作者:叶文琪; 薛岚; 王超; 崔文璟; 周哲敏; 刘中美 期刊:《食品与发酵工业》 2019年第19期
选取突变体K49R进行分离纯化、酶学性质表征,并进行全细胞催化合成β-丙氨酸,旨在研究红粉甲虫来源的L-天冬氨酸-α-脱羧酶(L-aspartate-α-decarboxylase,ADC)的酶学性质,并为生物法制备β-丙氨酸提供理论与技术支持。突变体K49R最适pH为6.5,在pH 6.0~7.0之间保持稳定;最适温度为42℃,热稳定性较野生型提高1.7倍;底物亲和力大幅提高,催化效率是野生型的1.8倍。在培养基中添加10 g/L葡萄糖可以有效提高重组菌的生物量,以及重组酶的可溶...
作者:裴朝红; 张红蕾; 张超; 徐志栋; 李玮 期刊:《应用与环境生物学报》 2018年第02期
R)-苯基乙二醇是合成许多光学活性药物的重要手性中间体,其制备具有重要的现实意义. 以α-羟基苯乙酮为底物,从土壤中筛选得到一株能够立体选择性催化α-羟基苯乙酮产生(R)-苯基乙二醇的细菌菌株HBU-SI7. 经形态学观察和16S rDNA序列分析,鉴定此转化菌株为红球菌属菌株Rhodococcus sp. 菌株全细胞催化体系研究表明在邻苯二甲酸二丁酯-磷酸盐缓冲液(V:V = 1:3)的两相催化体系下,菌体转化α-羟基苯乙酮的最优浓度为3.0 g/L,...
作者:欧阳斌; 何钰书; 朱治任; 王普 期刊:《发酵科技通讯》 2018年第03期
阿瑞吡坦是一种神经激肽-1(NK-1)受体阻断剂,是治疗癌症病人化疗型呕吐的药物,具有广阔的市场前景.(R)-3,5-双三氟甲基苯乙醇是合成阿瑞吡坦药物的关键手性中间体.利用生物催化法制备(R)-3,5-双三氟甲基苯乙醇具有立体选择性高、反应条件温和和环境友好等优点,近年来受到广泛关注.主要综述了生物不对称还原制备技术,包括酶催化、微生物细胞催化和重组工程菌催化,酶催化拆分制备技术,以及含离子液体新型介质体系中的微生物全...
作者:孙丽慧; 李胜男; 宫宇晴; 贺雷雨 期刊:《食品科技》 2019年第08期
以Lactobacillus brevis DLF-19076全细胞作为催化剂将谷氨酸钠转化成γ-氨基丁酸。通过单因素实验确定最佳反应条件:缓冲体系为0.2mol/L柠檬酸-Na2HPO4、温度35℃、pH4.5、PLP10μmol/L、细胞浓度100g/L(湿重)、底物浓度为60g/L。采用1%曲拉通X-100对细胞于35℃透化性处理30min后,进行全细胞分批补料实验,经过3次补料后,反应液中γ-氨基丁酸产量为85.71g/L,摩尔转化率为87.84%,最大生产强度为10.96g/L.h。该研究为后续高效生产γ-氨基...
作者:杨玉凤; 费理文; 李建华; 郝千里; 杨靖亚; 王勇 期刊:《工业微生物》 2017年第05期
莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)是一种稀有具有高甜度的甜菊糖苷类化合物。本文实现了重组大肠杆菌全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)合成RD。以水稻c DNA为模板,扩增得到葡萄糖基转移酶基因eugt11,构建了重组菌株E.coli BL21(p ETDuet-eugt11),并成功表达了重组蛋白6His-EUGT11。通过Ni柱亲和层析纯化并在体外酶催化反应表征了其催化活性。将重组菌BL21(p ETDuet-eugt11)应用于催化合成RD研究。探讨了反应体系pH、温...
作者:王迪; 吴令帆; 崔励; 徐同宽; 王大鸷 期刊:《大连工业大学学报》 2019年第03期
以正辛醇和葡萄糖为原料,采用表达β-葡萄糖苷酶的基因工程菌作为全细胞催化剂,合成了正辛基葡糖苷,考察了不同条件对反应的影响。结果表明,表达β-葡萄糖苷酶基因工程菌全细胞为合成正辛基葡糖苷的良好催化剂,在葡萄糖与正辛醇的质量比1∶5、催化剂用量占原料总质量2.0%、体系初始含水质量分数13%、反应温度52℃、反应时间36 h、pH=6条件下,葡萄糖转化率为58.91%,得到产物纯度大于99%。通过红外光谱、拉曼光谱、核磁共振氢谱对产物...
作者:黄楠; 周波; 叶童; 陈桂光; 梁智群; 曾伟 期刊:《食品与发酵工业》 2019年第10期
以黑曲霉H9-30全细胞为催化剂转化麦芽糖生产低聚异麦芽糖,通过单因素实验确定其摇瓶最佳转化条件为:温度48 ℃,初始pH值4.2,麦芽糖质量浓度为600 g/L,黑曲霉细胞添加量为15 g/L。此条件下,有效三糖(异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖)占总糖质量分数的50.5%,总低聚异麦芽糖含量为63.3%,达到低聚异麦芽糖工业生产标准。研究结果表明,利用黑曲霉全细胞催化生产低聚异麦芽糖具有较好的操作稳定性,生产IMO-50的半衰期达到20批次(10 d),有望...
作者:王钰; 陈量量; 杜婷; 李艳; 严明; 郝宁; 许琳 期刊:《食品工业科技》 2015年第13期
本研究将酿酒酵母穿梭质粒p ESC-Leu的诱导型启动子GAL1和GAL10分别替换为PGK1和TEF1启动子,构建了组成型双启动子表达载体p ESCD,再将甜叶菊糖基转移酶UGT76G1的编码基因亚克隆到p ESCD的Sal I和Xho I酶切位点之间,构建了组成型表达UGT76G1的重组质粒p ESCD-UGT。将p ESCD-UGT转化到酿酒酵母YPH499中进行表达,结果确定该重组酵母在SD-L液体培养基培养24h达到稳定期,菌体培养8h蛋白表达量高,选用1%的甲苯作为重组菌全细胞催化的通...
作者:晏星辰; 赵倩如; 王凯峰; 郭玉欣; 江凌; 黄和 期刊:《化工进展》 2018年第05期
海藻糖合成酶一步合成法是制备海藻糖最具工业化前景的方法之一。在前期研究基础上,本研究从发酵产酶和酶催化两方面进一步降低海藻糖生产成本,提高生产效率。首先,采用自诱导表达系统,在摇瓶体系中对含有海藻糖合成酶的大肠杆菌BL21(DE3)进行三阶段温度控制发酵,即以自诱导培养基发酵培养重组大肠杆菌,在37℃培养2.5h,25℃培养10.5h,30℃继续培养至发酵终点;此时,酶活达到1.42×104U/mL,比自诱导恒温提高了57.4%。在此基础上,在5L...
作者:汪庆; 侯泽林; 王利群; 齐丽英; 庞铭鑫; 陈瑶; 张森; 张建达 期刊:《精细化工》 2018年第02期
以2-羰基-4-苯基丁酸乙酯(OPBE)为碳源,从葡萄园土壤中筛选分离得到一株高选择性不对称还原OPBE为(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[(R)-HPBE]的粘质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa CCZU-G5),利用1HNMR、GC-MS、液相色谱(LC)对产物结构进行了表征。构建了Rhodotorula mucilaginosa CCZU-G5全细胞催化还原OPBE合成(R)-HPBE的反应体系并对反应条件进行了优化。结果表明,最适催化反应条件为:在20 mL磷酸盐缓冲液(PBS)反应...
作者:费理文; 王勇 期刊:《食品与发酵工业》 2018年第04期
采用来自水稻的UDP-糖基转移酶EUGT11并结合染色体改造构建了大肠杆菌工程菌,用于全细胞催化莱鲍迪苷A(Rebaudioside A,RA)生产莱鲍迪苷D(Rebaudioside D,RD)。为了增加宿主细胞内源性糖配体葡萄糖尿苷二磷酸(uridine diphosphate glucose,UDPG)的供给以满足糖基化反应需要,以大肠杆菌BL21(DE3)为出发菌对UDPG代谢通径进行改造,获得了一系列改造菌株SG1、SG2、SG3和SG4。其中以SG4为宿主过表达可高效催化RA合成RD的糖基转...
作者:刘念; 高振; 赵倩如; 王凯峰; 郭玉欣; 江凌; 周佳海 期刊:《生物加工过程》 2017年第06期
笔者以麦芽糖为底物,开展经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合成酶催化制备海藻糖的新工艺开发。首先,对比不同透性化试剂对异源表达海藻糖合成酶的大肠杆菌工程菌的透性化处理效果,发现使用硫酸粘杆菌素时海藻糖合成酶的催化转化率高达64.6%,是传统超声破碎的2.63倍;其次,通过参数优化获得硫酸粘杆菌素透性化处理的最佳条件,即:1.5 g/L的硫酸粘杆菌素在30℃下处理60 min,得到的海藻糖合成酶活性最高,为5 209 U/mL;最后,...
作者:唐诗潮; 李晓凤; 袁琨 期刊:《现代食品科技》 2017年第08期
本文研究了培养条件中不同种类、不同浓度的氮源和表面活性剂、发酵时间、温度、转速对黑曲霉全细胞生物量及水解活性的影响规律。研究发现,氮源对于黑曲霉细胞中具有水解活性的诱导酶系的产生具有一定的促进作用,且作用结果因氮源种类不同而异,其中酵母膏对黑曲霉具有最佳的培养效果;当酵母膏质量浓度为1.5 g/L时,黑曲霉生物量达到1.35 g/L,且水解活性达到66.45%。表面活性剂中Triton X-100培养的黑曲霉全细胞催化剂的水解活性表...
作者:余磊; 李骥璇; 王忆茗; 郑桂兰; 王洪钟 期刊:《现代生物医学进展》 2017年第14期
目的:使用表达蔗糖磷酸化酶(EC2.4.1.7,Sucrose phosphorylase,SPase)的大肠杆菌重组工程菌E.coli BL21/pET-spase,作为全细胞催化剂,合成2-O-D-吡喃葡糖基-L-抗坏血酸(Ascorbic acid 2-glucoside,AA-2G)。通过反应条件的优化研究,提高AA-2G的收率。方法:分别考察菌体量、缓冲液pH、蔗糖浓度、维生素c浓度、反应时间和温度对AA-2G合成反应的影响,再组合上述最佳条件进行反应。AA-2G的产量使用高效液相色谱法进行...
作者:朱益波; 鲁如彬; 程俊; 王颖; 齐斌; 王立梅 期刊:《食品科学》 2017年第02期
以巨大芽孢杆菌Z2013513基因组DNA为模板,分别PCR扩增得到L-乳酸脱氢酶基因(ldhL)和葡萄糖脱氢酶基因(gdh),将gdh与ldhL分别连接至表达载体pETDuet,获得共表达质粒pETDuet-ldhL-gdh。经转化和验证获得重组菌大肠杆菌BL21(DE3)/pETDuet-ldhL-gdh。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和比酶活力分析表明重组蛋白L-乳酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶均成功表达且具有酶活力。在37℃、200r/min条件下,经60min反应,催化底物苯丙酮酸...
作者:戴斐; 张雍容; 江正兵; 魏东芝 期刊:《华东理工大学学报·社会科学版》 2007年第02期
酿酒酵母表面展示脂肪酶重组菌株EBY100-pLHJ026在含半乳糖(20 g/L)的YNB-CAA培养基中进行诱导表达,脂肪酶在诱导48 h时酶活达到最高。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物对全细胞酶活进行性质检测,结果表明:对硝基苯酚癸酸酯(C10)为最适反应底物;全细胞脂肪酶在pH 8.0时的最适反应温度为37℃,在60℃保温2 h酶活保持90%,在60℃保温3 h酶活保持55%,表现出较好的热稳定性。在等体积二甲基亚砜中处理3 h后酶活保持28.4%。
作者:毛多斌; 黄顺利; 陈永森 期刊:《日用化学工业》 2007年第05期
较详细地综述了目前国外生物催化合成糖苷的研究进展,并对生物催化制备糖苷的酶的种类、反应介质、反应机理、反应类型及其影响因素进行了介绍。比较了各种生物催化合成糖苷的方法:糖苷酶催化合成糖苷产率一般较低;糖基转移酶需要以昂贵的活化的核苷糖作为糖基供体在辅酶的参与下合成糖苷;用糖苷合成酶合成寡糖,不仅具有立体选择性和区域选择性,而且效率高、底物便宜;全细胞催化合成糖苷具有产率较高,环境友好,产物纯度高...
作者:郭明; 胡昌华 期刊:《中国生物工程》 2010年第04期
与传统的化学合成方法相比,利用生物的手段转化生产活性化合物及其衍生物无疑具有更大的吸引力。随着用于生物转化微生物种类的增多,生物转化的应用领域不断得到扩大。生物转化的发展经历了野生型全细胞催化,基因工程微生物全细胞反应,以及利用系统分析和代谢工程进行全局性调控等几个阶段。以下对这一发展趋势及相关研究的最新进展作一简要综述。
作者:李炳娟; 李玉霞; 李北平; 凌焱; 周围; 刘刚; 张景海; 岳俊杰; 陈惠鹏 期刊:《中国生物工程》 2013年第08期
目的:构建前手性酮类化合物的重组全细胞催化体系,并研究CbFDHC-端无序的11个氨基酸与酶活性的关系。方法:利用基因工程方法构建野生型LbADH,CbFDH及C-端11个氨基酸缺失的CbFDH截短突变体的表达菌株;SDS-PAGE分析其表达方式及表达量,利用分光光度计法测定全菌破碎上清中的酶活性;将含野生型LbADH及CbFDH的菌株与底物混合孵育,考察双菌全细胞体系的催化效果;并将含野生型CbFDH及CbFDH△354-364M的菌液分别与含野生型LbADH...
作者:江逢春; 林影; 叶燕锐 期刊:《微生物学通报》 2010年第10期
通过PCR扩增米黑根毛霉脂肪酶基因,在米黑根毛霉脂肪酶N端加入Flag标签。将米黑根毛霉脂肪酶基因与酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p基因的N端融合构建质粒pPIC9K-Flag-RML-Sed1,转化毕赤酵母GS115获得重组菌GS115/pPIC9K-Flag-RML-Sed1。重组菌经过甲醇诱导表达后,显微镜免疫荧光分析与流式细胞仪检测结果均证实米黑根毛霉脂肪酶已经成功展示在毕赤酵母上。该重组菌水解活力达到169.6U/g(Dry cell weight),在非水相中催化脂肪酸甲酯的合...