作者:吴言; 郝雅荞; 韦璇; 沈琦; 柳叶飞; 王升厚; 赵洪新 期刊:《生物技术通报》 2018年第05期
CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9)是继锌指核酸酶(ZFNs)和类转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)基因编辑技术之后的第三代基因编辑技术。CRISPR/Cas9在细菌和古生菌中广泛存在,是细菌在长期进化过程中形成的一种"适应性免疫防御",能够针对噬菌体感染、质粒接合和转化所造成的外源导入基因特异性识别、降解入侵的外源DNA,CRISPR/Cas9通过一段20 bp的短RNA来识别打靶位点的精准...
作者:刘海龙; 谌阳; 高杨; 周玲; 韩晓松; 赵长志; 杨高娟; 龙; 杨慧; 谢胜松 期刊:《遗传》 2018年第07期
CRISPR/Cas技术能高效进行基因组定点编辑,但不同细菌来源或人工改造的Cas9以及Cpf1等核酸酶识别的PAM(protospacer adjacent motif)有差异,因此不同的基因编辑核酸酶可能采用不同类型的sgRNAs(small guide RNAs)。MicroRNAs(miRNAs)是一类调控性的小分子非编码RNAs,为了研究miRNA前体中是否可能存在特异性高的sgRNAs靶点,本文利用本课题组前期开发的生物信息学软件CRISPR-offinder,对靶向28 645条miRNA前体的11种不同类型sgRNA的...
作者:朱文恺; 甘泉; 贺伟; 张新伟; 周跃; 吴梦雪; 孙同同; 江松; 孟艳 期刊:《应用昆虫学报》 2018年第02期
【目的】CRISPR/Cas9是近些年报道较多的基因编辑新工具,具有简便高效、特异性强等优势。BmSucl是从鳞翅目经济昆虫家蚕Bombyxmori体内发现的编码β-呋喃果糖苷酶(β—fructofuranosidase,β-FFase)的基因,也是首个被克隆和鉴定的动物型β—FFase编码基因。β-FFase是作用于果糖基的蔗糖水解酶,BmSUCl可能与家蚕防御桑叶生物碱的生理过程有关,但目前其发挥作用的分子机制尚不清晰。为了解析BmSucl在蚕体的作用途径及其生理功能...
作者:李晨浩; 车凤玉; 王国霞; 杨行; 李辉; 张勇; 杨颖 期刊:《神经解剖学》 2018年第06期
目的:利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因特定位点突变的大鼠模型。方法:根据FARS2基因序列,设计FARS2基因特异性的单链向导RNA(sgRNA)引物序列并克隆入pU57-T7-GDNA载体。利用T7RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9mRNA。将体外转录的sgRNA/Cas9mRNA显微注射入SD大鼠受精卵,通过PCR和基因测序对FARS2基因特定位点突变进行检测和鉴定。繁育FARS2基因敲除大鼠并分析后代突变情况。结果:基因测序证实成功构建表达sgRNA载体,成功将sgRNA和Cas...
作者:孟凡荣; 赵丹; 周清华; 刘喆 期刊:《中国肺癌》 2018年第05期
背景与目的已有的研究证明CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated 9)系统是一种能够在哺乳动物细胞中高效操作的新型基因编辑技术,应用人工设计的向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与靶点DNA特异性结合以实现对基因组DNA的切割,被切割后的基因组DNA通过非同源重组或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、或者外源基因的敲入等目标。本研究的...
作者:吕宝北; 赵鹏翔; 张鑫; 马雪梅; 谢飞 期刊:《生物技术进展》 2018年第03期
CRISPR/Cas9技术自从出现以来便迅速应用于肿瘤研究。在肿瘤发生的机理研究中,CRISPR/Cas9可用于研究单核苷酸突变、染色体异位等因素在肿瘤发生中的作用机制,同时也可以用于肿瘤细胞中功能缺陷基因的筛选。在肿瘤治疗方法的研究中,CRISPR/Cas9主要用于诱发机制比较清晰且诱因为病毒的肿瘤类型,例如鼻咽癌、宫颈癌等,通过对相应病毒的基因进行编辑从而抑制其致癌作用。利用CRISPR/Cas9技术还可以加速新肿瘤治疗靶点基因的发现。尽...
作者:孙士梅; 刘畅; 牛熙; 黄世会; 王嘉福; 冉雪琴 期刊:《山地农业生物学报》 2017年第04期
为了阐明microRNA对猪产仔数的调节机制,采用CRISPR/Cas9技术构建针对猪miR-136的基因编辑表达载体。通过实验,在miR-136基因成熟区及其下游设计两个单链引导RNA(sgRNA),合成4条磷酸化的单链DNA寡核苷酸,复性后形成两条带粘性末端的双链寡核苷酸片段,插入线性化的载体pX462的BpiI酶切位点处,转化感受态大肠杆菌DH5α,经测序确认,得到两个编辑表达载体pX462-miR-136-1和pX462-miR-136-2。构建了两个编辑miR-136基因的表达载体,为猪...
作者:杨晓峰; 汤飞; 李紫聪; 刘德武; 吴珍芳; 蔡更元; 郑恩琴 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2017年第05期
摘要:CRISPR/Cas9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/ CRISPR- associated protein 9 )系统在活细胞中能精确有效地进行基因组编辑,被广泛应用在生命科学的各个领域中。相比原有的基因编辑技术,CRISPR/Cas9基因编辑技术程序简易、操作方便灵活,极大简化了遗传工程的操作,提高了基因编辑效率。文章回顾了CRISPR/Cas9基因编辑技术的发展历程,阐述了其作用机制及在哺乳动物猪上的应用。通过sgR...
作者:申培磊; 高珊; 贾启鹏; 张勇 期刊:《甘肃农业大学学报》 2017年第01期
【目的】使用CRISPR-Cas9系统在山羊CSN2基因座内含子7上筛选出高效的切割位点.【方法】根据"20N+NGG"原则在CSN2内含子7序列中设计了5个sgRNA靶向位点.分别连接具有sgRNA到和Cas9表达框的PX330-P2A-eGFP载体上,通过脂质体转染到实验室保存山羊胎儿成纤维细胞系中,PCR扩增转染阳性的细胞基因组CSN2内含子7序列,连接到Pmd19-T载体中,测序比较不同的sgRNA介导切割产生的突变.【结果】使用5个sgRNA均可以在山羊CSN2基因内含子7上造...
作者:王玮玮; 刘瑞琪; 吴勇延; 杨严格; 王勇胜; 卿素珠 期刊:《畜牧兽医学报》 2016年第07期
CRISPR/Cas(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)系统是由一种短小RNA调控的对DNA修饰的基因编辑工具,是一种较锌指核酸酶(Zinc-fingers nuclease,ZFN)和转录激活因子样效应物核酸酶(Transcription activator-like(TAL)effector nucleases,TALEN)打靶更加快速、高效、精准的新型基因组编辑工具,它易于设计,且具有特异性。本文回顾了CRISPR/Cas系统的结构与功能,...
作者:宋时奎 王影 于洋 耿立召 张春翔 李相敢 韩天富 期刊:《分子植物育种》 2014年第06期
随着转基因技术的发展,出现了多种对基因组进行定点编辑的新技术。本文介绍了常用的植物基因组定点编辑技术的基本原理,特别对新近发展起来的CRISPR/Cas系统的原理、组成及各元件的作用等进行了综述,比较了CRISPR/Cas系统与ZFN、TALEN等常用定点编辑技术的异同。文中列举了利用CRISPR/Cas系统对几种单子叶和双子叶植物进行基因组定点编辑的案例,认为通过CRISPR/Cas系统对植物基因组进行定点编辑是可行的,特别是由于嵌合sg RNA的成...
作者:梁丹 吴宇轩 李劲松 期刊:《生命科学》 2015年第01期
成簇规律间隔短回文重复序列系统(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,associated RNA guided endonuclease Cas9(CRISPR—Cas9)是细菌或古细菌在长期演化过程中形成的抵御外来遗传物质的一种获得性免疫防御机制,其中II型CRISPR.Cas系统依赖Cas9核酸内切酶靶向剪切外源DNA。Cas9内切酶在向导RNA的指导下靶向性地剪切特定基因位点,己被广泛应用在不同种属的基因编辑研究中。利用CRISPR-Cas9基因编辑...