作者:周磊; 李雅权; 徐永清; 苗宇; 贺付蒙; 朱元芳; 石奇海; 武佳文; 赵潇璨; 李秀钰; 冯哲; 刘娣; 冯艳忠; 胡宝忠; 李凤兰 期刊:《食品工业科技》 2020年第05期
作者:杨柳慧; 尹航; 黄沁梅; 张彦妮; 何淼; 周蕴薇 期刊:《草业学报》 2020年第01期
以细叶百合LpWRKY20基因为研究对象,通过荧光定量(qRT-PCR)分析该基因在不同非生物胁迫中的表达,结果表明,在不同非生物胁迫中该基因表达量存在差异。利用叶盘法将pBI121-LpWRKY20-GFP植物表达载体转入烟草并获得转基因株系。在干旱胁迫条件下,转基因植株的表型优于野生型;转基因植株超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性均高于野生型,且随着时间的延长这种清除体内自由基的能力在显著升高,而丙二醛(MDA)含量均低于野生型,说...
作者:耿云红; 奇日迈励图; 鲁迪红; 池友健; 贾宏; 赵素然; 白艳玲 期刊:《生物学通报》 2006年第11期
对莱因衣藻衣藻核遗传转化关键技术中的衣藻对数生长期确定、玻璃珠性质及振荡操作环节进行了研究,建立了既简便、廉价,又稳定、有效的衣藻核遗传转化系统方法。该方法适用于高等院校本科生遗传学实验教学,其涉及的实验技术可成为培养学生综合实验技能的理想教学内容。
作者:江银辉; 杨碧; 吴昌学; 周建奖 期刊:《贵州医科大学学报》 2019年第12期
目的:以吡啶硫胺抗性基因(ptrA)为筛选标记基因,建立黄曲菌遗传转化体系。方法:通过黄曲霉菌对潮霉素B(Hyg)、新霉素(G418)和嘧啶磺胺素(PT)的敏感性实验获得适合黄曲霉菌遗传转化筛选抗生素,用酶解的方法获得黄曲霉菌的原生质体;采用聚乙二醇(PEG)介导黄曲霉菌原生质体转化法,将携带ptrA的质粒pPTRI整合到黄曲菌株LD-F基因组DNA中,随机挑选7个转化子,通过聚合酶链反应(PCR)方法进行检测,验证ptrA是否整合到黄曲菌基因组DNA中。结...
作者:董振杰; 麦艳娜; 夏晴; 马超; 田修斌; 李欢欢; 刘文轩; 宋玉立 期刊:《河南农业科学》 2019年第11期
为了筛选可利用寄主诱导基因沉默(HIGS)技术防治小麦全蚀病的靶基因,利用RNA干涉(RNAi)技术探讨了编码龙胆酸1,2-双加氧酶(Gentisate 1,2-dioxygenase,GDO)的gdo基因沉默对小麦全蚀病菌KX-7菌丝生长速率和致病能力的影响。结果表明,gdo基因沉默明显抑制全蚀病菌的生长速率,参试30个转化子在PDA平板上的相对生长速率只有野生型对照的20.00%~87.00%。gdo基因沉默转化子使小麦致病力下降,但转化子之间有明显差异。侵染小麦28 d后,L-4...
作者:陈蒙; 刘海峰 期刊:《西南大学学报·自然科学版》 2019年第10期
通过生物学技术来研究C4H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coliBL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4H基因...
作者:张园; 刘正杰; 林春; 闫亚泽; 袁加红; 王入; 毛自朝; 杨焕文 期刊:《西北农业学报》 2020年第01期
通过优化根癌农杆菌EHA105(含有pBI121表达载体)介导的茎尖遗传转化条件,包括抑菌抗生素类型及浓度、农杆菌浓度、侵染时间、共培养时间、卡那霉素浓度等影响因素,建立芦笋品种‘达宝利’遗传转化体系。以0.1~0.3 cm长的芦笋茎尖为转化受体,用MS液体培养基(MS+蔗糖3%+乙酰丁香酮150μmol·L-1)悬浮菌体至OD 600为0.6,侵染茎尖15 min,20℃避光共培养4 d;抗性茎尖在筛选培养基(1/2 MS+IBA 0.5 mg·L^-1+KT 0.1 mg·L^-1+嘧啶醇0.5 mg·L^-...
作者:王丽平; 谌琴琴; 梁瑾; 杨攀攀; 王强 期刊:《分子植物育种》 2019年第18期
传统药材千里光化学成分复杂,富含生物碱、黄酮和萜类等化合物,极具药用价值。为了提高千里光次生代谢产物的含量,增加千里光药用价值,实现千里光资源的科学利用,本研究进行了千里光组织培养体系的构建和遗传转化初探。本实验以千里光幼嫩茎叶为外植体,通过不同浓度6-BA和NAA的组合,得到最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,出愈率达92%;得到最佳分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg...
作者:何福收; 邵敏敏; 葛晟昕; 陈阁; 陈同; 王春台; 徐鑫; 谭艳平 期刊:《分子植物育种》 2019年第17期
结合重测序、图位克隆技术和转录组测序得到了一个水稻黄叶突变的候选基因,预测该基因是一个编码镁离子螯合酶Ⅰ亚基的未知功能基因,植物叶绿体镁离子螯合酶是四吡咯化合物生物合成途径中合成叶绿素分支(镁分支)的第一个酶。本研究利用CRISPR-Cas9技术,采用一步法构建该基因的pC1300-Cas9-12976重组载体。将该重组载体进行农杆菌介导的水稻遗传转化,得到T0代转基因植株的阳性,完成转基因植株中目的基因的序列分析。结果表明,T0-Cas...
在植物遗传转化研究的进展中,因根癌农杆菌具有转入的外源DNA结构完整、外源基因表达比较稳定、经济简便、技术仪器要求低等优势,成为了目前应用较为广泛的转基因技术。对根癌农杆菌介导单子叶植物的发展状况、影响因素和提高转化效率进行了综述,以期为提高单子叶植物遗传转化效率和转化技术提供参考依据。
作者:麻冬梅; 秦楚 期刊:《草业学报》 2018年第06期
本研究采用基因工程技术改良紫花苜蓿耐盐性,通过种植转基因耐盐紫花苜蓿达到改良土壤的目的。以紫花苜蓿子叶节为外植体,通过农杆菌介导法将来源于拟南芥的AtSOS1-AtSOS2-AtSOS3多基因表达载体导入阿尔冈金紫花苜蓿中,经PCR检测、抗除草剂筛选和RT-PCR鉴定,获得了能稳定表达的转基因株系。以转基因的紫花苜蓿和野生型紫花苜蓿为材料进行盐处理,每个处理重复3次,测定其生理生化指标、株高、Na+和K+含量、细胞膜透性、叶绿素含量...
作者:陈冉冉; 朱娉慧; 贾博为; 宋雪薇; 王子君; 李佶娜; 李强; 丁晓东; 朱延明 期刊:《草业学报》 2017年第09期
本研究基于实验室前期野生大豆碱胁迫转录组数据,筛选出一个碱胁迫下上调表达的假定蛋白基因,暂命名为GsARHP(alkali stress related hypothetical protein gene)。首先利用Real-time PCR方法验证了GsARHP基因受碱胁迫诱导表达。生物信息学分析表明,该基因编码一个含有130个氨基酸的亲水蛋白,含有信号肽但无跨膜结构域;构建了GsARHP植物超量表达载体,利用农杆菌介导的子叶节侵染法转化肇东紫花苜蓿,通过PCR,Southern Blot和RT-PC...
作者:吴雪莉; 刘金星; Klaus; K; Nielsen; 杨志民; 高彩霞 期刊:《草业学报》 2010年第05期
以二穗短柄草3个品系BDR018,BD21,BD21-3的幼胚为外植体,研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再生的影响。采用携带gus和bar基因双元表达载体(pDM805)的根癌农杆菌菌株AGL1对BDR018品系的幼胚愈伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响幼胚愈伤组织诱导再生及遗传转化的几个因素。结果发现,幼胚大小介于0.5~1.0mm之间的愈伤组织诱导率最高。随愈伤组织年龄的增加,BDR018,BD21,BD21-3愈伤组织的再生率下降,白化率上升。愈伤组织...
作者:谷俊涛; 李金才; 韩胜芳; 肖凯 期刊:《草业学报》 2007年第04期
利用子叶下胚轴为外植体,通过农杆菌Ti 质粒介导遗传转化途径,建立了表达白羽扇豆酸性磷酸酶基因(APase)的白三叶草转基因系.PCR检测发现,APase基因已整合到转基因植株的基因组中.Northern印迹分析表明,APase基因在部分转基因系中高水平表达.此外,在异源表达APase的白三叶草中,位于APase上游的Patatin信号肽具有将翻译产物引导至细胞间隙和根际的能力.在以植酸盐为唯一磷素供源的条件下,与转化空载体的对照植株相比,高水平表达AP...
作者:胡可; 严雪锋; 栗丹; 唐晓梅; 杨宏; 王艳; 邓洪渊; 马欣荣 期刊:《草业学报》 2013年第05期
木质素作为维管植物的重要成分之一,主要存在于细胞的次生壁中。然而,木质素却是许多工农业加工过程的限制因素,例如在化学制浆、牧草消化以及木质纤维转化为生物酒精等过程中。肉桂酰辅酶A还原酶(CCR)和肉桂醇脱氢酶(CAD)是催化木质素单体生物合成最后两步的关键酶。本研究根据NCBI中黑麦草CCR和CAD基因序列设计特异引物并添加相应酶切位点,从野生型多年生黑麦草cDNA分离克隆CCR和CAD基因片段,分别构建了含正反方向目的片段的...
作者:姜霁珊; 方志红; 陈敏; 王运琦; 吴欣明; 贾慧丽; 武语迪; 高洪文; 王学敏 期刊:《草业学报》 2017年第03期
维生素E是一种人体必需,却不能自主合成的脂溶性维生素。尿黑酸植基转移酶(HPT)是维生素E生物合成途径的关键限速酶,直接影响植物体内维生素E的总量。本实验利用同源克隆的方法,根据截形苜蓿的序列从紫花苜蓿中克隆得到HPT基因的完整开放阅读框(ORF)。NCBI Blast分析结果表明,该基因编码412个氨基酸,属于异戊烯转移酶UbiA超家族。多序列比对结果表明,该序列与其他物种的HPT蛋白序列相似度高达80%,将其命名为MsHPT。进化树分析...
作者:乔定君; 毛萍; 马欣荣; 杨宏 期刊:《草业学报》 2011年第01期
多年生黑麦草是优良的牧草和草坪草。农杆菌介导多年生黑麦草遗传转化非常困难。为了建立稳定的多年生黑麦草遗传转化体系,本研究以品种"多福"种子成熟胚为外植体诱导愈伤组织,携质粒pCAMBIA2301的根癌农杆菌EHA105介导,进行遗传转化。在预培养及共培养基中添加0.1mol/L甘露醇或5mg/L硝酸银,并分析了二者对转化的影响。经巴龙霉素筛选、PCR及GUS组织染色检测表明,共获得了转基因植株38株。添加0.1mol/L甘露醇或5mg/L AgNO3或0.1m...
作者:麻冬梅; 秦楚; 倪星; 许兴; 郭伶娜 期刊:《草业学报》 2016年第12期
本研究在2015年采用基因工程技术改良高羊茅耐盐性,通过种植转基因耐盐草坪草达到改良土壤改善生态环境的目的。以草坪草成熟种子诱导的胚性愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法将拟南芥AtSOS途径基因AtSOS1、AtSOS2-AtSOS3和AtSOS1-AtSOS2-AtSOS3分别导入高羊茅爱瑞3号中,经PCR检测、Southern blotting分析和RT-PCR鉴定,获得了能稳定表达的转基因株系。以转不同组合AtSOS基因的高羊茅植株和野生型植株为材料进行盐处理,每次处理重复3...
作者:徐春波; 王勇; 赵海霞; 米福贵 期刊:《草业学报》 2012年第04期
为研究冷诱导转录因子CBF1(C-repeat-binding-factor)基因对我国优良豆科牧草紫花苜蓿的抗寒性改良作用,本实验以拟南芥基因组DNA为模板,利用PCR方法克隆得到了冷诱导转录因子AtCBF1基因,测序结果表明所克隆的DN段长度为642bp,将该序列与GenBank上的CBF1基因序列进行DANMAN序列比较分析,同源性可达99.84%。在此基础上成功构建了含有AtCBF1基因的植物表达载体pBI121-CBF1,并采用根癌农杆菌介导法对紫花苜蓿进行了遗传转化,获得了...
作者:张改娜; 贾敬芬 期刊:《草业学报》 2009年第03期
本研究用PCR方法从豌豆(食荚大菜豌)克隆出富含硫氨基酸、同时具有抗虫作用的双功能的蛋白质基因-豌豆清蛋白1(PA1)基因,并构建了植物表达载体pCAMBIAl301-PA1。采用农杆菌介导法转化了紫花苜蓿,并对其转化体系进行了优化,得到了多个转基因胚性愈伤组织及其再生植株。PCR和Southern杂交检测表明,PA1基因和潮霉素抗性基因已被整合到了宿主细胞。SDS-PAGE分析表明该基因在再生植株中有一定表达。游离氨基酸分析表明,PA1基因的表...