6 h,产量为3.47×10^6个/g。(2)对正交试验结果进行极差分析,确定原生质体产量主次因素为纤维素酶浓度>果胶...
作者:康林芝; 熊荣园; 金磊; 唐惠妍 期刊:《食品研究与开发》 2019年第19期
以菌龄5 d的菌丝体为原料,采用1.5 %溶壁酶和1.5 %蜗牛酶酶液,酶解3 h,酶解温度为30 ℃,0.6 mol/L KCl为渗透压稳定剂,制备得到金针菇和平菇原生质体。两种原生质体融合后,25 ℃静置培养2 d随后涂布于再生培养基。以34 ℃菌丝培养温度作为标记筛选出融合子,融合的细胞在马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar,PDA)培养基中实现再生,通过菌丝形态、细胞学观察、拮抗性试验、出菇试验验证再生出的为融合子,最终从18个再生菌株中选择...
作者:林晓波; 李浩明 期刊:《广东药科大学学报》 2007年第01期
目的探索构建洛伐他汀高产菌株的原生质体制备和融合方法。方法考察了各种细胞裂解酶和渗透压稳定剂等对红曲霉和土曲霉的原生质体制备、灭活及融合的影响。结果和结论土曲霉和红曲霉在加石英砂混合酶体系中获得的原生质体数最多,而最适宜的渗透压稳定剂为0.6mol/L的NaCl。红曲霉的原生质体在紫外灯(18w)下15cm照射50min和土曲霉的原生质体在60℃水浴下保持40min灭活率均达到100%。最适合红曲霉和土曲霉的原生质体融合的条件...
作者:梁威; 李磊; 何梦玲; 严寒静 期刊:《广东药科大学学报》 2016年第02期
目的探讨广藿香悬浮细胞原生质体分离与纯化过程中的影响因素。方法以广藿香悬浮细胞为材料,采用酶解法分离原生质体,结合过滤法和离心沉降法进行纯化,测定原生质体产量和活力,考察酶液组合、酶解时间、渗透压调节剂甘露醇浓度、悬浮细胞继代培养时间、不同孔径滤网和离心条件的影响。结果将继代培养9~14 d的悬浮细胞在质量浓度分别为1.5%纤维素酶、0.8%果胶酶、0.5%半纤维素酶,渗透压调节剂甘露醇浓度为0.4 mol/L条件下,避光振荡...
作者:焦旭雯; 赵树进 期刊:《热带亚热带植物学报》 2006年第04期
流式细胞术(FCM)是根据所测定的各种细胞性质的不同组合,从细胞群体中把某个亚群分选出来,并对它的功能和形态学进行研究或进一步培养分析。流式细胞术具有快速、灵敏和同时进行多参数检测等优点,对其基本原理和在高等植物中的应用进行了介绍。
作者:丁艳娇; 李晓明; 谢嵩; 刘秀菊 期刊:《南开大学学报·自然科学版》 2019年第05期
通过研究白色念珠菌菌龄、预处理剂、酶解温度、裂解酶种类、酶解时间等不同因素对白色念珠菌SC5314原生质体制备的影响,确定了其原生质体制备的条件:选用菌龄为12 h的菌体,用50 mmol/L EDTA+5%巯基乙醇(体积比)+50 mmol/L Tris (pH=8.0)的复合预处理剂进行预处理,用0.7 mmol/L的Na Cl作为渗透压稳定剂,1%的蜗牛酶+1%的纤维素酶+1%的溶壁酶在30℃的条件下酶解120 min.在此条件下,其原生质体制备率高达98%.
作者:王进; 陈文强 期刊:《陕西理工大学学报·自然科学版》 2014年第05期
以秦巴山区黑木耳主要栽培菌株为材料,采用不同紫外照射时间和温度梯度筛选高温黑木耳品种。结果表明,黑木耳原生质体紫外诱变的最佳时间为120-180 s,再生菌落的致死率为64%-82%,通过40℃高温初步筛选得到适合秦巴山区栽培的黑木耳菌株YBZ4。
作者:尹海滨; 王婷; 郑萍 期刊:《广州化工》 2010年第07期
采用长梗木霉(Trichoderma Longibrachiatum Rifai)958-11菌株,经过发酵,分离提纯出一种真菌细胞溶壁酶,并对其进行酶学性质研究。长梗木霉培养,利用:(NH4)2SO4沉淀,sartobind S离子交换层析和Sephacryl S-200柱层析对该发酵液进行分离纯化,用担子菌做为酶反应的底物研究该酶的酶学性质。经发酵获得的酶液,可在最佳反应条件下,1~2h内产出原生质体105~106个/毫升酶液。酶反应最适温度为30℃,最适pH为5.4,可以在0.6mol/L的氯...
作者:李丹; 梁丹; 任相亮; 高月; 王火旭 期刊:《安徽农学通报》 2009年第23期
以非洲菊叶片为材料,采用正交实验方案对非洲菊叶片原生质体分离条件进行研究,经综合分析结果表明:以1.0%的纤维素酶和0.75%的果胶酶为混合酶液、6%的甘露醇为渗透压稳定剂的条件下,酶解5h能达到较好的分离效果,获得高质量的非洲菊叶片原生质体。
作者:姚继承; 王诚; 左正宏; 林芳; 陈奕欣 期刊:《海洋科学》 2005年第11期
利用60Co-γ射线对坛紫菜(Porphyra haitanensis)原生质体进行辐照诱变,发现原生质体对60Co-γ射线有极强的耐受性.前期的培养结果表明,原生质体是一种理想的诱变材料.诱变结果表明,60Co-γ射线对坛紫菜可诱变剂量范围很大,从200~1 300 Gy均有突变株生成.诱变后细胞的存活率不宜作为坛紫菜诱变最佳剂量的指标.
作者:李继洋; 雷建峰; 代培红; 姚瑞; 曲延英; 陈全家; 李月; 刘晓东 期刊:《作物学报》 2018年第02期
CRISPR/Cas9基因组编辑技术是基因功能研究的一种强有力的工具,目前已在许多生物体中成功实现内源靶向基因的突变。利用已克隆的海岛棉新海16的2个U6启动子,分别构建带有新海16内源基因(GbGGB和GbERA1)靶位点DN段的CRISPR/Cas9基因编辑载体。以新海16的胚性愈伤组织为供试材料,制备海岛棉的原生质体。通过PCR方法大量富集构建好的CRISPR/Cas9基因编辑载体的核心片段(包括GbU6::sgRNA和CAMV35S::Cas9两部分),并利用PEG法转化海岛棉...
作者:张荟蓉; 周志义; 耿安利 期刊:《武汉工程大学学报》 2018年第06期
为了建立以聚乙二醇/氯化钙(PEG/CaCl2)原生质体介导的柄蓝状菌(Talaromyces Stipitatus)高效的遗传转化系统,分别从材料选择,真菌菌龄,不同的渗透压稳定剂,酶的不同种类配比,酶的浓度,酶解时间及不同再生方式对柄蓝状菌EMM原生质的制备与再生条件进行优化。结果表明:以柄蓝状菌EMM接种生长48 h的菌丝为制备材料,1 mol/L MgSO4作为渗透压稳定剂,菌丝在温度为30℃,浓度为50 mg/mL的裂解酶溶液中酶解3 h,得到的原生质体先用再生培养...
作者:李素丽; 宋亚妮; 李志刚; 刘芳君; 赖沛衡; 覃潇怡; 李嘉俊 期刊:《广西植物》 2019年第04期
为了获得活力高和再生能力强的甘蔗原生质体,该文对甘蔗原生质体的冻存液浓度、冻存温度和冻存部位进行了研究。结果表明:(1)不同的冻存液、不同的冻存温度和不同的取材部位原生质体冻存后复苏对甘蔗原生质体的活力影响有显著差异性,三个冻存液组合比较,在组合2(70%培养基+20%血清+10%DMSO),冻存30 d后复苏活力最强,高达72%;冻存90 d内复苏,-196℃液氮和-80℃冰箱冻存,甘蔗原生质体的活力差异不显著,活力均在75%以上,但90 d冻存后...
作者:王伟伟; 肖燕; 张艺夕; 刘晶; 唐唯; 李灿辉 期刊:《生物技术通报》 2018年第04期
为明确致病疫霉的致病机理需要建立高效的病原菌原生质体制备和再生体系。通过对马铃薯晚疫病菌制备和再生过程的研究,采用两种裂解酶Driselase和Cellulase R-10,以不同菌龄、裂解酶、裂解酶的浓度和裂解酶的反应时间为研究条件,得到原生质体制备的最佳条件为:以培养18 d的菌丝体为材料,用10 mg/m L Driselase处理菌丝60 min后,原生质体产量达9.5×104个/g;以0.1 mol/L氯化钙和0.4 mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,以黑麦V8固体再生培...
作者:宋爱环; 李红叶; 刘小红 期刊:《农业生物技术学报》 2004年第02期
通过对制备材料、酶液浓度、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂的种类和浓度等因素的实验研究,得到了一种制备指状青霉(Penicillium digitatum)原生质体的有效方法,并在双层培养基上初步实现了原生质体的再生,再生率可达24.9%。此外,还对原生质体的释放和再生方式进行了跟踪观察。原生质体释放有顶端、侧端和原位释放3种方式。原生质体的再生有2种方式,一种是原生质体一端突出形成酵母出芽状细胞;另一种是在原生质体一端直...
作者:胡繁荣 期刊:《农业生物技术学报》 2005年第02期
利用转基因技术,将目的基因导入愈伤组织或原生质体,获得转基因植株提高抗逆性,已成为匍匐翦股颖遗传改良的重要手段(郭振飞和卢少云,2002).本实验利用农杆菌介导法,将经过改良的抗虫Bt基因cry1Ab导入匍匐翦股颖,初步建立了匍匐翦股颖遗传转化体系.