作者:傅桂莲; 董俊红; 杜培革 期刊:《中国细胞生物学学报》 2004年第01期
利用基因重组技术,hTRT基因反向插入真核表达载体pcDNA3.0,获得重组体pcDRTRT,通过脂质体法导入人结肠癌细胞株SW-111C,获得稳定转染细胞系,即反义细胞,该细胞易脱落,出现明显生长抑制现象;失去叠落生长能力;流式细胞仪(FCM)证实导入反义hTRT后,G0/1期细胞增加,G2M和S期细胞减少,增殖指数(PI)降低;且不能在软琼脂中形成集落;并发现反义细胞中hTRT表达水平明显下降。说明反义hTRT基因体外导入结肠在细胞株SW-111C可...
作者:陈陵; 杨仕明; 蔡永国; 房殿春; 罗元辉 期刊:《医学争鸣》 2005年第19期
目的: 构建hTERT正义和反义腺病毒表达载体. 方法: 用EcoRⅠ从pGRN145质粒上切下约3.5 kb的人端粒酶全长cDN段,然后连入pDC315质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体,并对正反义重组质粒进一步测序鉴定其方向. 结果: 经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成1.0+6.4 kb两条带. 反义重组质粒为1.0+2.5+3.9 kb三条带,与理论计算值完全一致,测序结果进一步确认了方向的正确性. 结论: 成功构建了hTERT的正、反义腺病毒表达...
作者:黎雅静; 洪雪 期刊:《山东医药》 2018年第34期
目的 观察芦荟大黄素(AE)对人肝癌Hep G2细胞端粒酶活性的影响,并探讨其可能的分子机制。方法取对数生长期的Hep G2细胞,分别以终浓度为0、10、30、50μmol/L的AE作用24 h;收集Hep G2细胞,采用端粒重复序列扩增技术(TRAP)测定Hep G2细胞端粒酶活性,分别以Western blotting、PCR法检测Hep G2细胞中的h TERT、c-myc蛋白和基因表达水平。结果 以终浓度为0、10、30、50μmol/L的AE作用Hep G2细胞24 h,其端粒酶活性分别为0.707±0.001...
作者:刘学强; 杨辉; 何家全; 王斌; 宋业纯; 吕胜青 期刊:《中华神经外科疾病研究》 2006年第01期
目的 明确外源性人端粒酶催化亚单位(hTERT)在人神经干细胞永生化过程中的作用。方法 利用构建了hTERT基因的逆转录病毒载体PLXSN转染人NSCs,G418筛选后,扩大增殖,稳定后观察其生物学特性,检测端粒酶活性,通过核型分析、裸鼠移植致瘤性观察来了解转染细胞特性。结果 hTERT基因转入培养的NSC后,端粒酶活性增强,细胞增殖加速,传代时间缩短,传代50代仍稳定增殖,核型分析正常,无致瘤性。结论 hTERT基因转染NSCs,能获得永...
作者: 期刊:《中国医疗器械信息》 2008年第07期
第55届美国核医学年会于2008年6月14~18日在美国新奥尔良市国际会议中心举行,北京大学第一医院核医学科主任王荣福教授应邀参加了本次会议,他指导的刘萌博士研究生课题"人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义显像实验研究",
作者:王联群; 蓝蔚; 黄培信; 林尊文; 刘德伍 期刊:《中华烧伤》 2010年第01期
端粒酶不仅在肿瘤组织中高表达,在多种干细胞中亦有表达,该酶活性与干细胞维持自我更新的潜能密切相关。表皮干细胞(ESC)具有自我复制能力和多向分化潜能,是皮肤组织工程理想的种子细胞^[1-3]。
作者:李恭会; 成晟; 周酉枫; 陈昭典 期刊:《中华医学》 2009年第40期
目的探讨单个shRNA质粒联合抑制LNCaP细胞人端粒酶催化亚单位(hTERT)和雄激素受体(AR)基因表达的可行性。方法使用RNAi—DNA载体技术,将hTERT和ARsiRNA的DNA模板同时插入到载体Pgenesil,构建成重组质粒Pgenesil—hTERT—AR—shRNA,转染至LNCaP细胞,与空白对照、Pgenesil—HK.shRNA(通用阴性质粒)、Pgenesil—hTERT—shRNA和Pgenesil-AR—shRNA比较,利用实时荧光定量PCR技术观察其对LNCaP细胞hTERT和AR基因mRNA表达的影...
作者:王荣福 刘萌 张春丽 闫平 期刊:《核化学与放射化学》 2010年第01期
制备放射性核素99Tcm标记的针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA的反义分子探针,探讨其在体外的稳定性和相关理化性质。针对hTERTmRNA(GEN—BANK号为AF015950)的第2331~2348位核苷酸(含18个碱基),即5LTCAAGAGCCACGTCTCTA-3’(hTERTSON),设计反义寡核苷酸序列(hTERTASON)为5’-TAGAGACGTGGCTCTTGA-3’;对hTERTASON进行适当修饰。通过双功能螯合剂S-Acetyl NHS-MAG。进行放射...
作者:刘萌 王荣福 张春丽 闫平 于明明 郭凤琴 期刊:《肿瘤学》 2008年第08期
[目的]评价脂质体介导对反义分子探针在体外靶细胞摄取以及在荷瘤裸鼠体内特异显像的不同影响情况。[方法]以双功能螫合剂法,制备^99mTc标记的针对人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的正、反义探针。分别测定在有/无脂质体介导下.不同处理组的细胞对分子探针的摄取率。建立荷MCF-7乳腺癌裸鼠模型,分别经尾静脉注射有/无脂质体介导的正、反义探针。注射后6h对所有裸鼠进行SPECT显像,分别勾画肿瘤部位与对侧相应部位的感兴趣区...
作者:刘洪倩(综述) 王和(审校) 期刊:《国际妇产科学》 2009年第06期
端粒酶是一种能以自身RNA为模板逆转录合成端粒的核糖核酸酶,其激活可能是体细胞向肿瘤转变的关键步骤.是细胞癌变的早期事件。人端粒酶包括2个重要部分,即人端粒酶催化亚单位(hTERT)和人端粒酶RNA(hTERC)。研究揭示,hTERT和hTERC对维持端粒酶活性至关重要。发现端粒酶的活化、hTERT/hTERC的表达变化与宫颈癌的发生、发展有密切关系。开展三者在宫颈癌中的相关研究,将为宫颈癌早期筛查提供新思路和手段。
作者:刘萌(综述) 王荣福(审校) 期刊:《中国医学影像技术》 2009年第01期
人端粒酶(telomerase)与人类的衰老与肿瘤发生密切联系;其主要组成成分之一——人端粒酶催化亚单位(hTERT)是端粒酶的限速亚单位,具有重要的临床应用价值与研究意义。检测端粒酶活性,尤其是hTERT活性,不仅有助于临床诊断肿瘤,而且对于进一步开展端粒酶研究具有重要作用。本文综述放射性核素示踪技术检测端粒酶活性的研究进展。