作者:包镇洁(综述); 杨春(审校) 期刊:《现代医药卫生》 2019年第19期
肝癌是最常见恶性肿瘤之一,也是我国目前排名第三位的肿瘤致死病因[1]。在我国,肝癌发病主要与乙型或丙型肝炎病毒(HBV、HCV)感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝、黄曲霉素、遗传等因素相关,以乙型病毒性肝炎(乙肝)最为常见。随着乙肝抗病毒药物的广泛应用,乙肝传染和病情进展已有一定程度的控制,但乙肝表面抗原(HBsAg)阴性并不能完全排除HBV感染,因此,隐匿性乙肝极易被忽视。研究表明,在原因不明的肝病患者中,隐匿性乙肝占比高达20...
作者:于丽丽; 胡博; 李雪; 朱乃硕 期刊:《中国生物工程》 2018年第07期
目的:借助实验室前期质谱分析技术和数据分析研究基础,采用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白质沉降实验(GST pull-down)验证HBV X蛋白与Tab1蛋白的相互作用,为进一步研究HBx在HBV慢性感染致癌机制中的作用提供一定的实验依据。方法:成功构建pGEX-2TK-GST-HBx质粒,对GST-HBx融合蛋白进行诱导表达,与GST-beads结合孵育,构建pcDNA3.1/myc-His(-)BTab1,转染293T细胞使其表达,然后GST pull-down体外试验验证二者的相互作用;构建pcDNA3.1...
作者:杨林; 江元森; 陈幼明; 李志刚; 李刚; 陈文思; 姚集鲁 期刊:《热带医学》 2004年第03期
目的 分别构建人乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白、羧基端截断的中分子表面蛋白MHBs^178、MHBs^t155编码基因的真核重组表达载体,以便进一步研究其转录激活功能及对宿主细胞信号传导通路的影响。方法 设计合成3对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBV DNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVX基因、MHBs^178和MHBs^t155编码基因片段;用HindⅢ,Kpn Ⅰ双酶切HBV X基因;用HindⅢ和Barn HⅠ双酶切MHBs^178与MHBs^t155编码基因片段后,分别定向插入...
作者:田甜; 訾晓渊; 胡以平 期刊:《癌变畸变突变》 2004年第03期
乙型肝炎病毒是引起包括肝细胞癌在内的慢性肝脏疾病的重要致病因素,但HCC的发病机制仍不清楚。最近研究发现,乙型肝炎病毒X基因(HBx)是HBV复制和扩散所必需的基因,在乙肝慢性化和肝细胞癌的发生中具有重要作用。HBx基因是HBV DNA中最小的一个基因,全长465bp,表达产物为17kDa的X蛋白。X蛋白具有多种功能:可对多种病毒和细胞的启动子、增强子成分发挥反式激活作用;可与P53蛋白结合;可参与多条信号转导通路;具有抑制DNA切除...
作者:徐晓; 林德馨; 林旭 期刊:《福建医科大学学报》 2004年第04期
作者:刘妍; 王春花; 成军; 杨倩; 王建军; 纪冬; 党晓燕; 张玲霞 期刊:《解放军医学》 2004年第05期
目的筛选并克隆乙型肝炎病毒X蛋白(HBxAg)反式激活新型靶基因.方法以HBxAg表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA并进行抑制性消减杂交分析,应用生物信息学方法对所获基因片段序列进行分析发现,其中之一为新型基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索、比对和电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基...
作者:龚道银; 陈恩强; 朱柯霓; 张冬雪; 俞尤嘉; 黄飞骏 期刊:《华西医学》 2013年第04期
乙型肝炎病毒(HBV)慢性持续感染与肝细胞癌(HCC)的发生密切相关。由HBVX基因编码的X蛋白(HBx)是一个多功能蛋白,可通过反式激活和蛋白相互作用持续调控病毒的生活周期和宿主细胞的代谢,最终导致肝细胞癌变。因此,近年来对于HBx在病毒复制和致HCC中的作用机制成为研究热点。
作者:刘敏; 王琳; 成军; 张树林; 邵清; 张健; 杨倩; 董菁 期刊:《世界华人消化》 2004年第04期
目的:用酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白结合蛋白的编码基因。方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增HBV基因组中的前-X基因,连接入酵母表达载体pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提出质粒并测序,进行生物信息学分析。结果:成功克隆出HBV的前...
作者:杨倩; 张黎颖; 成军; 洪源; 刘妍; 王琳; 董菁; 张树林 期刊:《世界华人消化》 2005年第13期
目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建乙型肝炎病毒(HBV)前-X基因反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆前-X反式激活相关基因,了解该段基因的可能生物学功能.方法:构建表达质粒pcDNA3.1(-)-前-X,转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;提取转染后细胞的mRNA,反转录为cDNA.cDNA经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产...
作者:刘妍; 成军; 王春花; 杨倩; 王建军; 纪冬 期刊:《胃肠病学和肝病学》 2004年第03期
目的应用基因芯片技术,检测乙型肝炎病毒(HBV)x蛋白(HBxAg)反式激活基因XTP4的表达对肝母细胞瘤细胞系HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明XTP4蛋白可能的分子生物学功能.方法设计并合成XTP4基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增XTP4基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的XTP4编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XTP4.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转...
作者:刘蔚; 王建军; 成军; 张连峰; 纪冬; 刘妍; 郭江 期刊:《中西医结合肝病》 2004年第03期
目的:了解乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)与白细胞介素-18(IL-18)基因表达的关系,研究HBxAg在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法:聚合酶链反应(PCR)扩增人IL-18基因启动子DNA,命名为IL-18P.以T-A克隆法,将IL-18P基因片段连入载体pGEM-T.将获得的质粒pGEM-T-IL-18P,与报告质粒pCAT3-basic分别用KpnⅠ和BglⅡ双酶切后构建IL-18启动子报告基因表达载体pCAT3-IL-18P,以重组表达质粒pCAT3-IL-18P和HBxAg表达载体pcDNA-HBxAg瞬时转染...
作者:杨昊; 柳永和; 李闻文; 成军; 刘妍 期刊:《实用预防医学》 2004年第03期
目的为了探讨HBVX基因与慢性乙型肝炎及肝癌发生的关系,构建含X基因的真核表达质粒.方法用PCR方法扩增含EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列,对PUC118载体及X基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌JM109,称PUC118-HBx,再将PUC118-HBx与PCDNA3.1(+)双酶切,将两者连接并转化大肠杆菌DH5α,称PCDNA3.1(+)-HBx,并对其进行序列测定.结果已构建PCDNA3.1(+)-HBx载体,经序列测定含有完整的X基因片段.结论 PCDNA3.1(+)-HBx表达...
作者:徐烟青; 周永东; 毕胜利 期刊:《病毒学报》 2005年第03期
乙型肝炎病毒(HBV)的慢性感染是导致肝细胞癌(HCC)的主要危险因子.X蛋白(HBx)被认为在肝细胞癌的发生发展中起重要作用.X基因是HBV基因组最小的开放读码框,它编码的X蛋白含154个氨基酸,分子量约为16.5kD.HBx是一种多功能的病毒调节因子,通过调节细胞和病毒的转录活性、信号传导途径、基因毒性压力反应、蛋白质降解等,直接或间接地影响HBV的复制和增殖.HBx亦可影响细胞周期调控、细胞凋亡,从而可能在慢性活动性肝炎和肝硬化的病程中...
作者:谢怡; 刘杞; 王春晖; 唐承薇 期刊:《中华肝脏病》 2005年第01期
目的乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白在HBV相关性肝癌的发生中有着重要作用,本研究旨在探讨拉米夫定对HBV X基因复制、转录及表达水平的影响.方法用聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因复制的影响,用逆转录-聚合酶链反应法检测拉米夫定对转染X基因mRNA的影响,用生物分子相互作用系统检测拉米夫定对X蛋白表达的影响,探讨了拉米夫定作用的量效和时效关系. 结果拉米夫定组与对照组HBV X基因复制的目的基因条带吸光度(A)值分别是1 51.4±3.5...
作者:岑斌; 胡薇薇; 曾文芳; 刘诗川 期刊:《中国卫生检验》 2017年第11期
目的 分析2013年-2014年杭州市甲型H3N2流感病毒PA基因及其编码蛋白的特征,揭示其分子特征与演化趋势。方法 对76株H3N2流感病毒PA基因进行扩增和测序,采用序列多重比对、突变位点比较分析、选择压力分析、系统发育分析等方法进行遗传进化分析。结果 76株流感病毒PA基因的核苷酸序列、编码蛋白序列及PA-X蛋白序列一致性分别为98.28%~100.00%、98.46%~100.00%和98.41%~100.00%;PA蛋白以及PA-X蛋白的氨基酸序列与参考株A/Ohio/2/2012...
作者:高婧; 董长垣; 胡俊; 李艳; Joseph; K; K; Li; 戴莹; 郭淑芳 期刊:《武汉大学学报·理学版》 2007年第04期
将原核重组质粒双酶切后释放的χ基因与真核表达载体连接,构建真核重组质粒pcDNA3.1-X,然后与真核重组质粒pcDNA3.1-APOBEC3G共转染HepG2细胞,提取蛋白进行免疫共沉淀并用Western blot分析结果。免疫共沉淀后,HA-APOBEC3G融合蛋白能够在抗HBx的免疫沉淀物中检测出来,在抗HA标签的免疫沉淀物中也能检测到HBx。揭示了这两种蛋白能在受体细胞内形成复合物。结果表明乙肝病毒X蛋白与APOBEC3G蛋白在细胞内能发生相互作用,提示APOBE...
作者:张南; 訾晓渊; 熊俊; 姚玉成; 李文林; 巴月; 朱海英; 李建秀; 王新民; 胡以平 期刊:《癌变畸变突变》 2007年第02期
背景与目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白在细胞凋亡中的作用。材料与方法:采用基因重组技术构建乙型肝炎病毒x基因的真核表达载体pcDNA3-HBx。脂质体FuGE NE6转染HeLa细胞,并用蛋白印迹检测pcDNA3-HBx在HeLa细胞中的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:成功构建了可在真核细胞中稳定表达X蛋白的HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。稳定转染pcDNA3-HBx DNA的HeLa-Xs细胞的凋亡率为9.8%,较空白HeLa细胞的凋亡率(0.4%)以及对照细胞HeL...
作者:王城; 马建国; 侯成民 期刊:《宁夏医科大学学报》 2006年第01期
乙肝病毒(hepatitis B virus,rmv)慢性感染是肝细胞肝癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)的重要原因之一。HBV慢性携带者发生肿瘤的相对危险性明显增加。现有研究表明:HBV诱导HCC的机制主要涉及HBVDNA与肝细胞基因组的整合以及乙肝病毒X蛋白的致癌作用。X蛋白是乙肝病毒X基因的表达产物,具有反式激活功能,可通过从转录水平激活细胞生长调节基因、对细胞调亡的调节、抑制受损DNA的修复等机制导致HCC的发生,X蛋白的这些作用...
作者:李涛; 刘国珍; 谭德明; 吴传湘; 刘洪波 期刊:《生命科学研究》 2007年第04期
采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HBVX基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc/CMV2.构建重组质粒pCMV/X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT—PCR法检测HBV XmRNA的表达情况.Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达,结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV/X中包含有完整的HBVX基因片断,pCMV/工转染的QSG7701细胞中有HBVXmRNA及HBx蛋白的稳定表达.成功建立了HBVX稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生...
作者:王静; 蒋永林; 余敏君; 蔡恒玲; 李金丽; 万艳平 期刊:《中国免疫学》 2007年第09期
目的:将乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染巨噬细胞,观察X蛋白即时高表达对巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β的影响,为进一步研究HBVX蛋白的致病机制奠定实验基础。方法:将真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24小时后,用LPS刺激巨噬细胞,利用Westernblot鉴定X蛋白在巨噬细胞中的表达,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测pcDNA3.1(+)-HBx转染的巨噬细胞不同时间...