作者:沙伟; 张丽丽; 李雯煜; 马天意; 张梅娟 期刊:《分子植物育种》 2020年第01期
为开展毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)的蛋白质组学研究,本研究对毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera)总蛋白质提取方法和双向电泳参数进行了筛选和优化,以期建立适合毛尖紫萼藓蛋白质双向电泳的实验体系。分别采用Tris-酚抽提法和TCA-丙酮法对毛尖紫萼藓总蛋白质进行提取,比较分析了两种蛋白质提取方法的效果,并研究了IPG胶条的pH范围及蛋白质电泳上样量等因素对毛尖紫萼藓蛋白质双向电泳结果的影响。结果发现,在SDS-PAGE电泳结果中,与TC...
作者:王鹏伟; 史俊华 期刊:《河南林业科技》 2010年第03期
以感染丛枝病的豫杂一号泡桐幼苗为试验材料,通过不同浓度5-氮胞苷和利福平处理,研究了其幼苗形态和蛋白质的变化。结果表明,适宜浓度的利福平和5-氮胞苷共同使用可抑制泡桐丛枝病的发生。150μmol·L-15-氮胞苷+80 mg·L-1利福平可以抑制豫杂一号泡桐丛枝病症状。存在于健康豫杂一号幼苗中的蛋白质pI 6.8、m24ku而在病苗中观察不到。表明该蛋白质可能与豫杂一号泡桐丛枝病发生有一定关系。
作者:马增春; 高月; 吕俊萍; 王升启 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2004年第04期
摘要高通量双向电泳是蛋白质组学的核心,双向电泳凝胶上蛋白质点的检测方法应具有灵敏度高、线性范围宽和兼容质谱鉴定等优点.采用差异凝胶电泳(difference gel electrophoresis,DIGE)技术以Cy3(1-(5-carboxypentyl)-1′-propylindocarbocyanine halide N-hydroxysuccinimidyl ester)和Cy5(1-(5-carboxypentyl)-1′-methylindodicarbocyanine halide N-hydroxysuccinimidyl ester)荧光分别标记正常和TNF-d处理细胞的蛋白质,用C...
作者:杨德明; 张娅欣; 刘晓颖; 陈乾; 荣俊冬; 郑郁善 期刊:《福建农林大学学报·自然科学版》 2019年第06期
采用50 mmol·L^-1 NaCl和100 mmol·L^-1 NaCl处理福建柏无性系小苗两周后,用三氯乙酸/丙酮法提取福建柏的蛋白样品.通过双向电泳技术分离并找到福建柏盐胁迫响应的21个差异蛋白.通过质谱鉴定以及生物信息学GO功能注释,发现差异蛋白功能主要体现在碳固定、碳代谢、甘油二酸阴离子代谢、有机物光合作用碳固定、TCA循环、木质素生物合成、氧化磷酸化及半胱氨酸氮氨酸代谢.
作者:黄薇; 吴艳彦 期刊:《华中师范大学研究生学报》 2007年第02期
探讨蛋白质组学中不同体系的双向凝胶电泳技术(2-DE)对昆虫细胞内蛋白质分离和电泳结果的影响。以经Cry1Ac抗性筛选的粉纹夜蛾BT1-Tn-5B1细胞为例,分别进行ISO-DALT和IPG-DALT方法进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳,并比较了电泳图谱。ISO-DALT得到了700多个蛋白质斑点,IPG-DALT得到了800多个蛋白质点。前者的pH梯度不稳定,受电场和时间的影响较大,制得的胶条的重复性不好,但对样品的要求不高。后者有稳定的pH梯度,操作方便,但对样品中盐...
作者:李跃建; 姬红丽; 彭云良; 高荣; 高霞; 刘世贵 期刊:《工程科学与技术》 2005年第02期
在pH 3~10和pH 4~7条件下,用双向电泳研究了慢条锈病和高感条锈病2个小麦品种体内蛋白质的差异表达.结果表明,条锈菌侵入后,慢条锈病抗病品种川麦107和高感条锈病品种80-8体内的蛋白质均发生了显著改变;在宽、窄2种pH条件下,2品种的蛋白质点都较多,但在窄pH下,蛋白质点的分离更好;2品种都诱导出了一些新的蛋白质;慢条锈病的川麦107比高感条锈病的80-8多产生了几个表达更强烈的非特异性抗性蛋白质,同时也多诱导出了2个新的特异性...
作者:何文锦; 郭晋隆; 陈由强; 林思祖; 陈如凯 期刊:《热带亚热带植物学报》 2007年第05期
针对木本植物灰木相思(Acacia implexa Benth.)蛋白质分离过程中含有大量色素和酚等干扰物质的现象,本实验优化了各步实验条件。结果表明,在蛋白提取液中加入10%PVP,同时提高离心力、延长离心时间能提高可溶性蛋白得率,第一向等电聚焦24cm长的固相pH梯度胶条的最适蛋白上样量为1000μg,第二向SDS聚丙烯酰胺凝胶最适浓度为12.5%。优化后的实验配置体系提高了灰木相思组培苗总蛋白双向电泳的分辨率和重复性,建立一套适用于灰木相思...
作者:于冯; 郑春芳; 施孟如; 刘伟成; 仇建标; 冀德伟; 黄丽; 陈少波 期刊:《热带亚热带植物学报》 2011年第06期
对适用于秋茄(Kandeliacandel)叶片蛋白质组学研究的双向电泳技术体系进行了优化。结果表明,采用酚抽提法提取的蛋白质浓度较低,约1.7μg·L^-1,SDS—PAGE电泳后几乎无条带;而采用改良TCA-丙酮沉淀法可显著提高提取液中蛋白质的含量,可达12Aμg·L^-1。秋茄叶片蛋白质主要分布在pH4~7的范围内,最适于采用pH3~10NL的胶条,17cm胶条的最适上样量为400μg,经银染后可得蛋白点约(564±34)个。用TCA-丙酮沉淀法提取秋茄叶片全蛋...
作者:庞国彩; 谢东丽; 陈清西; 陈伟; 龙强 期刊:《热带亚热带植物学报》 2009年第03期
以龙眼(Dimocarpus longan Lour.)花芽和叶芽为材料,对龙眼花芽与叶芽分化发育过程中的差异蛋白质进行分析和鉴定,并探讨其生物学功能。本研究共鉴定出10个差异蛋白质:ATP synthase beta subunit.fructokinase.LHCⅡ type ⅠchlorophyⅡa/b binding protein,peroxidase,ascorbate peroxidase,14-3-3protein,14—3-3 family protein,putative cytosolic cysteine synthase7,retrotransposon protein,putative,Ty1—...
作者:梁文裕; 陈伟; 宋瑞锋; 张凤 期刊:《热带亚热带植物学报》 2005年第03期
应用IEF-SDS-PAGE技术分析龙眼胚胎分化发育过程中蛋白质组分的变化.结果表明,在各发育阶段大多数蛋白质组分的电泳图谱基本一致,但也有变化.其中花后38 d存在TE1(27.1 kD、pI 7.3),TE2(17.5 kD、pI8.2)2个特异蛋白,45 d存在TE3(11.4 kD、pI7.6),TE4(13.2 kD、pI9.9)2个特异蛋白,52 d存在TE5(22.6 kD、pI7.2),TE6(18.6 kD、pI8.3),TE7(23.5 kD、pI3.6)3个特异蛋白.31 d胚胎电泳图谱中的蛋白质点数相对较多,表明此时蛋白质旺盛合成...
作者:刘秋均; 李洪; 杨烨; 张春燕 期刊:《西南医科大学学报》 2011年第05期
目的:为了对小鼠H22肝癌细胞中高表达膜蛋白进行初步的分析并探索其与肿瘤细胞恶性行为的相关关系。方法:分别培养并裂解小鼠正常旰细胞及H22肝癌细胞株,采用疏水性裂解液分步提取膜蛋白,双向电泳分离。ImageMaster 2D Platinum软件对电泳图谱进行对比分析,选择在H22细胞中典型的高表达膜蛋白并采用MALDI-TOF—MS进行鉴定。结果:从H22细胞中提取的膜蛋白约60%表现为高表达。8个典型的在H22细胞中高表达的膜蛋白被鉴定为紧联...
作者:张春燕; 刘寒; 杨烨; 陈燕; 邬丽莎; 赵春玲 期刊:《西南医科大学学报》 2012年第01期
目的:建立大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系。方法:提取大鼠肾脏组织的样品蛋白,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对各个关键因素进行优化。结果:最终选择的裂解液配方是1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/LTris,8mol/L尿素,2mol/L硫脲;使用pH4-7的IPG胶条进行被动水化上样,等电聚焦采用缓慢升压模式,电泳参数根据Bio-Rad公司的顸设方案进行调整;改良硝酸银法进行蛋白质斑点染色。从而获得了满意的...
作者:甘淋; 李娟; 段春燕; 林海蕤; 何涛 期刊:《西南医科大学学报》 2005年第04期
目的:初步建立卵巢癌蛋白质组研究的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法:提取卵巢癌肿瘤组织中蛋白质,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,对关键环节如样品处理、上样量分析和水化等进行一系列优化.进一步采用垂直SDS-PAGE进行第二相分离,银染显色、图像分析或软件分析电泳图谱.结果:通过实验条件的反复筛选获得了较为满意的卵巢癌双向凝胶电泳图谱.结论:本文初步建立了卵巢癌蛋白质组双向电泳分析方法,具有较好的分辨率和重...
作者:段春燕; 甘淋; 林海蕤; 何涛 期刊:《西南医科大学学报》 2005年第05期
目的:初步构建卵巢恶性肿瘤组织细胞的蛋白质表达谱,为进行卵巢良、恶性肿瘤组织细胞蛋白质表达的差异分析及临床早期诊断奠定基础.方法:取人卵巢恶性肿瘤组织,提取蛋白质,双向电泳分离,银染获得全细胞蛋白质的电泳分离图谱,利用PDQuest 2D分析软件进行图像分析,结合Swiss-Prot蛋白质数据库对蛋白质斑点进行初步鉴定.结果:双向电泳图谱显示2-DE图谱上有212个蛋白质斑点,主要集中在pH 4.95~6.81之间,其中高丰度蛋白有36个点,低丰度...
作者:段承刚; 何涛; 宋杰; 杨文理 期刊:《西南医科大学学报》 2004年第05期
目的:建立人白细胞蛋白质提取及双向电泳分析方法,为构建白细胞在不同生理或病理条件下的蛋白质表达谱或进行蛋白质表达的差异分析奠定基础.方法:取人全血,分离白细胞,提取蛋白质,双向电泳分离,考马斯亮蓝R-250染色获得蛋白质的电泳分离图谱,利用PDQuest 2D分析软件进行图像分析,结合SWISS SPORT蛋白质数据库对白细胞蛋白质斑点进行初步鉴定.结果:所得双向电泳图谱中各点分离清晰,无明显横向或纵向拖尾,分析显示图谱上有212个蛋白...
作者:申永锋; 赵锦; 刘孟军 期刊:《林业与生态科学》 2007年第04期
双向电泳技术是蛋白质组学研究中的核心技术之一,其作为高效、高分辨率的蛋白分析手段,在现代生命科学研究中扮演着重要的角色。本文主要对其基本原理、特点以及在植物抗性研究中的应用作了简要介绍,并对其今后的发展方向作了展望。
作者:王兴华; 王光耀; Te; Kian; Keong; Teh; Siew; Hoon; Ooi; Ciat; Hui; 叶儒佳; 王智航 期刊:《智慧健康》 2016年第04期
蛋白质组包括细胞或生物所表达的全部蛋白质,蛋白质组学是在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质的表达水平、翻译后的修饰、蛋白与蛋白之间的相互作用等。借以探析生命活动的生理基础及其内在规律,了解疾病发生、发展与细胞代谢过程,在蛋白质水平上获得整体而全面的认识,它是蛋白质(多肽)谱研究以及基因产物图谱研究的进一步延伸。蛋白质组学的核心技术是双向电泳、质谱及生物信息学,相关技术还涉及相对和绝对定量同位素标记...
作者:范兰芬; 王安利 期刊:《饲料工业》 2018年第10期
为建立凡纳滨对虾血细胞蛋白质的双向电泳体系,实验将凡纳滨对虾血细胞蛋白质提取后,用双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质,分别对蛋白质样品的制备方法、不同pH值范围IPG胶条、上样量等关键因素进行了探索和优化。结果显示,采用裂解液裂解-10%TCA/丙酮沉淀法制备蛋白质样品,使用17 cm pH值5~8的IPG胶条进行第一向等电聚焦电泳,第二向SDS-PAGE电泳采用浓度为12.5%的凝胶进行,上样量为每胶条200μg蛋白,第二向电泳后的凝胶采用硝酸银染...
作者:杨慧敏; 吴良如; 杨金来; 潘雁红; 郑友苗 期刊:《竹子学报》 2019年第01期
为建立一套适于勃氏甜龙竹笋蛋白的双向电泳体系,分别采用TCA/丙酮法和改良TCA-酚法提取竹笋总蛋白,pH 3~10和pH 4~7的IPG胶条进行蛋白双向电泳研究。结果表明,TCA/丙酮法更适合勃氏甜龙笋总蛋白的提取,不仅具有更高的提取率,而且还能提取更多的蛋白种类;采用24 cm,pH 4~7线性IPG胶条,共分离出约1 196个蛋白点,比pH 3~10胶条获得更多的蛋白点数量,且蛋白点清晰可见,分辨率更高,分离效果更好。勃氏甜龙竹的竹笋蛋白主要是以等电点在...
作者:杨慧敏; 吴良如; 潘雁红; 高贵宾; 钟浩; 叶晓丹; 郑友苗 期刊:《竹子学报》 2015年第03期
以毛竹笋为材料,采用改良TCA-酚法提取竹笋总蛋白,Bradford法测定其浓度为9.470 mg·m L-1,采用1 500μg的上样量,使用24 cm,p H 3~10 NL IPG预制胶条进行总蛋白的双向电泳,凝胶图谱经PDquest 8.0软件分析,结果得出,毛竹笋的蛋白点数有1 014个,等电点主要集中在p H 6.0~7.0范围,相对分子质量集中在在45~116 k Da范围内,占58.48%。