目的探讨辛伐他汀对体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导后组织型纤溶酶原激活物(tis-sue-type plasminogen activator,t-PA)和纤溶酶原激活物抑制因子1(plasminogen activator inhibitor-1,PAId)表达的影响。方法应用胰蛋白酶消化法分离HPMCs进行原代培养并传代,将第三代分为5组(每组设3个样本):①正常对照组:将HPMCs置于完...
作者:边爱淑; 胡晔; 杨丽娜; 樊怡; 马健飞 期刊:《中国血液净化》 2018年第02期
目的研究高糖对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)糖萼组成成分透明质酸(hyaluronic acid,HA)、核心蛋白聚糖(decorin,DCN)和炎症及纤维化因子(白细胞介素6,interleukin-6,IL-6);转化生长因子-β1,transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响,以及观察舒洛地特(sulodexide,SLX)对上述因子表达的影响。方法将HPMCs随机分为以下各组:1.对照组;2.高糖组:(1)不同浓度组:1.5%,2.5%,4.25%...
作者:刘伏友; 刘虹; 彭佑铭; 袁芳; 刘映红; 段绍斌 期刊:《中国血液净化》 2004年第10期
目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和TGF-β1反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达及细胞外基质分泌的影响.方法利用带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6)构建TGF-β1短发夹RNA的产生质粒,用pcDNA3.1(-)载体构建反义TGF-β1基因真核表达载体,采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达...
作者:杨丽娜; 樊怡; 马健飞 期刊:《中国血液净化》 2018年第10期
目的观察miR-29a对高糖刺激人腹膜细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)导致上皮细胞-间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的影响。方法应用高糖刺激HPMCs,建立HPMCs EMT模型,运用Real time PCR检测高糖刺激HPMCs不同浓度及不同时间后上皮细胞标志物E-cadherin及间充质细胞标志物α-SMA和FN信号分子的表达水平及miR-29a表达水平变化。然后用miR-29a inhibitor转染HPMCs下调miR-29a表达,运用...
作者:边爱淑; 胡晔 期刊:《航空航天医学》 2019年第10期
目的研究舒洛地特(SLX)对高糖(HG)联合脂多糖(LPS)作用人腹膜间皮细胞(HPMCs)糖萼组成成分透明质酸(HA)、核心蛋白聚糖(DCN)表达的影响。方法将HPMCs随机分为对照组、HG+LPS组、HG+LPS+SLX组:2. 5%HG+10μg/ml LPS+不同浓度SLX(50-1 200μg/ml)作用48 h。ELISA法检测各组上清液中HA、DCN的蛋白表达情况。结果 HG+LPS能轻度上调HA和DCN的表达,SLX作用后能显著上调HA和DCN的表达。结论 HG+LPS刺激可以反应性上调糖萼表达,但其表达不足...
作者:李正红; 史俊; 赵君谊; 张露; 高坤; 盛梅笑 期刊:《南京中医药大学学报》 2019年第04期
目的研究黄芪甲苷对高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMCs)线粒体损伤的影响,并探讨其干预机制.方法①人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)在RPMI 1640(含1%FCS)培养液中培养24 h后分为6组:空白组:正常培养液2 mL;高糖腹透液组:含4.25%PDS 1 mL+正常培养液1 mL;低剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度10μmol/mL;中剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度20μmol/mL;高剂量黄芪甲苷组:黄芪甲苷剂量终浓度40μmol/mL;阳性药对照组:吡菲尼酮50μmol/mL....
作者:张浩; 刘伏友; 刘映红; 廖琴; 龙志高; 吴鼎文; 敖翔; 陈仙花 期刊:《中华肾脏病》 2004年第04期
目的观察转化生长因子(TGF)β1对人腹膜问皮细胞(HPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA和蛋白表达影响并探讨其可能的机制.方法原代培养HPMCs,用5 ng/ml TGF-β1刺激第3代细胞,采用免疫组织化学染色、Western印迹、ELISA和RT-PCR等方法,观察CTGF的mRNA和蛋白表达、纤连蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)的mRNA和蛋白表达,细胞内磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达以及在细胞内的迁移.结果(1)刺激组CTGF的mRNA表达与对照组比均显著增加,其中...
作者:张浩; 刘伏友; 彭佑铭; 刘映红 期刊:《医学临床研究》 2004年第08期
[目的]观察TGF-β1对人腹膜间皮细胞(HPMCs)纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的mRNA和蛋白表达影响并就可能的机制进行探讨.[方法]取健康成年人大网膜进行原代培养,用5 ng/ml TGF-β1刺激第三代培养细胞,采用免疫组织化学染色、Western blot、ELISA以及RT-PCR等方法,分别观察PAI-1的mRNA和蛋白表达,纤维连接蛋白(FN)和Ⅰ型胶原(COLⅠ)的mRNA和蛋白表达,细胞内磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达.[结果]刺激组PAI-1的mRNA和蛋白表达与...
作者:孙芳; 洪富源; 姚建; 黄一新 期刊:《肾脏病与透析肾移植》 2005年第03期
目的:研究内皮素-1(ET-1)及非特异性内皮素受体拮抗剂即ETA/ETB拮抗剂PD142893对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌细胞外基质(ECM)及转化生长因子β1(TGF-β1)产生的影响.方法:以人腹膜间皮细胞株(HMrSV5)为研究对象,采用放免法、半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察不同浓度的葡萄糖及PD142893对HPMC ET-1、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤连蛋白(Fn)分泌和基因表达的影响,及TGF-β1蛋白水平(ELISA),基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因表达(RT-PCR).结果:①...
作者:车明文; 李凤容; 龚莉芳; 方秀凤; 邓海平; 蒋希; 唐亚为; 王汉民 期刊:《解放军医学》 2017年第09期
目的 探讨p53上调凋亡调节因子(PUMA)-α蛋白在高糖刺激诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡及纤维化中的作用。方法 以50mmol/L D型葡萄糖和甘露醇分别刺激HPMC 72h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋白的表达。分别以Lenti-PUMA-α和sh RNA-PUMA-α转染正常的HPMC和高糖刺激72h后的HPMC,采用流式细胞仪检测凋亡细胞数目,Western blotting检测凋亡及纤维化相关蛋白的表达。结果高糖刺激HPMC 72...
作者:凌光辉; 刘伏友; 彭佑铭; 段绍斌; 李军; 陈星 期刊:《中国血液净化》 2007年第09期
目的 研究靶向转化生长因子-β1(TGF-β1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)表达TGF-β1的影响,并观察其对HPMC超微结构的影响. 方法 利用pcDU6质粒构建两个靶向TGF-β1的shRNA真核表达载体pcDU6-A1-A2和pcDU6-B1-B2,使用脂质体介导转染腹膜透析液刺激下的HPMC,采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)检测shRNA表达载体对于TGF-β1基因和蛋白质表达水平的抑制效果,使...
作者:刘虹; 彭佑铭; 刘伏友; 刘映红; 李玲艳; 李军; 陈星 期刊:《湖南医科大学学报》 2007年第03期
目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响。方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30mmol/LD-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应...
作者:洪富源; 孙芳; 刘军; 姚建; 黄一新; 唐知还 期刊:《肾脏病与透析肾移植》 2008年第06期
目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响及细胞内活性氧(ROS)在其中的作用。方法:分别用不同浓度的AGE-HSA及抗氧化剂N-酰-L-半胱氨酸(NAC)作用于细胞,用RT-PCR和ELISA方法测定HPMC中VEGF的表达;再以氧化敏感的荧光染料2、7-二氢二氯荧光素(DCFH)染色,流式细胞仪测定细胞内活性氧强度。结果:AGE-HSA能使细胞内ROS水平明显升高,呈现浓度依赖效应;AGE-HSA同时以...
作者:孙晶娣; 赵久阳; 张怡玲; 陈吉林 期刊:《中国血液净化》 2008年第03期
持续不卧床腹膜透析(CAPD)是目前治疗终末期肾病(ESRD)的主要替代治疗方法之一,以往的研究已表明高糖可导致腹膜间皮细胞损伤,细胞外基质产生增多,最终导致腹膜纤维化。高糖引起腹膜纤维化的机制至今尚未阐明。氧化应激(OS)是指由于促氧化与抗氧化系统两者平衡失调导致活性氧(ROS) 过度产生造成的组织损伤。研究已经证实腹膜透析患者普遍存在氧化应激。
作者:彭翔; 刘伏友; 李军; 凌光辉; 李小利; 薛志强; 曾石养 期刊:《中国血液净化》 2011年第03期
目的研究不同浓度钙对体内外人腹膜间皮增殖、损伤和间质纤维化的影响。方法体外试验:以人腹膜间皮细胞永生化细胞株(HMrSV5)为研究对象,予不同浓度钙(0、0.25、0.75、1.25、1.75、2.25mmol/L)处理该细胞12、24h。采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)评估细胞的增殖能力和损伤。蛋白免疫印迹法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达。临床试验:随机...
作者:洪富源; 孙芳; 刘军; 姚建; 黄一新; 唐知还 期刊:《中国血液净化》 2010年第08期
目的观察糖基化终术产物(advanced glycation end products,AGEs)对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cell,HPMC)分泌单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP—1)的作用及细胞内活性氧族(reactive oxygen species,ROS)在其中的作用。方法分别用不俐浓度的糖基化人血清白蛋白(advanced glycation end products-human serum albumin,AGEHSA)及抗氧化剂N乙酰L半胱氨酸(N-acetyl—L-c...
作者:何劲松; 印荻; 朱桂松 期刊:《中国生化药物》 2008年第06期
目的研究川芎嗪对体外培养的人腹膜间皮细胞在高糖刺激下血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞,分为5组(每组设3个样本):正常对照组(完全培养液)、高糖对照组(2.5%葡萄糖)和高糖(2.5%葡萄糖)加川芎嗪(浓度依次为10,20,40mg/L)组。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内VEGF mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中VEGF的蛋白质水平,用二喹啉甲酸蛋...
作者:樊敏; 刘伏友; 段绍斌; 杨宇; 叶云; 黄谷香 期刊:《中国现代医学》 2010年第05期
目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt通路在转化生长因子β1(TGFβ1)体外诱导的人腹膜间皮细胞(HPMC)上皮-间质细胞转分化(EMT)过程中的作用。方法从人腹膜组织中分离和培养人原代腹膜间皮细胞。观察TGFβ1对人腹膜间皮细胞Akt磷酸化的影响,在不同时间点检测p-Akt的表达水平。采用免疫印迹方法检测应用PI3K特异性抑制剂Wortmannin对TGFβ1诱导后细胞内p-Akt、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏附蛋白(E-Cadherin)表达的影响...
作者:曹东维; 张苗; 蒋春明; 张庆燕; 金波; 邵秋媛; 刘晶 期刊:《江苏医药》 2016年第10期
目的探讨腹膜透析液(PDF)对人腹膜间皮细胞(HPMCs)周期和周期蛋白p16的影响及骨髓间充质干细胞(BMSCs)的干预作用。方法从择期行腹膜透析置管手术者大网膜和PDF中分离培养出HPMCs,比较细胞形态、传代数,了解PDF对HPMCs早衰的促进作用。将PDF加入常规培养的HPMCs,通过HPMCs传代数、细胞周期、p16的检测以观察PDF对HPMCs早衰的影响及可能机制。在培养液中加入BMSCs,观察BMSCs对HPMCs周期和周期蛋白的影响。结果与对照细胞相比,...