作者:刘占悝; 刘泽余; 李智杰; 孙飞雁; 郭利 期刊:《中国兽医科学》 2020年第01期
牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是牛的主要病原之一,对全球养牛业造成了巨大的经济损失。本文根据GenBank中BVDV基因组中5′-UTR序列合成引物,建立了同时检测BVDV两个基因型的RT-PCR方法。结果显示,所建方法具有较强特异性和敏感性,可扩增出长约300 bp的特异性片段,最低检测限量为6.8×10~3copies/μL。用该方法对30份临床样品进行病原检测,结果显示,BVDV阳性样品4份,阳性率为13.33%。对阳性PCR产物测序及序列分析的结果表明,该牛病毒性腹泻...
作者:黄海鑫; 宋心玥; 汪伟; 李笨; 王茂鹏; 肖朋朋; 郑敏; 金宁一; 孙文超; 鲁会军 期刊:《中国兽医科学》 2020年第02期
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪肠道α冠状病毒(PEAV)是两种新发现的猪传染性冠状病毒,临床上均以腹泻症状为主,症状相似,临床上难以快速诊断。为建立一种快速、准确区分PDCoV和PEAV的二重RT-PCR方法,本研究根据PDCoV和PEAV N基因序列,分别设计2对特异性引物,以阳性质粒为模板,对二重RT-PCR反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性试验。结果显示,所建立的方法能够扩增出PDCoV和PEAV的特异性片段,大小分别为690 bp和208 bp,且对猪流行...
作者:李聪娜; 刘峰; 张旭; 任永娟; 汤翰臣; 阙友雄; 苏亚春 期刊:《分子植物育种》 2020年第01期
类甜蛋白(thaumatin-like proteins,TLPs)是一类与作物抵抗真菌病害紧密相关的病程相关蛋白。本研究从课题组前期构建的甘蔗(Saccharum spp.)转录组数据库中筛选获得两个甘蔗类甜蛋白基因(ScTLP2和ScTLP3),利用生物学软件对ScTLP2和ScTLP3基因进行序列特征、结构功能及聚类分析,采用qRT-PCR技术,检测ScTLP2和ScTLP3基因在不同甘蔗组织和黑穗病菌(Sporisorium scitamineum)胁迫下的表达情况。生物信息学分析显示,ScTLP2基因全长1835...
作者:冯帆; 卢建远; 黄坚; 汤承 期刊:《四川畜牧兽医》 2020年第01期
本试验的目的是对1例以呕吐和血便为突出症状的6月龄博美犬进行病原检测。采用PCR方法检测了犬细小病毒、犬冠状病毒、犬瘟热病毒、犬圆环病毒和犬星状病毒五种致犬腹泻的病毒,结果显示为犬细小病毒和犬圆环病毒的混合感染。本试验为犬病毒性腹泻的病原诊断提供了参考。
作者:宇芙蓉; 汪学龙; 汪秀琴 期刊:《中国地方病防治》 2019年第05期
作者:田敏; 冯震; 曲瑞丹; 黄静; 戚稼禹; 曹杰 期刊:《食品工业科技》 2020年第01期
目的:为了建立一种高效分离筛选高产蛋白质谷氨酰胺酶的解朊金黄杆菌的筛选方法,采用肠道基因间重复序列扩增(ERIC-PCR)和全自动核糖体分型方法对来自不同环境的33株解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)进行分子分型研究。方法:采用ERIC国际通用引物对33株解朊金黄杆菌进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测,使用NTsys软件对电泳图进行聚类分析。同时,采用全自动核糖体分型方法对33株解朊金黄杆菌进行核糖体分型,采用Bionumer...
作者:吴洁; 伊洁; 甘勇; 徐英春 期刊:《中国医学装备》 2020年第02期
目的:评价采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测人类白细胞抗原B位点5801(HLA-B*5801)等位基因的重复性、准确性和最低检出限。方法:选取HLA-B*5801阳性和阴性样本各2例,每一样本每批内测定5次,连续测定2 d,共重复测定10次,评价方法的重复性。收集20例已知阳性和阴性样本,实时荧光定量PCR方法进行检测,同时与金标准DNA测序法的结果进行比对,评价方法的准确性。同时进一步选取其中1例阳性DNA样本进行梯度稀释后再行检测,评价...
作者:冷海楠; 张玉; 徐明仪; 王丽媛; 付晓玲; 崔福星; 杨立宾; 朱道光 期刊:《林业科技》 2020年第01期
采用L16(4^5)正交试验设计,对影响兴安落叶松SSR-PCR反应体系的主要因素(模板DNA、d NTPs、Mg^2+、Taq聚合酶浓度及引物浓度)进行了试验分析,其结果表明:兴安落叶松SSR-PCR体积为20μL的最佳反应体系是模板DNA用量50 ng、正反向引物浓度均为5μmol·L^-1、d NTPs浓度为2.5 mmol·L^-1、Mg^2+的浓度为2.5 mmol·L^-1、Taq聚合酶用量为1.0 U、最佳退火温度为60℃。试验所建立的反应体系可进一步用于兴安落叶松SSR遗传图谱构建、多样性分析...
作者:赵翊林; 孟繁荣; 张春香; 任有蛇 期刊:《中国草食动物科学》 2020年第01期
为探究脂质载体蛋白(Lipocalin,Lcn)家族中Lcn8 mRNA在成年公山羊组织中的表达特点,采集3只5周岁成年公山羊的附睾头、附睾体、附睾尾、睾丸等生殖器官以及脾、肺、肾等组织器官,采用qRT-PCR对Lcn8 mRNA的组织表达特点进行研究。结果显示:Lcn8 m RNA在生殖器官中的表达量较高,其表达高峰在附睾头1;Lcn8 mRNA在气管中也有较高表达,在泌尿器官和消化器官中仅有微量表达。推测Lcn8可能与精子的发生和成熟过程有关,而且参与了机体的免...
作者:姜玲玲; 徐雨; 余国富; 魏赐开; 唐远江; 卢昱希; 蒲龄; 杨莉; 余波 期刊:《贵州农业科学》 2020年第01期
为屠宰环节PCV3分子流行病学调查诊断提供参考,根据猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)特异性序列设计引物,通过敏感性试验、特异性试验、重复性试验及测序验证,建立的PCR方法能扩增出649 bp的目标片段,其具有较好的敏感性,可扩增的最低模板浓度为0.143 ng/μL;并用建立的PCR方法对屠宰场送检的376份组织样品进行检测结果表明,PCV3平均阳性率为12.9%。
作者:郑辉; 邓楷煜; 陈安琪; 付绍兵; 周德; 王威威; 倪典墨; 任瑶瑶; 周嘉裕; 廖海 期刊:《药学学报》 2019年第12期
基于ITS2与psbA-trnH条形码序列,对川贝母及其近缘种开展分子生物学鉴定与亲缘关系研究。本文在采用《中国药典》规定的PCR-RFLP鉴定方法对川贝母及其近缘种的鉴定基础上,扩增所有样品的ITS2及psbA-trnH条形码序列,对其遗传距离进行分析,构建进化树,评价ITS2及psbA-trnH条形码的鉴定效果,探讨样品的亲缘关系。结果显示,PCR-RFLP方法仅能将样品分为非酶切组(包括平贝母、浙贝母及伊犁贝母)与酶切组(包括浓蜜贝母、中华贝母、康定贝...
作者:曾茜垚; 乔克威; 李雨嫣; 周喜新; 杨华; 熊兴耀 期刊:《中草药》 2019年第22期
目的探究控制青藤碱含量的表达基因、青藤碱合成途径中的控制位点以及表达路径。方法利用HPLC法对6个种群共49株青风藤的根和茎分别进行了青藤碱含量的测定,选定青藤碱含量差异倍数大的2个种群,即陕西宝鸡与贵州遵义,分别选取其中最具代表性的青风藤植株,并取其根和茎进行转录组测序,命名为HR/LR、HS/LS。结果将clean reads进行拼接得到355201个转录本,其中包括275491个Unigene。在HR/LR和HS/LS中差异基因分别有23562和37143个。GO...
作者:王磊; 时军利; 李炳庆 期刊:《心理月刊》 2018年第07期
PCR是一种重要的分子生物学技术。对高中生物学5个版本教材中“DN段的体外扩增”进行了比较分析。旨在探讨该实验在中学开展的可行性。
高中生物学课程标准选修模块1涉及3个与DNA相关的实验:DNA的粗提取及鉴定,PCR和DNA电泳,其中后2个实验开展的难度较大,除硬件因素外,实验条件的摸索和材料准备也是难以解决的问题,本研究力求将3个实验有机结合,摸索了实验条件,在一定程度上解决了实验材料的问题,同时探究了3个实验之间的内在联系,为这一部分的教学提出了建议。
作者:江瑞宁; 万苾馨; 苏新华; 窦向梅 期刊:《生物学通报》 2019年第01期
目的:利用聚合酶链反应(PCR)技术,建立鱼类制品中河豚鱼成分的分子生物学鉴定方法,弥补河豚鱼形态学鉴定的缺陷.方法:通过阅读文献,确定河豚鱼鉴定的靶基因并筛选特异性引物,提取河豚鱼DNA,优化PCR反应条件,扩增河豚鱼特异性DN段,并通过DNA电泳显示特异性扩增的DNA条带.结果:选择细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(CoⅠ)作为河豚鱼成分鉴定的靶基因,PCR最佳反应条件是退火温度68℃,镁离子浓度2.0 mmol/L,DNA模板加入量0.07~0.1 μg.河豚鱼特异性...
针对“PCR”实验在实际教学中存在的问题,对实验背景和实验方案进行适当改进和完善,使实验设计更具有严谨性和可操作性,更利于教学开展。
作者:代洪亮; 严人; 王普; 黄金 期刊:《生物学通报》 2013年第06期
实时定量RT—PCR是一种高效检测低丰度mRNA的方法,该方法具有易操作、高通量、敏感度高和特异性强的特点。本文对实时定量RT—PCR在真核生物中的原生动物和真菌、细菌以及非细胞类病毒三大微生物类群中的研究进展加以简要综述,同时对实时定量IKT—PCtK在微生物分子特性研究中的应用作了展望。
目前,国内外应用SARS特异性实验诊断方法主要有PCR,血清抗体和病毒分离鉴定.与之相对应诊断产品主要是试剂盒,生物芯片等.在实际应用中,试剂盒是使用最多最广泛的一类.试图对现有的一些SARS诊断试剂盒作一概述介绍,提供更多的信息供参考.
作者:袁柏强; 杨培文; 黄爱仪; 利桂河; 陈效强; 李秋明 期刊:《心电图》 2019年第03期