作者:雷延龄; 蒋秀芳; 褚丽敏; 赵倩 期刊:《中国病原生物学》 2019年第12期
目的了解河北地区儿童病毒性脑炎病原谱和分子进化特征。方法收集2016-2018年河北地区351例诊断为病毒性脑炎的患儿的临床资料。采用实时荧光定量PCR检测脑脊液中病原,并利用PCR扩增肠道病毒VP1基因序列片段。对柯萨奇病毒B5型测序并利用软件MEGA6.0绘制种系发生树,采用邻位相连法构建进化树。结果351例患者中,学龄前儿童247例占70.37%。其中发热312例、287例头痛.228例呕吐或腹泻.61例咽痛或有呼吸道症状.23例嗜睡、皮疹9例和惊厥...
作者:时秀云; 于欣; 马苏琳 期刊:《中国现代药物应用》 2019年第19期
作者:唐琼; 郑晓冬 期刊:《食品科学》 2019年第18期
罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)作为生物激发子,能显著诱导采后樱桃番茄对灰葡萄孢(Botrytiscinerea)的抗性响应,但其防治机制尚未完全明确。本实验以樱桃番茄为材料,利用新一代高通量测序技术Illumina HiSeqTM4000对罗伦隐球酵母处理及水对照处理的番茄果肉组织进行转录组测序,采用生物信息学方法对差异基因进行功能注释和通路分析,并利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chainreaction,RT-...
作者:张悦; 刘岿然; 汤婷婷; 李琳 期刊:《中国妇幼保健》 2017年第22期
目的检测子宫内膜异位症患者在位内膜中lncRNA尿路上皮癌抗原1(UCA1)的表达情况,探讨其在子宫内膜异位症病因学中的意义。方法选取2015年3-11月在中国医科大学附属盛京医院经病理证实为子宫内膜异位症患者的在位内膜标本30例(其中分泌期13例,增生期17例)为实验组,正常子宫内膜标本20例(分泌期7例,增生期13例)为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测两组子宫内膜组织中UCA1的表达。结果实验组在位内膜...
作者:张志; 张丽丽; 刘爽; 单虎; 李晓成; 王树双 期刊:《中国动物检疫》 2018年第09期
猪细小病毒7型(Porcine parvovirus 7,PPV-7)是近年新发现的一种细小病毒亚型。为建立PPV-7快速准确的检测方法,以PPV-7病毒全基因组为模板,设计合成1对引物和1条Taqman探针,建立了PPV-7Taqman实时荧光定量PCR检测方法。本方法的标准曲线分析显示,其常数为0.999 2,敏感性可以达到46个病毒拷贝/μL,批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。用猪圆环病毒2型、3型,猪细小病毒1型,猪伪狂犬病病毒等病原进行特异性试验,证实本方法不...
作者:张琳; 苗广青; 侯学霞; 李博; 郝琴 期刊:《中国媒介生物学及控制》 2018年第05期
目的应用巢式PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测啮齿动物中伯氏疏螺旋体的带菌率,对2种方法在莱姆病宿主动物监测中的应用效果进行评价。方法2017年7-9月,在新疆维吾尔自治区(新疆)古尔图地区野外放置鼠夹,采集啮齿动物,并鉴别种类;采用巢式PCR和qRT-PCR 2种方法检测标本携带伯氏疏螺旋体情况,并对2种方法的检测结果进行统计学分析。对巢式PCR检测的阳性标本进行测序和序列比对分析,以初步确定伯氏疏螺旋体的基因型别。结...
作者:赵大卫; 裴志杰; 王明正; 陈丽会; 刘佳坤 期刊:《武警后勤学院学报·医学版》 2017年第08期
【目的】探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)在食管癌肿瘤组织中的表达水平及临床意义。【方法】选取2014年5月至2015年2月在我院进行手术的食管癌患者84例作为观察组,另选20例健康体检者的正常食管黏膜组织作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative Real-time polymerase chain reaction,QRT-PCR)法分别检测两组标本中PARP mRNA的表达水平;采用免疫组化法分别检测两组标本中PARP蛋...
作者:王瑜; 马建忠; 张伟杰; 高恺; 冯海霞; 张莹; 车团结 期刊:《微生物学免疫学进展》 2018年第02期
目的建立一种能够快速、灵敏、特异的鉴定腐皮镰刀菌的SYBRGreen实时荧光定量PCR。方法运用SYBRGreen实时荧光定量PCR反应体系检测腐皮镰刀菌,并对此方法的特异性、灵敏度和稳定性进行评价。结果通过对45例样品的检测,结果显示SYBRGreen实时荧光定量PCR特异性好,其检出率高于普通PCR;灵敏度高,对重组质粒标准品的检测灵敏度为1.O×l0^2copies/μL;稳定性好,对质粒为1.O×10^7copies/p.L、1.O×l0^5copies/IxL、1.0×10^3...
作者:吴雪纯; 贾永平 期刊:《国际心血管病》 2017年第06期
目的:探讨微小RNA(miRNA)-126在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆中的表达情况及临床意义。方法:收集2015年2月至2015年6月在山西医科大学第一医院心内科住院的114例冠心病患者(冠心病组)和40例健康者(对照组)的血浆,将冠心病组分为急性心肌梗死组(AMI组,n=40)、不稳定型心绞痛组(UA组,n=38)、稳定型心绞痛组(SA组,n=36)3个亚组,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组血浆miRNA-126的表达水...
作者:李一苇; 刘芳; 刘冬 期刊:《预防医学论坛》 2017年第12期
目的 分析菏泽市手足口病病原体检出情况及流行病学特征,为手足口病防控提供可靠的实验室依据。方法 采用实时荧光定量PCR,对2010-2016年菏泽市收集的临床确诊病例的粪便标本,提取核酸,进行肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CoxA16)和其他肠道病毒核酸检测。结果 2010-2016年共收集样本3 231份,其中阳性2 881份,阳性率为89.17%。EV71阳性1 520份,阳性率为47.04%;CoxA16阳性576份,阳性率为17.83%;其他肠道病毒阳性756份,阳...
作者:韩营营; 段瑶; 刁保卫; 闫梅英 期刊:《疾病监测》 2019年第04期
目的为快速检测、鉴定鸭沙门菌,避免血清型误判,提高鸭沙门菌暴发应对能力,建立一种实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测方法。方法随机挑选60株鸭沙门菌及238株肠道常见病原菌代表菌株,针对鸭沙门菌血清型特异基因AW5815605设计引物并建立qPCR检测体系,通过纯菌菌株、模拟粪便样本及临床样本评价该体系的特异度、灵敏度及检测下限。结果 60株鸭沙门菌株及临床感染的50份样本扩增结果均为阳性,而对鸭沙门菌血清型以外的其他沙门...
作者:李红娜; 袁飞; 周伟娥; 罗云敬; 张峰; 李绍辉 期刊:《食品工业科技》 2016年第12期
副溶血弧菌是海产品中常见致病菌,可引起恶心、呕吐、腹痛、腹泻等疾病。由于我国是海产品消费大国,所以必须建立快速、准确、灵敏的方法监测海产品中的副溶血弧菌。目前主要应用分子生物学方法和分析化学方法,从细胞水平和分子水平来检测副溶血弧菌,主要包括实时荧光定量PCR和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS),这两种方法可以对副溶血弧菌进行准确定性和定量,是检测食品中副溶血弧菌的快速、特异、灵敏的方法,可...
作者:冉军舰; 梁新红; 陈晓静; 李向阳; 焦凌霞; 赵瑞香 期刊:《食品科学》 2019年第06期
目的:根皮苷-2-O-糖基转移酶(phloridzin 2’-O-glycosyltransferase,P2’-GT)是根皮苷合成最后一步关键酶,可以把根皮素转化成根皮苷,本研究在富士苹果中克隆出P2’-GT基因,对基因编码产物进行生物信息学分析和基因的表达模式分析。方法:以苹果皮为材料,提取RNA反转录合成cDNA为模板,设计特异性引物进行扩增和测序,利用Pro Param tool、TMHMM等在线软件对编码蛋白进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime?uor...
作者:朱宁; 于宁; 朱月; 韦玉龙; 张嘉颖; 孙爱东 期刊:《食品科学》 2019年第04期
探究微芯片脉冲电场(microchip pulse electric field,MPEF)技术对毕赤酵母的致死效果和致死机理。在400 V电压和80个脉冲条件下,MPEF技术可以很好地钝化毕赤酵母。借助新一代高通量测序技术对MPEF处理前后毕赤酵母基因的表达水平进行分析,将差异表达基因在基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库中进行比对。测序结果表明,MPEF组和对照组差异变化显著的基因...
作者:付辉; 安丽娜; 彭碧波 期刊:《武警医学》 2018年第01期
目的比较4种不同的方法对手足口病(hand-foot and mouth disease,HFMD)病原体肠病毒71型(enterovirus type 71,EV71)感染的检测效果。方法非洲绿猴肾细胞(Vero)培养至对数生长期后,加入EV71病毒株感染。分别采用细胞病变效应法(cytopathic effect,CPE)、实时荧光定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,Real-Time PCR)、Western blot和免疫荧光法检测病毒感染情况,并对4种检测结果进行比较。结果 4种方...
作者:胡秋艳; 谭庆龙; 徐雯星; 刘春萍; 曾星 期刊:《中药新药与临床药理》 2018年第01期
作者:刘文俊; 黄植霞; 朱晓琳; 黄雪冰; 杨博; 黄运茂; 田允波 期刊:《中国家禽》 2018年第03期
研究旨在建立鹅GAPDH基因的Real-time PCR技术,为鹅功能基因mRNA表达水平的定量分析提供方法学基础。根据GenBank上鸭GAPDH基因的序列设计引物扩增鹅全长基因,以全长基保守区作为模板设计引物,采用SYBR Green Ⅰ染料建立了Real-time PCR方法,以阳性重组质粒为标准品,建立标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、线性范围广以及重复性高等特点,研究结果为鹅GAP脚作为内参基因用于鹅相关基因定量表...
作者:赵庆喆; 梁超; 莫蓓莘 期刊:《深圳大学学报·人文社会科学版》 2017年第05期
小核糖核酸(micro ribonucleic acid,miRNA)是一类长度为20~24核苷酸(nucleotide,nt)的非编码的核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),在植物生长发育过程中具有重要作用.为鉴定参与植物miRNA合成、降解和运输等通路的因子,利用拟南芥转基因株系SUC2:amiR-SUL进行正向遗传筛选体系,通过对该株系进行甲基磺酸乙酯(ethylmethylsulfone,EMS)诱变筛选获得SUP-E45突变体.对该突变体进行表型观察、实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative re...
作者:孙锦霞; 黄钟; 王瑞; 翁林军; 李亚旭 期刊:《深圳大学学报·人文社会科学版》 2017年第04期
采用小干扰核糖核酸(siRNA)介导Hela细胞、原代巨噬细胞和RAW264.7细胞中FBW7基因沉默,研究其对NF-κB信号通路、细胞因子表达、巨噬细胞吞噬和杀伤细菌能力的影响.通过流式细胞术、抗生素保护试验、实时荧光定量聚合酶链式反应和报告基因的研究方法,发现FBW7沉默不具有调控RAW264.7细胞吞噬细菌的能力,但能显著抑制原代巨噬细胞和RAW264.7细胞的杀菌能力及一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,iNOS)表达,抑制Hela中NF-κB报告基因...