作者:王雅婷; 柴娟; 张红丽; 刘霞; 虞一聪; 倪柏锋; 赵灵燕; 徐辉; 谢荣辉 期刊:《中国畜牧兽医》 2019年第12期
为了解2014-2016年浙江地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF 5基因变异情况,试验通过RT-PCR方法对从浙江省各地区采集的PRRSV阳性病料进行ORF 5基因扩增,应用DNAStar和Mega 5.1软件对所测序列进行同源性和遗传变异分析。结果显示,54株2014-2016年浙江分离株ORF5序列之间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为83.1%~100%和80.6%~100%,与经典株VR2332核苷酸和氨基酸序列同源性分别...
作者:牛江婷; 伊淑帅; 胡桂学; 郭衍冰; 张双; 郭梦茹; 董国英 期刊:《中国兽医》 2018年第01期
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的一种以急性腹泻、呕吐、严重脱水为主要临床症状的急性、高度传染性、高致死性病毒性肠道传染病。PEDV可感染各年龄段的猪,以哺乳仔猪最易感,经口鼻感染后病毒直接进入小肠,在肠绒毛上皮细胞增殖进而对细胞器造成损伤,导致的细胞功能障碍引起肠黏膜细胞坏死、肠绒毛脱落,从而引起腹泻,脱水,小肠臌气、扩张、积液等临床症状,严重者可导致仔猪死亡。
作者:鲁仁义; 张晓龙; 阎澜; 姜远英 期刊:《中国真菌学》 2018年第02期
目的构建白念珠菌ORF19.6012-MYC融合菌株。方法利用In-Fusion试剂盒构建插入片段,采用醋酸锂转染法将片段同源重组至SN152基因组DNA中,采用PCR以及Western blotting方法进行验证,对验证为阳性的菌株进行生长曲线的测定及菌丝诱导实验。结果经验证,成功构建ORF19.6012-MYC融合菌株,且ORF19.6012-MYC融合菌的生长增殖能力、液体菌丝形成能力与亲本菌一致。结论采用同源重组的方法成功构建稳定表达的ORF19.6012-MYC融合菌株。
作者:刘雅婷; 李正跃; 朱有勇; 李成云; 期刊:《遗传》 2005年第06期
应用SignaIP 3.0对植物病原细菌Pseudomonas syringae pv.tomato DC3000菌株基因组中的细菌染色体全部5 615个ORFs进行了分析,确定其中679个ORFs所编码蛋白质的N-端有信号肽序列,其中已经命名并有注释的有107个ORFs.信号肽的长度以19~31个氨基酸居多,其中最多的是23个氨基酸的信号肽.具有信号肽的ORFs编码蛋白的长度大多为101~400个氨基酸之间.同时,对组成信号肽的氨基酸种类作了系统的分析,发现组成信号肽的氨基酸中非极性氨基...
作者:何晓健; 张柳; 程亚东; 杨焕文; 毛自朝 期刊:《分子植物育种》 2019年第15期
2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2C-type protein phosphatases, PP2C)是ABA信号转导途径中的关键组分,在植物生长发育、细胞周期调节及应对逆境胁迫的过程中发挥重要的作用。本研究利用本实验室构建的‘云烟87’转录组数据库,从‘云烟87’烟草中克隆到一个NtPP2C37-like基因,该基因开放阅读框为1 275 bp,编码425个氨基酸残基。通过对NtPP2C37-like蛋白质进行相关分析,该蛋白不存在信号肽,可能属于非分泌蛋白;不具有跨膜结构,不属...
作者:袁为锋; 张帆帆; 李龙显; 李昊; 张付华; 刘小萍; 叶昱; 李凯; 黄冬艳; 丁珍; 吴琼; 宋德平; 唐玉新 期刊:《中国畜牧兽医》 2018年第10期
为了解近年来江西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)分子流行病学和其遗传变异情况,本次调查于2016-2017年从江西省各地区规模化猪场采集453份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病料,采用RT-PCR方法对所有病料进行检测。结果发现,其中321份病料为PRRSV阳性,阳性率为70.86%,各地区的阳性率在19.15%~84.85%之间。挑选14份阳性样品测序后,经ORF 5基因序列分析,江西地区各PRRSV毒...
作者:于永忠; 段旭阳; 刘圆圆; 赵蕊; 李岩; 马金柱; 宋佰芬; 连正兴; 崔玉东 期刊:《病毒学报》 2019年第04期
羊口疮在我国呈区域流行态势,各地分离株基因型混杂不清,严重制约该病的区域性防控。本研究针对黑龙江大庆地区某小型私营羊场出现的疑似羊口疮病例,采集发病的波尔山羊痂皮病料,通过病毒的分离、电镜形态学观察、本体动物回归试验、血清学检测和分子生物学鉴定,获得一株羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为OVHLJ05株。进而,病毒分子遗传学研究发现,OV-HLJ05在其主要的囊膜蛋白编码基因F1L上,与近年来国内众多分离株相差不大;同源性...
作者:赵梅; 赵芳; 彭丽云; 潘君飞; 张梓浩; 赖钟雄; 刘生财 期刊:《分子植物育种》 2018年第12期
以苋菜试管苗为材料,利用实验室构建的苋菜转录组数据库,筛选出WRKY13基因cDNA序列,对其开放阅读框(ORF)进行克隆验证和生物信息学分析。结果表明,WRKY13基因ORF长度为675 bp,编码224个氨基酸。通过生物信息学预测,该蛋白属于疏水性蛋白,有44个氨基酸位点存在磷酸化修饰;是WRKY蛋白超级家族(WRKY superfamily)的一个成员,存在1个WRKY结合位点;其二级结构由无规则卷曲结构、β折叠组成和α螺旋;蛋白系统进化树分析表明苋菜WRKY13...
1新城疫病毒的变异 选择与免疫原性密切相关的新城疫病毒(NDV)HN基因,对不同基因型(F基因型为Ⅰ~Ⅶ)的NDV参考株在HN基因ORF编码区内,进行了同义替代(Ks)和非同义替代(Ka)的比较,
作者:冯玲霞; 张述斌; 蒙琦; 张海明 期刊:《中国畜牧兽医文摘》 2017年第06期
为了确保疫苗的质量、安全性和有效性,以最大效率地提高接种后的效应作用,降低免疫接种后的不良反应。将生产的3批羊传染性脓疱皮炎(Orf)耐热性活疫苗冻干后,观察了其物理性状,并对疫苗进行了无菌检验、支原体检验、真空度检验、安全性检验、效力检验,以及剩余水分含量的测定。结果表明,生产的3批羊Orf耐热性活疫苗,对羊安全有效,其各项指标均符合标准,为合格疫苗,可放心使用。
作者:周勇; 范玉顶; 徐进; 马杰; 江南; 刘文枝; 曾令兵 期刊:《淡水渔业》 2017年第01期
根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。将p ET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本...
作者:曾瑞霞; 苏玉虹; 巴彩凤; 朱宝芹; 宋慧娟; 刘东鑫 期刊:《中国农学通报》 2006年第09期
目的克隆新的猪MAPK12基因全长ORF,分析其生物特性,为进一步研究该酶的功能提供信息资料.方法:以已报道的人及小鼠MAPK12基因cDNA序列为依据,利用电脑克隆策略获得的ESTs设计引物,RT-PCR技术扩增新的猪MAPK12基因ORF序列,将PCR产物直接进行序列测定.分析此蛋白的特性并预测其结构.结果分离的ORF全长1101bp,编码367个氨基酸,与人鼠氨基酸序列92%同源;利用生物信息学软件分析出此蛋白的理化特性并预测了其一级、二级和高级结构.结论...
作者:李志勇; 易咏竹; 殷相平; 张志芳; 柳纪省 期刊:《科学通报》 2007年第16期
将亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)全长约为6.9kb的可读框(ORF)克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-ORF.pVL-ORF与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得携带有FMDV全长ORF的重组病毒Bm-ORF.免疫荧光技术证明,重组病毒能够正确表达插入的外源基因.将获得的重组病毒Bm-ORF感染家蚕5龄起幼虫,双抗体夹心ELISA法和电子显微镜观察证...
作者:党占国; 李志勇; 陈溥言; 崔保安; 夏平安 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2008年第07期
根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ATCC VR-2332株的ORF2~6基因的核苷酸序列,设计合成4对特异性引物,用RT—PCR方法扩增出PRRSV河南地方株(命名为HN-2株)的ORF 2~6片段,克隆到pUC-57T载体并进行测序。应用DNAStar序列分析软件对分离株的ORF 2~6基因和其推导的氨基酸序列与不同来源的9个PRRSV毒株进行了同源性比较,结果表明:该分离株的ORF 2~6基因与不同来源美洲型毒株之间的同源性分别为89.1%~98.1...
作者:高旭东; 胡明明; 朱运峰 期刊:《中国生物工程》 2010年第06期
目的:探索逆转座子LINE-1编码的ORF-1p在肺癌发病过程中的分子机制。方法:利用RNAi技术,在肺癌细胞A549中下调LINE-1编码蛋白ORF-1p,随后对下调后的A549细胞的生物学特征进行细胞增殖(MTT方法)、细胞周期(流式细胞技术)以及集落形成(软琼脂克隆形成试验)等分析,观察细胞生物学特征的改变。并利用报告基因,进一步对细胞周期相关蛋白进行分析。结果:在A549细胞中,下调ORF-1p后细胞的增殖能力明显下降(P〈0.05),细胞周期出...
作者:刘锦宙; 杨燕; 谢而付 期刊:《中国生化药物》 2014年第08期
目的本文旨在构建STAT6-ORF表达载体,包装成慢病毒颗粒。方法应用嵌套PCR法从生长状态良好的293FT细胞的c DNA中扩增STAT6的完整读码框片段(2544 bp),根据需要在引物的5’端分别引入Cla I和Mlu I酶切位点,将PCR产物克隆到p MD20T载体上,得到p MD20T-STAT6-ORF克隆;测序验证后,用Cla I和Mlu I双酶切p MD20T-STAT6克隆,回收酶切产物得到的STAT6-ORF片段,通过T4 DNA连接酶连接到p LVTHm表达载体上,经双酶切和测序验证正确,获得p LVTHm...
作者:张帆; 冯帆; 杨俊兰 期刊:《解放军医学院学报》 2013年第07期
LINE-1基因是人类基因组的重要结构和功能组成部分,在肿瘤细胞的增殖和进展过程中发挥重要作用。LINE-1基因编码两个蛋白质:LINE-1 ORF-1p和ORF-2p,目前对于ORF-2p的研究较多,而LINE-1 ORF-1p具有其自身独特的功能。本文结合我们的工作对LINE-1 ORF-1p的功能和研究进展进行综述。
作者:孙新颖 万晓媛 刘庆慧 黄倢 期刊:《中国水产科学》 2016年第03期
为了解中国不同地区白斑综合征病毒的流行变异情况,本研究取用2013年3—12月从7个省市发病地区采集到的64份WSSV阳性样本,以特异的引物扩增目的片段,通过测序分析不同样本的缺失及变异差异。结果显示,在开放阅读框ORF14/15的扩增中,分别有6530 bp、6533 bp和5138 bp的片段缺失,而在ORF23/24扩增中有12070bp大片段的缺失,不同地区样本中未能成功扩增ORF75,而ORF94的重复单元数目分别为0、3、4、12不等,ORF125的重复单元数目为0、7。...
作者:张相萍 林瑛 屈艾 孟清 期刊:《生命科学》 2009年第04期
自我剪接内含子是指具有催化活性的RNA分子,可介导自身的剪切和两侧外显子的连接。自我剪接内含子包括Ⅰ型内含子和Ⅱ型内含子两类,主要存在于原生生物、真菌、藻类、植物细胞器以及细菌和古细菌(Ⅱ型内含子)基因组中。尽管核苷酸序列保守性很低,但两类自我剪接内含子均能分别形成不同的保守二级结构,且它们都可通过两步连续的转酯反应完成剪接。但由于其结构存在较大差异,导致其剪接机制也各不相同。对其结构与剪接关系的深入研...
作者:贾琳 倪方锐 李瑞 蒋磊 丁菲 江彤 期刊:《吉林农业大学学报》 2012年第01期
用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增含有SVBVORFⅠ的片段,克隆并测序。序列分析表明,该片段全长1 033个核苷酸,其中包含的ORFⅠ全长987个核苷酸,编码328个氨基酸。结果表明:将其与花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅠ序列相比较,中国SVBVORFⅠ与美国SVBV ORFⅠ序列相似性最高,达88.3%。进一步构建SVBV及其同属其他成员ORFⅠ的系统关系树,结果显示:中国SVBV ORFⅠ与美国SVBV ORFⅠ单独形成...