作者:蒋爽; 安海山; 徐芳杰; 张学英 期刊:《果树学报》 2020年第01期
【目的】枇杷基因组数据尚未公布,限制了枇杷分子生物学的研究。当前很多研究集中在上游转录因子和下游基因启动子之间的调控关系上,所以获得目的基因的启动子显得尤为重要。传统方法使用PCR方式进行染色体步移来获得启动子区域,耗时且难出结果。【方法】对‘火炬’枇杷进行二代测序,二代测序为双端测序,片段含盖200到500bp的序列。根据下游基因序列通过测序片段来实现染色体步移。使用现有程序Magicblast和新开发的Promoter_Scan...
作者:谢燕伟; 曾鸿秋 期刊:《分子植物育种》 2020年第01期
ETHYLENE INSENSITIVE3-LIKE(EIL)基因家族是乙烯信号通道重要的正调控因子,在乙烯信号传递过程中启动抗病相关基因表达参与植物免疫应答提高植物的抗性。为了研究EIL基因编码蛋白与下游靶基因特异性结合传递乙烯信号,是否参与木薯抗逆境胁迫的调控,本研究从木薯中克隆一个EIL同源基因,命名为MeEIL。分析MeEIL启动子所包含的各种功能元件,结果显示该启动子中含有G-box、W box和MYC等元件。对MeEIL基因的ORF分析结果表明该基因编码...
作者:张金辉; 池明; Yu; Xiang; 王远宏; 李二峰; 刘慧芹; 马睿 期刊:《食品研究与开发》 2020年第02期
多酚氧化酶是普遍存在于植物、动物、细菌及真菌中的一类由核基因编码的具有氧化酚类底物成醌类作用的金属铜蛋白酶,也是褐变过程中的关键酶类。本研究通过对马铃薯基因组数据库检索,发现马铃薯多酚氧化酶包含StuPPO1到StuPPO9中9个基因成员,其中StuPPO5-9为预测基因。同时StuPPO9是生物和非生物因素诱导表达的基因,然而其序列和功能未被验证。本试验以“大西洋”马铃薯叶片为试材,分别提取总RNA和gDNA,对该基因进行分离鉴定,同时...
作者:谢德金; 叶友杰; 杨德明; 张娅欣; 何天友; 陈礼光; 郑郁善 期刊:《药学学报》 2020年第02期
从巴戟天中克隆MEP途径中的1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶基因MoDXR及其启动子序列,并进行生物信息学分析、启动子区顺式作用元件分析,以及进行原核表达分析。根据巴戟天转录组中DXR基因原始序列和NCBI-ORFfinder分析,设计特异性引物,并进行RT-PCR扩增和生物信息学分析;采用染色体步移克隆MoDXR基因的5′端启动子序列;通过亚细胞定位分析MoDXR基因在细胞中的位置;构建原核表达载体pET-28a-MoDXR,导入BL21(DE3)表达感受态细胞后,...
作者:姜树原; 邸娜; 王瑞刚; 邵金旺 期刊:《生物学通报》 2005年第04期
外源基因在植物体内的瞬时性或稳定性表达受植物本身代谢及分子水平的调控,同时也受来自受体植物的限制与修饰.通过调控性元件(启动子)可人为对外源基因进行调节.综述了外源基因在转基因植物体内的表达、调控及人为调节策略.
香港玛丽女王医院进行的研究显示,以慢性乙肝患者的性别、年龄、乙肝病毒(HBV)DNA水平、核启动子突变和肝硬化等为基础的评分系统(GAGHCC),可有效预测患者5年和10年的肝细胞肝癌(HCC)发生危险。
作者:刘春; 徐汉福; 陈玉琳; 李春峰; 张美蓉; 夏庆友 期刊:《蚕学通讯》 2007年第03期
通过显微注射法,将转基因载体pBcA3EG及辅助质粒pA3H导入产后1h的蚕卵,在G3代获得家蚕转基因的阳性个体。通过对G2代转基因蚕基因组的Southern杂交分析表明,获得的该转基因品系为EGFP基因的单拷贝插入。同时对G2代个体不同发育时期及不同组织进行荧光观察,发现EGFP在转基因家蚕幼虫期的表达较其它时期强,而幼虫时期强烈的EGFP主要由中肠组织的杯形细胞高量表达所致。这些结果初步表明A3启动子在家蚕的不同发育时期及不同组织...
作者:张秀娟; 闫吕彬; 赵聪聪; 陈春玲; 吴嫦丽 期刊:《广东医科大学学报》 2016年第03期
目的克隆人多药耐药基因1(MDR1)5'非编码区启动子序列,并检测该段启动子在人肝癌细胞株HepG2中的转录活性。方法提取HepG2肝癌细胞基因组DNA,PCR扩增人MDR1启动子序列(-1 040-+288);采用基因重组技术构建由MDR1启动子驱动的荧光素酶报告基因载体,将该载体瞬时转染HepG2细胞,通过双荧光素酶报告基因试剂盒检测该MDR1启动子在HepG2细胞的转录活性。结果 PCR扩增出人MDR1启动子(-1 040-+288)片段,PCR鉴定、酶切鉴定及测序鉴...
作者:郑世仲; 江胜滔; 陈美霞; 林玉玲; 赖钟雄; 林金科 期刊:《应用与环境生物学报》 2019年第06期
为了解启动子在茶树Ankyrin基因(CsAnkyrin)表达调控中的作用,以茶树新品系‘1005’嫩芽为材料,通过染色体步移技术克隆CsAnkyrin基因启动子序列,利用Neural Network Promoter Prediction和PlantCARE在线软件等对启动子序列进行生物信息学分析,将含有内含子和删除内含子的启动子序列(+intron/-intron)分别定向替换pCAMBIA1301表达载体的CaMV35S启动子,构建重组表达载体后分别转化拟南芥,并进行GUS组织化学染色分析.结果显示,克隆得...
作者:李颖; 戴冰冰; 蔡蓉; 仇全; 于丽莉; 卢健 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2005年第02期
在对人SATB1基因进行生物信息学分析的基础上,采用PCR技术,扩增人基因组DNA中SATB1基因5′上游序列的-2955~-9片段,构建了3个分别由SATB1基因5′上游-2955~-9,-1727~-9和-760--9序列片段驱动的报告载体-pGL3-SP2946-luc,pGL3-SP1718-luc和pGL3-SP751-luc,分别瞬时转染Jurkat T,K562,U937和HeLa细胞,通过测定荧光素酶的表达活性,观察SATB1基因5′上游序列片段3个删除突变体在不同细胞内活性的差异.结果显示,SATB1上...
作者:王稳; 王天云 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2019年第11期
中国仓鼠卵巢(Chinese hamsters ovary,CHO)细胞是目前重组蛋白质生产的首选宿主细胞。利用CHO细胞生产重组蛋白质,启动子是启动转基因转录的关键。核心启动子是RNA聚合酶与转录起始复合物集合的部位,分为集中型和分散型两种类型。目前,CHO细胞常用的启动子为病毒启动子、异源启动子、内源性和诱导性启动子等。也可以利用合成生物学及相关的数据库,人工设计合成启动子及鉴定新型启动子。本文综述了CHO细胞常用的启动子以及人工设计...
作者:袁玉辉; 肖强; 唐武建; 刘忠松; 刘显军 期刊:《宜春学院学报》 2019年第12期
BjTT8A基因是芥菜型油菜的类黄酮合成途径中重要的调控基因之一。为进一步分离调节BjTT8A基因表达的转录因子,建立了芥菜型油菜酵母单杂交cDNA文库,以BjTT8A的启动子构建诱饵融合载体,筛选cDNA文库,获得33个阳性克隆。序列分析结果表明,31个克隆与十字花科植物甘蓝型油菜,白菜,萝卜,荠菜的蛋白具有高度同源性,对其氨基酸序列进行同源比对和功能结构域分析,发现涉及光调控的捕光叶绿素a/b结合蛋白cp29.2,蛋白质积累的锌金属蛋白酶eg...
作者:刘子记; 刘维侠; 牛玉; 杨衍 期刊:《种子》 2020年第01期
为探明Cf9基因的表达调控元件和同源基因进化关系,从樱桃番茄品种京番红星中克隆了Cf9上游序列,利用PlantCARE启动子预测工具对转录起始位点上游1500 bp序列进行顺式调控元件分析。结果表明,Cf9启动子不仅含有TATA-box和CAAT-box等核心元件,而且含有光响应元件、茉莉酸甲酯响应元件、水杨酸响应元件等。Cf9基因可能受光、水杨酸和茉莉酸甲酯等诱导表达。Cf9同源基因系统进化分析结果表明,当同源指数为0.65时,番茄、马铃薯、辣椒、...
作者:张宇婷; 朴钟云; 刘迪; 曲柏宏 期刊:《延边大学农学学报》 2019年第04期
利用RACE和染色体步移技术首次从桦褐孔菌中克隆得到三磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)基因和启动子序列。桦褐孔菌GPD基因的cDNA序列全长1223 bp,其中,编码区1020 bp,共编码339个氨基酸,相对分子质量约为36.39 kDa,理论等电点为8.28。序列比对结果表明:桦褐孔菌GPD基因与鲍姆桑黄(Sanghuangporusbaumii)相似度为88%。利用染色体步移技术方法克隆得到GPD基因起始密码子上游446 bp启动子序列,分析表明在152 bp和160 bp处有2个转录起始位点,含...
作者:王晶晶; 杨涵羽璐; 代蓉; 杨华; 石国庆; 杨永林; 万鹏程 期刊:《中国畜牧兽医》 2019年第10期
作者:杨华婷; 李辉; 李兴才; 赵忠海; 师新彩 期刊: 2019年第12期
为研究MEF2C基因启动子区SNPs对屠宰性状的影响,本实验运用直接测序法筛选兴义鸭MEF2C基因启动子区的SNP位点,并分析其与屠宰性状的相关性。结果表明:在兴义鸭MEF2C基因启动子上存在8个SNPs位点,分别为T-190A、A-232G、A-285G、A-617T、G-1420A、A-1437C、T-1504G、A-1524G;生物信息学分析发现T-190A、A-232G、G-1420A突变位点周围HOXA4、GCN4、Pit-1a、IRF-1等重要转录因子结合位点消失,继而生成Oct-1、ICSBP 2个新的转录因子结合...
作者:陈立; 张晓东; 王心怡; 韦清源; 李虎; 綦熿松; 刘芳; 关和新; 邱永福 期刊:《南方农业学报》 2019年第10期
【目的】克隆水稻TFL2(OsTFL2)启动子序列,并分析其结构和功能,为深入研究OsTFL2基因对水稻开花和花发育的调控机理提供理论参考。【方法】采用同源克隆方法克隆OsTFL2基因启动子序列,利用PLACE和PlantCARE分析其结构和功能,并将其连接至携带β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因的pCAMBIA1301载体以构建pCAMBIA1301-Promoter植物表达载体,通过农杆菌介导转化水稻品种农垦58愈伤组织,通过对转基因植株进行GUS组织化学染色以分析该基因启动子的...
作者:李天聪; 王擎; 王建霞; 张燕; 申珅 期刊:《河北农业大学学报》 2019年第05期
本研究利用生物信息学手段分析了玉米大斑病菌高亲和力cAMP磷酸二酯酶(High-affinity cAMP phosphodiesterase,H-PDE)和低亲和力cAMP磷酸二酯酶(Low-affinity cAMP phosphodiesterase,L-PDE)氨基酸序列同源性,发现StH-PDE与狂犬壳二胞菌(Ascochyta rabiei)、小麦黄斑叶枯病菌(Pyrenophora triticirepentis)、链格孢(Alternariaalternata)中同源蛋白的氨基酸序列相似性分别为69.21%、84.21%、85.94%,StL-PDE与狂犬壳二胞菌、壳球孢...
作者:韩琪; 胡波; 李升云; 董双林 期刊:《南京农业大学学报》 2019年第06期
[目的]本文旨在鉴定重要农业害虫斜纹夜蛾(Spodoptera litura)气味结合蛋白基因GOBP2的顺式作用元件,为揭示GOBP2的转录调控机制和开发基于嗅觉干扰的害虫防治技术奠定基础。[方法]利用5′RACE技术克隆GOBP2的5′UTR,确定转录起始位点;利用染色体步移技术(chromosome walking)克隆GOBP2的5′侧翼区,并利用在线网站预测转录因子结合位点;利用PCR克隆GOBP2的5′侧翼区逐步缺失片段,并构建到pGL3-Basic载体上;将各重组载体分别转染Sf9...
作者:林榕燕; 方能炎; 罗远华; 黄敏玲; 叶秀仙; 钟淮钦 期刊:《西北植物学报》 2019年第10期
糖基化转移酶(UGTs)能够维持植物体内的激素平衡,广泛参与植物的生长发育及逆境胁迫应答。该研究从矮牵牛(Petunia hybrida var. Mitchel diploid)中克隆了UGT74E2的同源基因PhUGT74E2及其启动子序列,并分析了序列特征和蛋白结构特点,同时采用qRT-PCR对该基因在不同组织、不同逆境胁迫下的转录水平进行了检测,以探讨矮牵牛UGT74E2基因的功能,为揭示其调控矮牵牛抗逆性的分子机制奠定基础。结果显示:(1)成功克隆获得矮牵牛UGT74E2基...