作者:冯玮; 涂小林 期刊:《中国修复重建外科》 2020年第02期
作者:孟媛; 王红雷; 任晓莉; 刘丽 期刊:《中国美容医学》 2017年第10期
目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)滋养层对小鼠诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)适宜的培养条件及其作用机制.方法:取E12.5~14.5d ICR孕鼠,培养小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs),制备滋养层,收集第2~3代(P2~P3)和第6代(P6)培养2~4d MEFs滋养层细胞培养基(MEF-CM),ELISA检测P2~P3和P6 MEF-CM中Activin A、白血病抑制因子(leukemia inh...
作者:王涵; 邵英; 朱茄慧; 廖云鹏; 马妍; 任文艳; 周林云; 吴柯; 何百成 期刊:《中国药理学通报》 2018年第10期
目的 探讨罗格列酮(RSG)与全反式维甲酸(ATRA)对干细胞定向骨分化的影响,并初步解析这一作用的可能分子机制。方法 通过定量PCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测相关成骨与成脂分化标志物的变化情况;利用荧光素酶报告质粒,检测Runx2的转录水平以及BMP/Smad信号的激活情况。结果 在C2C12、C3H10T1/2和MEFs中,PPARγ以及RAR和RXR各亚型受体均有表达。单独使用RSG或ATRA均能增加MEFs细胞中碱性磷酸酶(ALP)的活性,且RSG能明显增...
作者:江海洪; 向德栋; 刘国栋; 王宇明 期刊:《世界华人消化》 2005年第15期
目的:探索小鼠胚胎干细胞(ES)体外分步诱导为肝细胞的培养方法.方法:在小鼠胚胎成纤维细胞MEF饲养层上培养ES细胞,培养液中含白血病抑制因子(LIF),然后分阶段加入含acid-FGF、肝细胞生长因子(HGF)、致瘤素(OSM)、胰岛素、微量硒酸等诱导因子.采用免疫组化方法检测白蛋白(Albumin)、细胞角蛋白CK18,用硝基四氮唑蓝/5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸(NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶(ALP).结果:ES细胞克隆ALP染色阳性,未分化.培养4 d后,形成拟胚...
作者:朱惠明; 王娜; 蔡筱彦; 邓传珍 期刊:《现代消化及介入诊疗》 2005年第03期
目的探讨凋亡素基因的导入对人结肠癌细胞的影响.方法将凋亡素基因VP3克隆入真核表达载体pEGFP-C2,构建成重组质粒pEGFP-VP3.用脂质体转染法将pEGFP-C2和pEGFP-VP3分组分别转染人类结肠癌细胞(Lovo)和小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3),通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在不同组细胞中的定位、表达及细胞的生长、凋亡情况,MTF法测定不同组细胞的生长曲线,并用An-nexin V-FITC流式细胞技术检测细胞的凋亡率.结果在Lovo/EGFP组和3T3/EGFP-VP...
作者:赵文红; 厉曙光; 石红军 期刊:《中国公共卫生》 2004年第10期
目的应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术对增塑剂(DEHP)邻苯二甲酸二乙基己酯致小鼠胚胎成纤维细胞(3T6细胞)DNA损伤、损伤程度以及有无剂量-效应关系进行检测.方法将溶剂二甲基亚砜处理的3T6细胞作为阴性对照组,用H2O2染毒的3T6细胞作为阳性对照组(80μmol/L H2O2染毒),将不同浓度DEHP处理的3T6细胞设为4个剂量组(62.5,125,250,500μg/ml)进行SCGE检验.结果各染毒组细胞DNA损伤与阴性对照组比较,均有显著性差异(P<0.05);且随DEHP染毒浓...
作者:彭道琥; 钟德君; 廖烨晖 期刊:《四川医学》 2017年第04期
目的探索含Oct4、Sox2、C-Myc、Klf4四个基因的腺病毒载体感染小鼠的胚胎成纤维细胞技术,为制备诱导多能干细胞(iPSCs)研究奠定基础。方法将胎鼠躯干用胰蛋白酶消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),将小鼠的胚胎成纤维细胞随机分为3组:A组:Oct4、Sox2、C-Myc、Klf4腺病毒载体感染组;B组:空病毒颗粒感染组;C组:正常对照组。用目的基因感染小鼠胚胎成纤维细胞,并观察其形态变化。结果腺病毒感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)...
作者:王伟; 吕峰; 金鑫; 艾麦提·牙森; 李德卫 期刊:《基础医学与临床》 2017年第05期
目的 从胎龄14.5 d的C57小鼠胚胎肝脏中分离、培养小鼠胚胎肝祖细胞(m HPCs),并将其诱导分化为胆管细胞。方法 用荧光激活细胞筛选法(FACS)分选DLK1表面抗原阳性的小鼠胚胎肝细胞,并和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)Transwell共培养或者单独培养。细胞免疫荧光检测刚分选和共培养4和6 d的DLK1+细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)及细胞角蛋白19(CK19)抗原的表达。结果 体外共培养时,大部分DLK1+细胞分裂增殖明显,呈葡萄状聚集生长。第4天...
作者:丛霞; 李华涛; 张东君; 曹荣峰; 田文儒 期刊:《黑龙江大学自然科学学报》 2016年第06期
细胞受应激后合成HSP72以保护细胞免受损伤,热应激时CaCa^2+/CaM和HSP72的表达高度相关,但CaCa^2+/CaM是否调节HSP72表达及其机制尚不清楚。本研究将从12.5日龄胚胎获得的小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)于39℃下进行热休克处理,并分男ll置于含CaCl小EGTA、W7和Myr-AIP培养基中处理。分别采用RT-PCR和Western-Blot检测相关基因和蛋白表达。结果显示,在39℃热应激时,CaCl2显著提高了细胞HSP72和CaM的表达,而EGTA和W7则显著降...
作者:胡雪峰; 廖耀祖; 黄义德; 李明春; 辛梅华; 张彦定 期刊:《组织工程与重建外科》 2006年第06期
目的 评价O,O-双十二酰基壳聚糖/聚乳酸复合膜的特性和生物相容性,从而寻找新型的组织工程支架材料.方法 采用FTIR、WAXD及SEM研究复合膜的理化特性;采用小鼠胚胎成纤维细胞(3T3)作为实验细胞,通过细胞粘附实验、细胞活性MIT实验、小鼠全身过敏实验和皮下埋植急性毒性实验对复合膜的生物相容性进行评价.结果 OCS与PLLA之间存在强烈的氢键作用,材料结构均一,无相分离;OCS/PLLA的粘附率较PLLA的高;复合膜的细胞毒性为零级;而且用复合...
作者:杨辉; 杨丹凤; 张华山; 张伟; 刘焕亮; 刘超; 袭著革 期刊:《生态毒理学报》 2007年第04期
为探讨不同种类纳米材料对原代培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEF)的毒性效应及作用机制,选择4种典型的纳米材料(纳米碳、单壁碳纳米管、纳米氧化锌、纳米二氧化硅)制备颗粒悬液,设立5个剂量组(5、10、20、50、100μg·mL^-1)对BALB/c小鼠MEF细胞进行24、48、72h染毒培养,利用细胞形态学观察和噻唑蓝实验(MTT比色法)检测上述4种纳米材料对MEF细胞活性的影响,同时,测定染毒24h后细胞培养液上清中乳...
作者:张文成; 李艳华; 裴雪涛 期刊:《中国医药生物技术》 2009年第03期
胚胎干细胞(Embryonic Stem cells,ESCs)具有分化全能性和自我更新能力,其全能性的维持取决于多种转录因子、表观修饰因子等组成的错综复杂的网络,在这其中Oct4、Sox2、Nanog被认为是核心调控因子。2006年,日本京都大学Yamanaka实验室将Oct4、Sox2、c—Myc和Klf4导入小鼠胚胎成纤维细胞(embryonic fibroblasts,MEFs)中,成功的获得了与小鼠ESCs在表型、生长特性、
作者:刘峰; 徐永胜; 俞海燕; 王薇; 张纯 期刊:《中国实验动物学报》 2011年第04期
目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人...
作者:王庆华; 王生存; 李斌; 刘春; 吴刘成; 王旭; 邵义祥 期刊:《动物医学进展》 2016年第06期
利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)周期和迁移能力的变化,探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用。用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取E12.5d的胚胎制作小鼠胚胎成纤维细胞。利用表达Cre重组酶(Ad-Cre-EGFP)以及GFP荧光蛋白(Ad-EGFP)的腺病毒载体,对P3代MEFs进行感染,分别用PCR,RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时利用流式分选技术检测感染后MEF...
作者:邓玉金; 肖雄; 沈心怡; 宋坤; 杨利珊; 李跃民 期刊:《中国细胞生物学学报》 2013年第09期
在应用小鼠胚胎干细胞(ESCs)裂解液诱导异性小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)&诱导性多能干细胞(iPSCs)的过程中,通过性别鉴定的方法筛选特定性别的被诱导的MEFs,能够快速简易的鉴定出iPSCs的生成材料是否来源于被诱导的体细胞。利用妊娠13.5天雄性和雌性胎鼠生殖嵴在形态学上存在明显差异的特性,识别出不同性别昆明系小鼠13.5天的胚胎,并从中分离培养出大量不同性别的MEFs,用于iPSCs的实验研究。根据雄性小鼠特异性的Y染色...
癌细胞优先利用有氧糖酵解作为能量供应,而且这种代谢改变对肿瘤的生长十分重要。近期日本学者kawauchi等发现肿瘤抑制基因p53、转录因子NF-κB与糖代谢密切相关。在p53缺失的原代培养的小鼠胚胎成纤维细胞中发现:IKKα、IKKβ和NF-κB的活性增强,活化的NF-κB与其位于基因Glut3附近的结合位点结合,引起Glut3表达上调,导致有氧糖酵解增加。
作者:张万里; 李伟; 林学科; 李航; 翟荣林; 王国斌; 陶凯雄 期刊:《中国组织工程研究》 2010年第36期
背景:研究表明小鼠胚胎成纤维细胞的制作受多种因素的影响。目前对这些因素的研究均建立于半经验的基础上,缺乏客观定量的数据支持。目的:对小鼠胚胎成纤维细胞制作胚胎干细胞饲养层细胞条件进行优化。方法:用两种不同方法从孕13.5d昆明小鼠胚胎中分离胚胎成纤维细胞,采用锥虫蓝染色计数,比较两种分离方法在细胞活性和数量方面的差异。对分离得到的胚胎成纤维细胞用0.05%胰酶在室温下消化不同时间,分析胰酶消化时间解离贴壁细胞...
作者:胡嘉波; 麻全慧; 胡三强; 周中卫; 王晓慧; 钱晖; 许文荣 期刊:《中国组织工程研究》 2011年第23期
背景:建立一种既可以大量制备,又能保存并保持较高活性的饲养层是胚胎干细胞培养研究不可缺少的环节。目的:体外分离培养、冻存复苏ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性。方法:取ICR小鼠13.5d胚胎,用胰蛋白酶分步消化法分离培养小鼠成纤维细胞,对冻存复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞形态、生长曲线、贴壁率、细胞化学染色及支持人胚胎干细胞生长特性等进行观察。结果与结论:复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞在体外传代30min时80%以...
作者:胡嘉波; 胡三强; 麻全慧; 周中卫; 王晓慧; 张微 期刊:《中国组织化学与细胞化学》 2012年第02期
目的体外建立人胚胎干细胞传代培养方法,研究人胚胎干细胞细胞化学染色特性。方法以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层传代培养人胚胎干细胞,检测人胚胎干细胞、自发分化克隆及拟胚体的细胞化学染色特性。结果人胚胎干细胞在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上传30代以上其形态保持不变;人胚胎干细胞碱性磷酸酶、过碘酸-雪夫反应、α-醋酸萘酚酯酶染色阳性,自发分化克隆细胞阳性程度明显减弱;人胚胎干细胞形成的拟胚体碱性磷酸酶染色弱阳性,过...
作者:贾俊双; 孙妍; 肖东; 姚开泰 期刊:《热带医学》 2008年第10期
目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞,24—48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FF细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤...