作者:王友如; 胡莎; 崔永涛 期刊:《湖北师范大学学报·哲学社会科学版》 2005年第02期
常规的农杆菌质粒DNA提取常采用碱裂解和酚、氯仿提纯方法,得率较低,一般在50ng/uL以下.就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚、氯仿提取过程,减少了提取过程中对人的伤害,且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较,实验结果表明:改进的方法二更适宜于做PCR检测,而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切、PCR鉴定等.
作者:王楷宬; 王素春; 樊擎莹; 孙亚伟; 康京丽; ; 刘华雷; 龚振华; 黄保续 期刊:《中国动物检疫》 2020年第02期
为建立一种快速准确检测鸡传染性支气管炎病毒的方法,根据鸡传染性支气管炎病毒的核衣壳蛋白基因进行引物和探针设计,建立了一种能够检测鸡传染性支气管炎病毒的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法进行特异性和灵敏度检测,同时与国家标准检测方法进行对比。结果显示,本检测方法特异性好,不与其他相关病毒发生交叉反应,灵敏度可达到10-4 ng/μL,与国标检测方法的符合率达100%。结果表明,本研究建立的检测方法可以准确鉴定鸡传染性支气管...
作者:张琳; 汤承 期刊:《青海畜牧兽医》 2019年第06期
2018年7月,青海省玉树地区一牦牛养殖户2~3月龄的犊牦牛爆发以腹泻为主要症状的疾病。本实验的目的是调查腹泻的病因并了解病原的分子特征。无菌采集9份犊牦牛腹泻粪便样本,采用PCR检测方法对牛冠状病毒、牛轮状病毒、牛病毒性腹泻病毒、沙门氏菌、产肠毒素大肠杆菌、安氏隐孢子虫等6种常见致腹泻病原进行了检测。结果显示,9份样本中有6份为牛冠状病毒阳性,其它5种病原均未检出。对6份阳性样品进行冠状病毒S1亚基基因扩增,序列分析...
作者:吴斌; 徐德坤; 姜珊珊; 张眉; 王升吉; 马永利; 辛志梅 期刊:《山东农业科学》 2019年第12期
葡萄病毒病严重影响葡萄的产量和品质,是制约葡萄产业发展的重要因素。为明确该病害在山东省的最新分布状况及病原种类,2016—2018年采用田间调查结合RT-PCR检测等方法对山东省葡萄主要病毒病进行了研究。结果表明,186份样品中共检出GLRaV-1、GLRaV-3、GRSPaV、GFLV、GFkV 5种病毒,检出率分别为18.82%、9.68%、16.67%、1.61%、33.87%,且复合侵染发生普遍,检出率为16.67%;树龄较大的葡萄园以GLRaV-1、GLRaV-3病毒侵染为主,新建葡萄...
作者:李文学; 吕苗苗; 胡丽杰; 闫思远; 孙牧笛; 顾沛雯 期刊:《西南大学学报·自然科学版》 2019年第10期
宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄卷叶病病株率较高,严重影响了酿酒葡萄产业的健康发展,但有关其病原葡萄卷叶伴随病毒(Grapevine leafroll-associated virus,GLRaVs)的遗传变异情况则鲜有报道.利用RT-PCR技术对宁夏酿酒葡萄不同种植区的7个主栽品种的GLRaV-1和GLRaV-3进行分子检测,利用SSCP技术对扩增片段进行遗传变异分析.试验结果共获得8个GLRaV-1和13个GLRaV-3的阳性样本.8个GLRaV-1分离物基于CP基因分析差异明显,可分为3类;13个GLRaV-3...
作者:孙勋勋; 周轶楠; 黄吉雷; 易辉玉; 田铃; 刘吉平 期刊:《植物保护》 2019年第05期
桑树病毒病一直是影响蚕桑产业发展的重要因素之一,但其病原也尚未完全确认。本研究收集全国不同桑园、不同时间和不同品种的皱缩状和花叶状桑叶样品,分离病毒后使用透射电子显微镜观察病毒形态特征。结果在桑病叶中分离获得两种病毒,一种为双联体形态病毒,长(27.84±1.71)nm,宽(17.05±1.13)nm,形态特征与双生病毒属的病毒形态特征一致;另一种为球状体病毒(80~100 nm),形态特征与番茄斑萎病毒属的病毒形态特征一致;桑叶切片观察,发...
作者:曾庆雄 期刊: 2009年第09期
8月份高要市养殖的罗非鱼发生暴发性流行病害,通过到现场开展病情调查,解剖病鱼,与当地的渔业主管部门、技术人员和多位养殖户进行交谈,详细了解发病的情况,并取样带回实验室进行病原分离鉴定。从病鱼肝脏、肾脏、脾脏和脑分离到细菌,经染色及PCR检测后判断为链球菌,
作者:王金福; 张永霞; 顾剑新; 孙维平 期刊:《家畜生态学报》 2009年第04期
犬瘟热(CD)发病率近年来在我国呈明显上升趋势,对早期CD诊断方法的发展和完善,有利于指导临床及时治疗,对于控制CD的蔓延有重要意义。根据GenBank中CDV核衣壳蛋白(N)基因序列,设计合成一对特异性寡聚核苷酸引物,提取CDV疫苗株的总RNA进行反转录和PCR,建立RT-PCR检测方法,并应用于临床病例的诊断,同时和CDV抗原快速诊断试纸进行比较。结果显示:RT-PCR有很好的敏感性和特异性,适合对CDV进行早期快速诊断和流行病学调查。
作者:傅小红; 杨其明; 徐景野; 宋启发 期刊:《预防医学》 2007年第10期
乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种严重影响我国人民健康的传染病,检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是反映HBV复制的程度,考核抗病毒药物治疗效果的重要依据。用PCR检测HBV-DNA是最常用的检测方法,由于该法受一系列的技术以及人为因素影响,易使检测结果产生误差,甚至造成假阴性的结果。为此,我们对48份HBV-DNA检测阴性标本,用多种不同厂家生产的PCR试剂进行同步复核,探讨其假阴性结果的真实性,现报道如下。
作者:孙爱华; 翁惠华; 孙琦 期刊:《预防医学》 2004年第09期
目的建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体二重PCR临床快速检测方法,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎(CP)病变程度的关系.方法对158例不同病变程度的慢性牙周炎龈下菌斑标本,采用PCR检测标本中齿垢密螺旋体16S rDNA和特征性外膜蛋白基因tdpA.结果85.4%标本16S rDNA阳性,77.2%tdpA阳性,14.6%两者均阴性,未发现tdpA阳性而16S rDNA阴性的标本.重度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均高于中度CP,中度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出...
作者:崔菲; 王子岚; 高品红; 王浩; 杜克久 期刊:《林业与生态科学》 2011年第03期
自然界中真菌种类很多,一些对人类有益,然而有很多会对人及动植物致病。对真菌的检测鉴定在医学、植物检疫以及真菌分类学研究方面具有重要的意义。PCR检测是目前真菌鉴定的常规检测手段,用于PCR检测的真菌基因组DNA制备是相关领域研究热点,对用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备方法进行综述。
作者:Manju; Sethi 期刊:《生物产业技术》 2011年第02期
实时PCR方法功能强大,若能正确运用,可以获得极有价值的检测结果。按照MIQE指南规范实验.注重PCR检测前待测样品的制备步骤,都将有助于确保实验的成功。
作者:张新艳; 樊海平; 林煜; 吴斌 期刊:《渔业研究》 2015年第01期
根据已知刺激隐核虫ITS序列设计引物,扩增刺激隐核虫ITS部分序列,并进行克隆、测序及序列分析建立刺激隐核虫PCR快速检测方法,检测DN段长度为387 bp,与福建长乐CL1209(KC550300)、福建福鼎FD1210(KC550302)、广东番禺PYH4.12株(DQ270010)、日本Wakayama分离株(AB608054)、台湾嘉义Chiayi株(AF490381)等序列同源性为100%,检测灵敏度为2个虫体。应用建立方法对2011-2013年收集到的50份患刺激隐核虫病的大黄鱼样品进行检测,...
作者:施静; 刘梅芳; 冯斯峰; 熊尤龙; 张霞辉; 杜福生; 张懿 期刊:《时珍国医国药》 2017年第08期
目的观察头针加体针对脑梗死大鼠骨骼肌α-actin m RNA表达的影响,初步探讨针刺对脑梗死偏瘫骨骼肌的作用机制。方法按时相在规定的骨骼肌部位取材并标记,采用定量法提取骨骼肌RNA、通过荧光定量qRT-PCR检测,观察大鼠患侧骨骼肌中α-actin m RNA的表达变化。结果 A、B、C三组的前肢肌、腓肠肌、腰大肌中α-actin m RNA表达与D、E组相比较均有明显的变化,且C组在0h、24h、48h时与其他组比较,基因表达均有显著差异性(P﹤0.001),B组与A...
作者:孙凯; 周四维; 罗刚; 曹正国; 鲁雄兵; 叶章群 期刊:《中国全科医学》 2005年第04期
目的向人外周血来源的树突状细胞(DCs)转染人MUC1 质粒,使DCs特异性的表达和提呈MUC1.方法应用脂质体将人MUC1质粒转染体外培养的外周血来源的DCs,RT-PCR检测转染人MUC1质粒DCs的表达.结果转染MUC1质粒的DCs,RT-PCR检测有一特异性扩增带.结论用脂质体能成功地将人MUC1质粒转入DCs并表达.
目的 研究乙肝患者的免疫学检测方法同HBV-DNA之间的关系,在乙肝患者的治疗中,保证检测方法的可靠性、准确性.方法 用酶联免疫吸附技术(ELISA)进行HBV患者的免疫学检测,用实时荧光聚合酶链反应技术(PCR)进行HBVDNA的检测,用统计学的方法对结果进行分析.结果 217例标本由上述两种技术同时进行测定,由PCR技术检测出的阳性率与ELISA技术检测出的阳性率之间比较,差异有统计学意义(P<0.05);而HBV-DNA阳性拷贝数与ELISA技术检测出的“大...
作者:吴宇阳; 陈龙彪; 王林青; 崔保安; 卢权威; 钞安军; 李坤; 陈红英; 魏战勇 期刊:《安徽农学通报》 2013年第04期
2012年9月河南省新乡市某养猪场发生一例以初产母猪流产、死产,断奶仔猪精神沉郁、呼吸困难、食欲不振、轻微腹泻、渐进性消瘦为特征的疾病。采用PCR技术进行检测,结果表明猪圆环病毒2型和猪细小病毒均为阳性,结合发病情况、临床症状及剖检变化,初步确定为PCV2和PPV混合感染。
作者:胡瑞萍; 刘磊; 边艳青; 赵宝华 期刊:《中国兽药》 2008年第06期
本文就近年来国内外在无乳链球菌的鉴定、检测方法、防御等方面的研究进展进行了系统性的综述,为控制该病原微生物的传播、蔓延和由无乳链球菌引起的奶牛乳腺炎的防治提供参考。无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)属于B群链球菌,是影响人畜健康的重要病原微生物之一。它可以引起新生儿脑膜炎、肺炎、败血病等,又是奶牛乳腺炎的主要病原体之一,给奶牛业造成了巨大的损失。