作者:苑馨瑶; 田康明; 金鹏; 程磊; 王正祥 期刊:《食品与发酵工业》 2020年第01期
低聚葡萄糖氧化酶能够氧化低聚葡萄糖末端残基生成相应的低聚糖酸,在低聚糖酸的制备、食品、化工等方面具有潜在的应用价值。从黑曲霉基因组中发现1个疑似编码低聚葡萄糖氧化酶开放读框,共编码473个氨基酸序列,包含2个保守结构域(FAD结合域和黄素结构域)和4个活性位点(His80、Cys141、Asp377和Try428);在毕赤酵母中表达的重组酶蛋白大小为61 kDa,比酶活0.33 U/mg。重组酶的最适作用温度和pH值分别为75℃和9.0;在55~85℃和pH 5.0~9....
作者:李钰娜; 宋英达; 任晨霞 期刊:《食品工业科技》 2020年第05期
目的:对菌株Bacillus sp. L1分泌的胞外蛋白酶EL1进行分离纯化、基因克隆及酶学性质研究。方法:利用硫酸铵沉淀、阴离子交换层析从菌株Bacillus sp. L1的发酵液中分离纯化出胞外酶EL1,对其进行了质谱分析、基因克隆及酶学性质研究。结果:质谱结果提示EL1属于丝氨酸蛋白酶,该酶基因开放阅读框为1326 bp,蛋白序列共441个氨基酸,氨基酸序列与菌株Bacillus stratosphericus分泌的丝氨酸蛋白酶(WP007499449)同源性最高(98%)。该酶最适温...
作者:曾静; 郭建军; 袁林 期刊:《食品工业科技》 2020年第03期
本文探索了嗜热酸性普鲁兰水解酶ⅢTk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中的高效分泌表达条件,并对重组Tk-PUL的酶学性质进行了初步研究。通过构建Tk-PUL分泌表达信号肽筛选库,并结合高通量筛选方法,确定引导Tk-PUL在枯草芽孢杆菌中高效分泌表达的信号肽。结果表明,在信号肽AmyE的引导下,重组Tk-PUL在枯草芽孢杆菌表达系统中高效分泌表达。Tk-PUL属于单结构域双功能酶,同时具有α-淀粉酶活性和普鲁兰酶活性。重组Tk-PUL的α-淀粉酶活性的最...
作者:陈立功; 张庆芳; 迟乃玉; 王晓辉 期刊:《微生物学报》 2020年第01期
【目的】通过构建假交替单胞菌(Pseudoalteromonassp.DL-6)低温几丁质酶(chitinaseA,chi A;chitinase C,chi C)的重组乳酸克鲁维酵母菌株、纯化重组蛋白并对其进行酶学性质表征,为低温几丁质酶潜在工业化生产几丁寡糖奠定理论基础。【方法】人工合成密码子优化的几丁质酶基因,构建重组乳酸克鲁维酵母表达质粒(p KLAC1-chi A、p KLAC1-chi C)并用电脉冲法转化到乳酸克鲁维酵母中,实现低温几丁质酶的可溶表达。利用镍柱亲和层析纯化...
作者:尹雅洁; 谭光迅; 胡远亮 期刊:《湖北师范大学学报·哲学社会科学版》 2019年第01期
以实验室选育的Mitsuariasp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60%~90%效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍。然后依次采用离心超滤、离子交换层析和SephadexG-200凝胶柱层析进行纯化。SDS-PAGE凝胶电泳检测表明,产物仅有一条清晰的条带,显示该壳聚糖酶的分子量为33.6kD.酶学性质结果表明,该酶的最适反应pH和温度分别为5.5、50℃,并且该酶在pH5.0~8.0和35~45℃范围内,稳定性良好。酶最大反应速度Vmax为2....
作者:周娜磊; 李玥; 高媛; 陈永春; 姚敏 期刊:《生物资源》 2009年第02期
根据过氧化氢酶的催化特性,采用盐析,透析,离心等技术,从大鼠肝脏中分离纯化过氧化氢酶,提纯倍数达到26倍,酶活性回收率为57%。为一般实验室分离纯化大鼠过氧化氢酶提供了一种有效的方法。酶学性质研究表明,该酶最适温度为37℃,最适pH值为7.5,在此条件下,以过氧化氢为底物的Km值为56mmol·L^-1。
作者:李环; 李睿; 陈国广; 韦萍 期刊:《生物资源》 2004年第01期
研究了基因工程菌1016所产的氨基酰化酶的酶学特性。该酶的拆分速率符合米氏方程,且在0.5mol/L的高底物浓度下,无底物抑制现象。37℃时的米氏常数和最大反应速率分别为0.048mmol/L和2.178mmol/L·h。最适反应温度为55℃。55℃时,Km为0.037mmol/L,Vmax为2.558mmol/L·h。最适底物为乙酰蛋氨酸;热稳定性好。
作者:张朝宾; 李娇; 王兴红 期刊:《生物资源》 2013年第04期
酶法转化7-木糖紫杉烷(7-XDT)为10-脱乙酰基紫杉醇(10-DAT)是目前合成紫杉醇的最主要途径。本研究分离到一株具有产生7-木糖紫杉烷(7-XDT)糖基水解酶能力的马特链霉菌(Streptomyces matensi YUCM 410051),通过酶的最适反应温度、硫酸铵分级沉淀、最适反应pH和酶的有机试剂耐受等研究,发现最适反应温度为25~30℃,硫酸铵分级沉淀酶活在20%~70%的盐浓度时活性最高;粗酶液最适反应pH在6.0~7.5,酶的甲醇耐受浓度和DMSO耐受浓度均为10%。...
作者:李环; 金晶; 陈悦; 韦萍 期刊:《生物资源》 2006年第04期
对基因工程菌1020培养基成分及培养条件进行了优化。结果表明,Mg^2+、Mn^2+、Zn^2+三种金属离子可促进发酵产木聚糖酶。180r·min^-1的摇床转速可满足70mL/500mL装液量的溶氧需求。最适培养温度为30℃,pH值为7.0。优化后的酶活为优化前的2.09倍。全细胞木聚糖酶的酶学性质表明该酶有两个最适pH值,分别为7.0与9.0。金属离子Ca^2+,Fe^2+,Fe^2+对酶活有促进作用。pH7.0时Km为36.7095mmol·L^-1,Vm为0.3829mmol·L^-1...
作者:何贺贺; 尹钰; 屈潇毅; 赵英丽; 林厚民; 韦宇拓; 黄日波; 杜丽琴 期刊:《微生物学通报》 2019年第10期
【背景】蔗糖富集土壤是蔗糖磷酸化酶的重要来源之一。此酶能以较廉价的蔗糖为底物进行转葡萄糖基反应,改善受体底物的理化性质,因而具有重要的应用价值。【目的】研究蔗糖富集土壤中蔗糖磷酸化酶的酶学性质和转糖苷活性,为其更优质的改造提供材料和理论基础。【方法】将宏基因组中获得的蔗糖磷酸化酶基因克隆到表达载体上构建重组大肠杆菌,诱导表达并进行镍亲和层析纯化蛋白。以蔗糖为底物测量重组酶的基本酶学性质,研究其对糖类...
作者:李阳; 赵丽婷; 顾正华; 李由然; 石贵阳; 丁重阳 期刊:《微生物学通报》 2019年第12期
【背景】灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP)是一种具有多种生物活性的大分子物质,已有研究者通过发酵调控优化或菌种改良使灵芝多糖产量得到一定的提高。但由于灵芝多糖糖供体合成途径并未完全明晰,其中关键酶特性解析也不完善,使得灵芝多糖产量的大幅度提高仍存在瓶颈。【目的】通过异源表达大量制备灵芝中含量较少的磷酸葡萄糖变位酶(Phosphoglucomutase,PGM)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucosepyrophosphorylase...
作者:冯从经; 伏媛媛; 季朝能; 顾少华; 符文俊; 谢毅; 毛裕民 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2004年第05期
通过分离纯化和酶学性质测定,确定耐热对硝基苯磷酸酶(p-nitmphenylphosphatase)是金属酶蛋白,活性部位含有镁离子;该酶是中度耐热蛋白质,金属离子有助于提高其热稳定性.该酶的Km为3.031mmol/L,Vmax为313.5μmol·min^-1·mg^-1;二级结构中大约有74.5%α螺旋,25.5%β转角.在pH7.0~12.0范围内相当稳定.该酶在SDS溶液中稳定性较差,在Triton X-100溶液中较为稳定,在Tween 20溶液中很稳定.
作者:张传丽; 孙会刚; 崔珏; 陈学红; 高兆建; 唐兆成; 李同祥 期刊:《食品科技》 2019年第11期
采用罗丹明B平板初筛和摇瓶发酵复筛法从含油脂丰富的土样中筛选出产脂肪酶活性较高的菌株,并对活性最高的菌株TZ-1进行16S rDNA鉴定和发酵产酶条件分析,发现TZ-1属约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii),最佳产酶条件为温度30℃、培养基初始p H值为8.0、发酵时间48h,此时酶活性可达22.7 U/mL;对TZ-1菌株所产脂肪酶进行酶催化特性分析发现,该脂肪酶属中温碱性脂肪酶,其最适作用温度为50℃,最适作用p H为8.0,60℃下半衰期为3 h,70...
作者:王田田; 马沁沁; 苗玉志; 周霞 期刊:《西南农业学报》 2019年第10期
【目的】开展具有优良酶学性质的酸性几丁质酶放线菌研究为几丁质原料的高效转化提供重要的微生物资源。【方法】以四川攀枝花地区偏酸性块菌菌根土壤为材料,采用稀释平板法分离筛选、16S rDNA基因鉴定产酸性几丁质酶放线菌,并分析高产菌株的酶学性质。【结果】从分离到的17株降解几丁质放线菌中筛选到8株产酸性几丁质酶菌株,经16S rDNA序列测序分析表明均为链霉菌属(Streptomyces)。对其中的高产菌株Streptomyces omiyaensis SCPW...
作者:常开霞; 孙军勇; 李晓敏; 吴殿辉; 伟; 陆健 期刊:《食品与生物技术学报》 2019年第07期
为获得人胃乙醇脱氢酶δδ-ADH,根据GeneBank中δδ-ADH的基因序列合成目的基因ADH7,构建重组表达载体pET-32a(+)-ADH7,并转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3)。获得的阳性转化子经异丙基硫化-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,目的蛋白质以包涵体的形式得到大量表达。用1 mol/L尿素溶解包涵体获得有活性的粗酶液,经HisTrapTM excel亲和层析柱纯化获得目的蛋白质,检测δδ-ADH酶活并对其基本酶学性质进行研究。结果显示,δδ-ADH...
作者:魏家强; 高志远; 陈颢 期刊:《海洋科学进展》 2019年第04期
以海洋交替单胞菌(Alteromonas sp. Y-389)的基因组为模板,设计普鲁兰酶基因的引物并进行PCR扩增。将目的基因连接到载体pET-28a(+)后进行测序并进行生物信息学分析。结果显示,基因的开放阅读框全长4 347 bp,编码1 449个氨基酸的普鲁兰酶,为Ⅰ型普鲁兰酶,有4个保守的结构域,属于糖苷水解酶家族13;将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),成功诱导出了可溶性的目标蛋白;随后对其酶学性质进行测定与分析,结果表明,该酶的比活力为54.53 U/...
作者:陈成; 宁喜斌 期刊:《食品与发酵工业》 2019年第24期
该文对上海临港地区分离的1株产β-内酰胺酶的菌株的酶学性质进行研究,并初步提高了酶液保存稳定性。通过结合抗生素平板法初筛和碘量法(定性)复筛,获得产β-内酰胺酶的菌株。通过形态学、生理生化试验和16S rRNA序列分析确定该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),命名为Bacillus cereus B03。酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0,该酶在4~20℃、pH 5.0~7.5内稳定性较好。Mg^2+、Fe^2+和Mn^2+对酶有不同...
作者:杨胜远; 林谦; 赖丽萍; 黄婷婷 期刊:《食品与发酵工业》 2019年第21期
为了开发可用于高效固定化的优质谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD,EC 4.1.1.15),以Enterococcus faecium GDMCC60203为gadB基因供体,对纤维素结合域(cellulose-binding domain,CBD)GAD融合酶(CBD-GAD)的构建及其酶学性质进行了探讨。结果显示:构建的含pRPOCB-EfagadB重组质粒的Escherichia coli GDMCC 60445可高效表达CBD-GAD,120 mL发酵液制备的纤维素固定化CBD-GAD的活力为(347.93±27.63)U/g;在无氨苄青霉素LB培养基中...
作者:王贺; 曹文红; 章超桦; 秦小明; 郑惠娜; 高加龙 期刊:《食品与发酵工业》 2019年第19期
以凡纳滨对虾虾头为研究对象,探究UV-C辐照对其主要内源酶的影响。用功率为30 W的UV-C紫外灯以20 cm高度、辐照20 min,处理虾头均浆液,检测内源酶酶活,分析比较辐照前后温度、pH对其内源酶酶活的影响规律。从虾头中检测出酸性及碱性蛋白酶、脂肪酶、几丁质酶和多酚氧化酶等酶活性;UV-C辐照前后,脂肪酶、几丁质酶的最适pH有所变化,脂肪酶最适pH由10变为6~10,几丁质酶最适pH由5变为6左右;各主要内源酶最适温度无明显变化;UV-C辐照后,...
作者:谢爱连; 林碧瑜; 牛丹丹; NOKUTHULA; Peace; Mchunu; 叶秀云 期刊:《食品工业科技》 2019年第20期
碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因aprE539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%~70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kD...