作者:李聪; 杨莹莹; 王美军; 陈己任 期刊:《分子植物育种》 2019年第24期
CRISPR/Cas9基因编辑系统是植物基因功能研究的重要工具,月季TCP9基因可以调控花器官的发育,应用CRISPR/Cas9技术构建敲除月季TCP9基因的表达载体,可以为月季TCP9基因的调控机制提供更多信息。根据TCP9基因的保守序列,设计了一对互补引物,用T4连接酶连接到质粒载体pKSE402 (该载体含有eGFP)中;通过测序确定所构建载体的正确性,通过冻融法将含有TCP9基因的重组质粒转入农杆菌(EHA105)中。以农杆菌为模板PCR扩增以及eGFP瞬时表达证明...
作者:王翠艳; 丁东风; 于小菊; 韦珊; 魏爱民; 杜胜利; 李明刚 期刊:《生物学通报》 2008年第02期
用floral dip方法进行遗传转化已经在模式植物拟南芥、部分十字花科及豆科植物苜蓿中取得成功,但在黄瓜转化中未见报道。本研究首次采用floral dip法转化黄瓜,结果表明,采用0.05%silwet-77和含质粒px6-GAD-GLP-1的工程农杆菌EHA105转化黄瓜自交系P2及2M1,分别收获种子544和1022粒;将收获种子经60mg/L的卡那霉素筛选,其抗性植株移栽成活后分别进行PCR及斑点杂交检测,在2个自交系中均获得了阳性转化植株,转化率分别为0.5...
作者:王友如; 胡莎; 崔永涛 期刊:《湖北师范大学学报·哲学社会科学版》 2005年第02期
常规的农杆菌质粒DNA提取常采用碱裂解和酚、氯仿提纯方法,得率较低,一般在50ng/uL以下.就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚、氯仿提取过程,减少了提取过程中对人的伤害,且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较,实验结果表明:改进的方法二更适宜于做PCR检测,而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切、PCR鉴定等.
作者:王宁宁; 王伟杰; 王玉康; 曹维; 李明; Sundus; Zafar; 胡茂龙; 浦惠明; 谭小力 期刊:《江苏农业科学》 2019年第18期
农杆菌介导的浸花法(floral-dip)是一种简便、快速、高效、重复性好、稳定性高的非组织培养的遗传转化法,在拟南芥中已得到了广泛的应用,但由于诸多因素的影响,其在油菜中的转化效率受到了很大的制约。以甘蓝型油菜为研究对象,通过对雌蕊柱头开裂时间的研究,发现即将开放的10~15个花苞的柱头是裂开的,此时最有利于农杆菌进入子房室完成转化。对这部分花蕾进行浸花法转化,得到的T1代种子发芽后通过除草剂筛选获得抗性转基因植株,进...
作者:吕孟雨; 董福双; 柴建芳; 周硕; 张俊敏; 王海波 期刊:《湖北农业科学》 2019年第20期
以郑58玉米自交系的种子作为试验材料,将玉米种子消毒,发芽后按长度分别将大、小2种玉米芽的生长点进行农杆菌转化,经过共培养后,通过对转化后的再发芽情况和转化芽的绿色荧光蛋白检测,分析玉米芽的大小对转化的影响。结果表明,玉米种子芽长度在0.3~0.5 cm时用于农杆菌转化,有利于农杆菌对玉米芽生长点的侵染转化和转化后芽的再生。
作者:吴雪莉; 刘金星; Klaus; K; Nielsen; 杨志民; 高彩霞 期刊:《草业学报》 2010年第05期
以二穗短柄草3个品系BDR018,BD21,BD21-3的幼胚为外植体,研究了幼胚大小对胚性愈伤组织诱导和再生的影响。采用携带gus和bar基因双元表达载体(pDM805)的根癌农杆菌菌株AGL1对BDR018品系的幼胚愈伤组织进行了遗传转化。本实验探讨了影响幼胚愈伤组织诱导再生及遗传转化的几个因素。结果发现,幼胚大小介于0.5~1.0mm之间的愈伤组织诱导率最高。随愈伤组织年龄的增加,BDR018,BD21,BD21-3愈伤组织的再生率下降,白化率上升。愈伤组织...
作者:刘晓静; 郝凤; 张德罡; 毛娟; 于铁峰 期刊:《草业学报》 2011年第02期
本研究以拟南芥基因组DNA为模板,用PCR方法扩增目的基因,连接到PGEM-T Easy Vector载体上构建成克隆载体T-CBF2。用BamHⅠ和SacⅠ分别对克隆载体T-CBF2和植物表达载体PBI121进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体P-T-CBF2。采用直接转化法将重组子导入根癌农杆菌EHA105。经PCR鉴定,重组质粒已成功导入根癌农杆菌中。通过农杆菌介导法转化和田苜蓿,现在已经得到转基因的苜蓿愈...
作者:徐开杰; 燕明献; 柴乖强; 孙风丽; 刘曙东; 奚亚军 期刊:《草业学报》 2012年第01期
以柳枝稷品系‘西稷1号’、‘西稷2号’和‘西稷3号’为主区,以农杆菌菌液浓度为副区,对农杆菌浸种处理后柳枝稷种子萌发及幼苗生长发育相关性状进行了研究。结果表明,品系与农杆菌菌液浓度的互作效应不显著;不同基因型品系对农杆菌的敏感程度不同,其中西稷3号最不敏感;随着农杆菌菌液浓度的升高,柳枝稷种子发芽率、幼苗成苗率及叶绿素含量呈下降趋势,幼苗POD活性、CAT活性、MDA含量呈上升趋势,SOD活性呈先升后降的趋势。综合农杆...
作者:苗青; 李正国; 杨迎伍 期刊:《热带亚热带植物学报》 2011年第06期
番茄(Lycopersiconesculentum)遗传转化体系对其功能基因的研究和基因工程育种有重要影响,对农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导的番茄遗传转化的研究进展进行了综述,主要包括影响番茄遗传转化效率的几个因素,如番茄的基因型、外植体状态、预培养和侵染过程、分化培养基中的激素和抗生素配比以及不同的外源基因等问题。并对今后的番茄遗传转化研究进行了展望。
作者:刘海燕; 冯冬茹; 刘兵; 何炎明; 王宏斌; 王金发 期刊:《热带亚热带植物学报》 2009年第03期
通过比较不同侵染液浓度、侵染时间、取材部位、预处理等条件下的转化效果,优化了农杆菌介导的洋葱鳞茎内表皮细胞转化系统,并且成功检测到大蕉ASR蛋白(MpASR)与GFP的融合蛋白在洋葱表皮细胞中的分布。
作者:邱实; 张文举; 许馥慧; 邓志瑞 期刊:《上海大学学报·自然科学版》 2018年第02期
转基因植株的再生频率较低一直是植物基因工程研究的瓶颈之一.以番茄的MicroTom突变体为材料,探索了外植体植物激素配比、预培养时间、共培养时间、筛选剂对愈伤组织发生和不定芽生长的影响.结果表明:子叶比下胚轴更适合作为愈伤组织和不定芽诱导的外植体;当玉米素(zeatin,ZT)质量浓度为0.5 mg/L,吲哚乙酸(indole acetic acid,IAA)质量浓度为1.0 mg/L时最有利于不定芽诱导;外植体预培养的适宜时间为3 d,农杆菌和外植体共培养...
作者:郑进; 康薇; 洪华珠 期刊:《林业工程学报》 2006年第03期
农杆菌介导植物转基因中常用抗生素包括抑茵剂和选择剂两大类。两类抗生素的作用机理不同。抗生素通常抑制植株的再生,也有较多的研究结果证明抗生素促进外植体的生长与分化。除用于筛选转化体或筛选转基因成株外,选择剂还用于鉴定转基因植物种子纯度、对转基因植物后代进行遗传分析。重点综述了农杆菌介导植物转基因中常用抗生素的作用机理及选择剂应用范围与方法的新进展,并讨论了抗生素在植物转基因中的安全性问题及应用前景...
作者:丰明; 陈庆富; 葛维德; 薛仁风 期刊:《东北农业科学》 2019年第04期
通过农杆菌介导,将来源于干旱诱导下拟南芥的干旱调控基因DREB2A导入辽宁甜荞品种辽荞5号中,以提高其耐旱性。通过正交试验分析影响农杆菌转化的相关因素,建立并优化了转化体系。结果表明:(1)愈伤组织诱导过程中,选择子叶作为愈伤组织诱导受体,诱导愈伤培养基激素的配比为:2,4-D浓度为2 mg/L;6-BA浓度为1 mg/L;(2)农杆菌转化过程中,最适农杆菌OD600为0.5、侵染时间3 min、共培养3 d,乙酰丁香酮浓度100 mg/L、筛选培养羧苄霉素浓度5...
作者:董燕; 刁玲武; 周联; 易浪; 朱丹丹 期刊:《时珍国医国药》 2012年第04期
目的确定遗传转化条件,将抗菌肽CN基因转入阳春砂愈伤组织。方法以阳春砂愈伤组织为受体材料,以农杆菌EHA105/pCAMBIA1305.2-CN工程细胞介导抗菌肽CN基因转化阳春砂,设计正交实验,通过分析gus报告基因的瞬时表达比较转化影响因素,并对目的基因CN进行PCR检测。结果农杆菌浓度、侵染时间、共培养温度、共培养时间及乙酰丁香酮浓度对转化率的影响有显著差异性。阳春砂愈伤组织遗传转化的最佳条件组合是:农杆菌浓度为OD600=0.5,侵染时...
作者:张宝琼; 范眸天; 屈云慧; 于丽霞; 李涵 期刊:《安徽农学通报》 2009年第03期
为了能够更高效地得到非洲菊转基因植株,将非洲菊的植株接种于含有不同浓度卡那霉素的分化培养基中,当卡那霉素浓度达到25 mg/L时,外植体的生长分化完全受抑制,苗白化。将非洲菊通过愈伤组织诱导,农杆菌介导得到转基因植株,把共培养3 d的外植体进行3种不同处理。结果表明,处理3较好,即先在培养基中直接加羧苄霉素不加卡那霉素,待苗长势较佳时,再用卡那霉素筛选,PCR检测,得到7棵阳性植株,再生率为43.75%。既保证了芽诱导苗的成活率,...
作者:雷霄飞; 杨学领 期刊:《安徽农学通报》 2015年第08期
用PCR方法扩增黄瓜花叶病毒部分复制酶基因(CMV△Rep),连接到PUCm-T载体上构建成克隆载体PUCm-T-CMV△Rep。用BamHⅠ和SalⅠ分别对克隆载体PUCm-T-CMV△Rep和植物表达载体pBIN438进行双酶切,获得目的片段和线性质粒。在T4 DNA连接酶的作用下进行定向连接,构建成植物表达载体pBIN438-CMV△Rep。采用CaCl2冻融法将重组子导入根癌农杆菌LBA4404。经PCR和双酶切鉴定,表明重组质粒pBIN438-CMV△Rep已成功导入根癌农杆菌中。
作者:王为民; 赵倩; 于静娟; 朱登云; 敖光明 期刊:《作物学报》 2005年第05期
用来源于马铃薯花粉的高赖氨酸蛋白质基因和玉米醇溶蛋白基因启动子构建了一个植物表达载体。采用农杆菌介导法导入籼稻品种龙特甫B,PCR和Southem blot结果表明外源基因已整合到水稻基因组中,Western blot分析表明高赖氨酸蛋白质基因已在转基因水稻种子中表达。对7株转基因水稻种子的分析表明,蛋白质的含量(10.87%~13.16%)平均提高了18.7%,赖氨酸的含量(0.47%~0.60%)平均提高了10%,苏氨酸的含量(0.42%~0.53...
作者:朱娉慧; 陈冉冉; 于洋; 宋雪薇; 李慧卿; 杜建英; 李强; 丁晓东; 朱延明 期刊:《作物学报》 2017年第09期
WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子,能够参与植物多种逆境响应。本研究利用前期野生大豆盐碱胁迫RNA-seq测序数据,从构建的碱胁迫基因调控网络中筛选并克隆到GsWRKY15基因。分析GsWRKY15在碱胁迫下野生大豆根中的表达模式,发现该基因受碱胁迫诱导显著上调表达,且在胁迫后1h表达量最高。分析GsWRKY15基因在野生大豆各组织中的表达特异性,发现该基因在各组织中均有表达,花中表达量最高。采用根癌农杆菌侵染苜蓿子叶节方法,将GsWRKY15转...
作者:刘丽霞; 李德全 期刊:《生物技术通报》 2005年第06期
玉米(Zea mays L)是世界上三大主要粮食作物之一,至今其遗传转化仍比较困难,目前报道有多种成功的方法,其中农杆菌(Agrobactierium tume faciens)介导法是当前玉米遗传转化的主要方法.本文综述了农杆菌介导的玉米遗传转化研究的发展历史、存在问题和影响因素等,并对未来发展趋势进行展望.
作者:詹亚光; 曾凡锁; 李彩华 期刊:《中国生物工程》 2005年第01期
应用细胞学方法分析了由农杆菌介导法获得的转基因白桦的细胞学变异情况,结果表明转基因白桦的染色体变异频率为78.5%,远远高于非转基因白桦的变异频率(15.3%),且变异以非整倍体占多数.同时用RAPD标记方法研究了转基因白桦在DNA水平的变异情况,结果显示DNA多态性指数为31.67,并与其它转基因植物的变异情况作了比较研究.最后分析、讨论了产生变异的原因:(1)组织培养过程中产生突变;(2)外源基因的整合及重排对宿主基因组的插入位点及...