作者:马静; 姚大为; 杨春蕾; 李秋玲; 王添祯; 陈成彬; 宋文芹; 马毅 期刊:《畜牧兽医学报》 2019年第12期
作者:严毅; 许抗抗; 杨洪; 胡大鸣; 杨文佳 期刊:《昆虫学报》 2020年第01期
【目的】探究烟草甲Lasioderma serricorne谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)基因LsGSTe 1的分子特性和生物学功能。【方法】在烟草甲转录组数据的基础上,利用RT-PCR技术扩增LsGSTe 1基因,并进行生物信息学分析;采用qPCR技术检测LsGSTe 1在烟草甲不同发育阶段(低龄幼虫、高龄幼虫、蛹、低龄成虫、高龄成虫)及高龄幼虫不同组织(表皮、中肠、脂肪体、马氏管)中的表达水平,以及在甲酸乙酯熏蒸胁迫后的5龄幼虫中的表达...
作者:薛秀花; 黄晨西 期刊:《生物学通报》 2013年第09期
主要从荧光素酶报告基因的种类和结构、发光机制以及在科学研究中的应用3个方面对荧光素酶报告基因的研究进展作简单介绍。着重介绍了荧光素酶作为报告基因在基因表达研究、药物筛选研究、标记微生物(示踪)、蛋白质相互作用研究、RNA干扰研究、标记细胞活体成像等方面的应用;并对荧光素酶报告基因的应用研究作了展望。
近年来,在许多真核生物中发现了一类内源性的、长度约22个核苷酸的小分子RNA--miRNA(nucroRNA).miRNA的主要功能是调节内源基因表达,参与细胞周期调控及个体发育过程,同时与在RNAi中发现的siRNA具有很大的相关性,可能对基因功能研究、人类疾病防治及生物进化探索有重要意义.
作者:张三泉; 高歆婧; 丘文苑; 陈荃; 周欣; 田歆; 唐志平; 赵恬; 张芳; 李薇; 张锡宝 期刊:《皮肤性病诊疗学》 2014年第04期
目的:构建针对转谷氨酰胺酶1基因(transglutaminase 1,TGM1)的shRNA表达载体,通过脂质体进行HaCaT细胞内转染,筛选出最显著抑制TGM1的shRNA干扰载体。方法:构建三个针对TGM1基因的RNA干扰质粒:pLVX-543shRNAi、pLVX-1265shRNAi和pLVX-1649shRNAi。通过双酶切、PCR鉴定及基因片段测序分析验证构建效果。脂质体介导质粒转染HaCaT细胞。实时定量RT-PCR检测TGM1 mRNA的表达,Western blot检测TGM1蛋白的表达。结果:重组构建的三个...
作者:张琴; 赵胜; 何凯 期刊:《中国牛业科学》 2004年第05期
RNA干扰是一种由双链RNA所引起的序列特异性基因沉默.它是真核生物中基因转录后沉默作用的重要机制之一.这种机制在进化中呈保守趋势,介导对内外源性病理性核苷酸及侵入微生物的抵抗,并在染色质水平、转录水平、转录后水平和翻译水平层次上参与基因表达的调控.基于此机制建立的RNAi技术作为新兴的基因阻抑方法,在功能基因组学、微生物学、基因表达调控机理研究等领域得到了广泛应用.本文从RNAi的作用机制、生物学功能、特点及应用...
作者:刘勃; 陈忠斌; 张立海; 唐佩福 期刊:《中华老年骨科与康复电子》 2018年第01期
细胞自噬是进化过程中高度保守的物质降解再循环过程, 是细胞将异常蛋白质、 受损细胞器转运至溶酶体降解再利用的活动.自噬过程受到精密的调控.自噬功能障碍与神经退行性疾病、 心血管疾病、 肿瘤、 骨代谢疾病、 衰老等的发生有关.MicroRNA是-类对基因进行转录后修饰的非编码单链小RNA.越来越多的证据表明, MicroRNA可以通过调控自噬相关基因及其调节因子来影响自噬水平, 是治疗自噬功能障碍所引发疾病的潜在靶点.本文对有关Micr...
作者:蒋智文; 陈维春; 郑慧玲; 袁源; 刘新光 期刊:《广东医科大学学报》 2015年第04期
目的在HEK293细胞中筛选能有效沉默铜离子代谢结构域包含体1(COMMD1)基因表达的si RN段,并研究si RNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老的影响。方法用RT-PCR初步筛选能够沉默COMMD1的si RNA干扰片段,用定量PCR和免疫印迹法进一步确认si RNA的干扰效果,然后用衰老相关β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测si RNA沉默COMMD1后对HEK293细胞衰老的影响。结果si COMMD1-1对HEK293细胞中COMMD1的沉默效率最高;但si COMMD1-1沉默COMMD1后,未见HEK293...
作者:楚佳奇; 周巍; 李鹏; 高翔; 全娟花 期刊:《广东医科大学学报》 2016年第02期
目的探讨STAT3对弓形虫排泄分泌抗原(ESA)抑制星形孢菌素诱导Raw264.7细胞凋亡的影响。方法利用星形孢菌素制作Raw264.7细胞凋亡模型,通过RNA干扰STAT3表达,弓形虫ESA处理细胞,蛋白质印记法检测STAT3、p STAT3、PARP、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平。结果弓形虫ESA呈浓度依赖性降低Raw264.7细胞Caspase-3活性(P〈0.01),上调p STAT3表达;经STAT3 si RNA转染后,弓形虫ESA对p STAT3、Cleaved PARP、Cleaved C...
作者:汪亚君; 左湘; 黄靓; 马国达 期刊:《广东医科大学学报》 2016年第04期
目的构建含糖尿病相关锚定重复序列蛋白(DARP)基因的重组腺病毒过表达及RNA干扰载体。方法应用PCR技术扩增大鼠DARP基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入表达载体GV-314和GV-119,经基因测序鉴定。用重组DARP过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒pBHGloxΔE1共转染人胚肾细胞HEK293,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。用重组腺病毒感染大鼠H9c2细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western Blot检测DARP蛋...
作者:郭润民; 吴子君; 黄瑞娜; 王志强; 姜佳美; 刘畅; 梁国标; 陈科辉; 李腾; 李上海; 莫海亮; 闫海; 何松坚; 游琼; 吴铿 期刊:《广东医科大学学报》 2016年第05期
目的构建含过表达及干扰人APE1的重组腺病毒。方法应用PCR技术扩增人APE1基因序列,设计并合成shRNA序列,分别插入pDC315-EGFP和pDC316-EGFP-U6表达载体,经基因测序鉴定。用重组APE1过表达和shRNA表达穿梭载体与辅助包装质粒p BHGdelta E1lox3Cre共转染人胚肾细胞HEK293A,进行病毒包装、出毒和扩增,采用终点稀释法测定病毒滴度。用重组腺病毒感染人AC16心肌细胞,荧光显微镜观察绿色荧光强度,Western blot检测APE1蛋白表达。结果基因...
作者:傅佑丽(编译) 期刊:《世界科学》 2008年第01期
许多公司正在意识到,发展基于RNA干扰(RNAj)疗法的新的运载工具将需要协同努力。“我们认为,将小RNA作为递送或运载工具,是现代生物学中最重要的生物医学尝试之一。”位于马萨诸塞州剑桥的奥尼拉姆制药公司的首席执行官约翰·马拉戈诺(John Maraganore)说。“当你遇到这么大的一个挑战和机会时,你无法独自完成——你必须要同外界最好的团队合作。”
作者:江泽淳(编译) 期刊:《世界科学》 2006年第11期
“我从一开始就对这项技术着了迷” 美国马萨诸塞州立大学医学院克雷格·梅洛教授因发现了一个有关控制基因信息流程的关键机制而与同事斯坦福大学的安德鲁·法尔教授分享了今年的诺贝尔生理学或医学奖。这项被称为“RNA干扰”或者“基因沉默”的技术开创了很多全新的疗法,并使得科学家对一切生物(从原始生物到人类)的基本基因功能有了前所未有的认识。
作者:安静; 徐勤枝; 隋建丽; 白贝; 周平坤 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2005年第05期
利用RNA干扰技术构建DNA-PKcs表达抑制细胞模型,探讨DNA-PKcs对HeLa细胞信号转导相关基因表达的调控作用.通过观察细胞对辐射及顺铂的敏感性,鉴定细胞表型变化.用寡核苷酸芯片检测细胞信号转导相关基因的转录谱,并用RT-PCR方法和SEAP检测系统进一步验证基因的表达变化.所筛选出的DNA-PKcs表达抑制细胞对辐射及顺铂的敏感性升高,15个与细胞信号转导相关的基因表达升高,其中7个是与干扰素信号转导反应相关的基因.8个表达下降,包括有...
作者:赵远锋; 文杰; 周天鸿; 邹奕 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2019年第03期
干扰素调节因子6(interferon regulatory factor 6,IRF6)基因突变在单纯型和综合征型唇腭裂中均有报导。然而,其基因突变如何导致了唇腭裂的病理发生目前尚不清楚。本文以培养细胞为模型,研究了IRF6基因沉默对细胞增殖、迁移、凋亡以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,从而探讨唇腭裂形成的可能的分子病理机制。采用分子克隆技术构建IRF6真核过表达载体;设计合成IRF6基因特异siRNA,成功构建IRF6基因沉...
作者:刘全亮; 徐江广; 陈长金; 刘佛林; 曾庆明; 黄若辉 期刊:《赣南医学院学报》 2019年第11期
作者:干慧珠; 张桂珍 期刊:《国际内科学》 2004年第12期
双链RNA能特异性地干扰(抑制)基因的功能,使内源性mRNA降解,导致基因沉默,这种现象称为RNA干扰(RNAi).RNAi是近年来兴起的分子生物学技术,为肿瘤的基因治疗提供了一种有应用潜力的新途径.本文主要综述RNAi现象及其在肿瘤基因治疗研究方面的有关进展.
作者:秦静; 张坚; 段大鹏; 张乐 期刊:《实用癌症》 2019年第11期
目的研究Survivin-shRNA对视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞增殖活性、凋亡指数、侵袭性以及PCNA、CAS-3蛋白表达水平的影响。方法培养视网膜母细胞瘤HXO-RB44细胞,构建Survivin-shRNA载体。按照处理不同分为Survivin-shRNA组、GFP组和CON组。分别检测三组HXO-RB44细胞增殖活性、细胞凋亡指数、细胞侵袭能力及PCNA、CAS-3蛋白的表达水平。结果MTT结果发现,Survivin-shRNA可抑制HXO-RB44细胞增殖能力,差异有统计学意义;流式细胞术结果表...
作者:郭莉群; 程艺; 袁银莉; 孔祥 期刊:《右江民族医学院学报》 2019年第05期
目的构建针对小鼠NLRP3基因的腺病毒干扰载体(Ad-NLRP3-shRNA),并在Min6和RAW264.7细胞中验证其基因沉默效率。方法针对小鼠NLRP3基因设计、合成3对NLRP3shRNA1-3干扰序列,重组至pHBAd-U6-CMV质粒载体。在HEK293T细胞内包装Ad-NLRP3-shRNA。感染Min6和RAW264.7细胞后,采用实时定量-聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测NLRP3基因表达。结果Ad-NLRP3-shRNA1-3在Min6和RAW264.7细胞的干扰效率分别达到44.38%、46.61%和82.83%以及47.23%、49.5...
作者:万为国; 李君; 叶天新; 陈修寰; 杨波; 张翠 期刊:《临床内科》 2019年第10期