作者:张恒; 孙宇; 刘俊; 陈尚威; 周华富 期刊:《山东医药》 2020年第03期
作者:戴晓懿; 郑雅匀; 金东; 孙晖; 罗雪莲 期刊:《生物资源》 2016年第02期
淮阳山病毒(Huaiyangshan virus,HYSV)是一种能引起人类发热伴血小板减少综合征的新型布尼亚病毒。NSs是淮阳山病毒的毒力因子,可能在病毒的致病中起重要的作用。本研究从构建好的含HYSV NSs基因的重组质粒pBluntNSs中扩增出NSs基因,然后克隆到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen中构建重组质粒pHAGE-NSs;利用脂质体将pHAGE-NSs与包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,在荧光显微镜下可见大量绿色荧光,收上清,即慢病毒悬...
作者:崔理立; 蔡玉洁; 刘根; 程婉雯; 刘宇; 刘婷婷; 李友 期刊:《广东医科大学学报》 2014年第04期
目的通过构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,用以建立可以稳定过表达APP695蛋白的SH-SY5YAPP695细胞株。方法利用PCR方法扩增目的基因片段APP695,并构建pLVX-APP695-PGK-Puro慢病毒载体,鉴定后将构建好的载体与慢病毒包装系统共转染293T细胞,并以最适感染复数感染神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,筛选稳转SH-SY5Y-APP695细胞株并用PCR和Western blot鉴定稳转株细胞APP695表达。结果对pLVX-APP695-PGK-Puro载体进行酶切鉴定及DNA测序证明...
作者:边帅; 赵月; 李芳宇; 赵大庆; 王佳雯 期刊:《科学技术与工程》 2019年第33期
细胞自噬的机体重要的一种代谢过程,为了更好地研究不同条件下细胞自噬的水平,构建自噬检测质粒pLVX-mRFP-EGFP-LC3。使用Trizol法提取Hela细胞总RNA,PCR技术特异性扩增LC3基因,将目的片段插入pEGFP-N3载体中。再将mRFP片段插入到EGFP-LC3质粒中,利用PCR技术扩增带有不同酶切位点的mRFP-EGFP-LC3片段,插入到慢病毒载体pLVX-puro中。通过Fugene 6将质粒瞬时转染到293T细胞中,使用荧光显微镜检测荧光蛋白的表达,使用Western blotting...
作者:许扬梅; 龚福生; 刘沁颖; 刘施佳; 黄丽洁; 郑秋红 期刊:《福建医药》 2019年第06期
目的研究MicroRNA-194(miR-194)过表达和抑制表达对细胞株Hep-3b中侧群细胞增殖功能影响。方法构建miR-194过表达和抑制表达慢病毒并感染Hep-3b细胞。流式细胞仪鉴定各感染组SP侧群比例,QPCR检测各组细胞miR-194-5p表达,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果流式细胞仪鉴定发现miR-194过表达Hep-3b组SP细胞含量与miR-194抑制表达Hep-3b组差异具有统计学意义(LSD-t=3.550,P=0.012)。QPCR检测...
作者:曹玉梅; 孙四玉; 杨冬梅; 霍艳杰; 邱飞; 谢雪娇; 庹勤慧 期刊:《南方医科大学学报》 2019年第10期
作者:凌英会; 朱露; 吴昊; 陈青; 权青; 刘勇; 李文雍; 张运海 期刊:《畜牧兽医学报》 2019年第09期
作者:李佳; 高晓娟; 王亚奇; 刘帅; 岳保红 期刊:《中国实验血液学》 2019年第06期
作者:戴星; 杨康平; 尹战海; 马巍; 杨益民; 周晓玲; 姚璐 期刊:《山东医药》 2019年第33期
目的以人骨肉瘤细胞的肾上腺髓质素(ADM)为作用靶点,建立以慢病毒为载体的RNA干扰体系,以高效抑制ADM基因的表达。方法构建慢病毒载体,设计3条针对ADM基因序列的shRNA序列(shRNA-1、2、3),靶向ADM shRNA与慢病毒载体连接后,挑选LV-ADM-shRNA阳性克隆进行PCR鉴定并测序。经测序确认寡核苷酸插入部位正确后,提取目的质粒LV-ADM-shRNA 1、2、3,在293T细胞中包装携带目的质粒的慢病毒,然后采用多孔稀释法测定慢病毒滴度。结果构建3条靶...
作者:刘勋; 陈明; 杨志惠 期刊:《西南医科大学学报》 2016年第06期
目的:为了建立GTPBP4基因沉默的人结肠癌细胞株,研究GTPBP4基因对人结肠癌细胞株RKO细胞增殖和凋亡的影响,构建并鉴定GTPBP4基因RNA干扰慢病毒载体。方法:针对GTPBP4mRNA设计siRNA,构建pGCSIL-GFP—GTPBP4慢病毒载体,感染293T细胞,包装产生慢病毒,并进行滴度测定。将慢病毒转染人结肠癌细胞株RKO,通过Real-timePCR和WestemBlot分析GTPBP4基因敲减效率。结果:结果显示,插入DNA序列与目的基因序列一致,提示插入人GTPBP4...
作者:杨简; 江洪; 李万强; 陈思思; 陈静; 徐盛开; 王继春 期刊:《心肺血管病》 2010年第02期
目的:研究携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的慢病毒转染球囊损伤大鼠颈动脉的效率和可行性,为利用慢病毒载体介导的基因治疗预防血管再狭窄奠定基础。方法:将携带GFP的慢病毒载体(pGC-LV-GFP载体)和慢病毒包装质粒供转染293T细胞,完成慢病毒颗粒包装及滴度测定。包装产生的慢病毒Lenti-GFP转染至球囊损伤的大鼠颈动脉。术后28d,损伤及病毒转染血管段标本分别行荧光显微镜、光镜检查,评估慢病毒的转染效率及...
作者:黄萍; 宋艳华; 胡波; 魏后军; 范志宇; 仇汝龙; 陈萌萌; 薛家宾; 王芳; JUNG; Yong-Sam 期刊:《畜牧与兽医》 2018年第08期
为建立稳定表达层黏连蛋白受体(LamR)RK13细胞系(RK13-LamR),并研究LamR蛋白在兔出血症病毒(RHDV)与宿主细胞结合中的作用,将完整的LamR序列通过同源重组克隆入慢病毒表达载体pLVX-m Cherry,并将该重组质粒pLVX-m Cherry-LamR与慢病毒包装质粒pLP1、pLP2、pLP/VSVG共转染293T细胞,在293T细胞中包装成含目的基因的重组慢病毒。将收获的重组病毒感染RK13细胞,经过嘌呤霉素筛选和细胞有限稀释法,筛选出表达LamR蛋白的RK13细胞。...
作者:魏云艳; 赵莉娟; 孙蒙蒙; 王瑾; 于佳田; 王德广 期刊:《徐州医科大学学报》 2015年第11期
目的克隆大鼠生长抑素somatostatin(SST)基因和神经元突触素Synapsin(Synl)的启动子序列,构建神经元特异性表达SST基因的重组慢病毒载体。方法采用RT—PCR法和PCR法分别扩增SST基因和Synl的启动子序列,并将其克隆至重组慢病毒载体系统(Lenti—EGFP),构建出以Synl启动子序列为启动子、携带SST基因的表达质粒Lenti—pSyn—SST-2A—EGFP;再将该表达质粒与pMDL、pRey和pVSVG用磷酸钙共沉淀法共转染HEK293T细胞,获得重组的慢...
作者:王正; 董红燕; 张中明; 张昊; 袁延亮; 陈李李; 石合现 期刊:《徐州医科大学学报》 2011年第02期
目的 构建针对大鼠PEDF 基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定,探讨PEDF基因对缺血心肌血管新生的影响.方法 构建PEDF基因过表达质粒,测序鉴定.针对PEDF基因不同干扰靶点构建4种RNAi 病毒载体质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/shRNA,测序鉴定.过表达质粒和RNAi质粒共转染293T细胞后应用Western blot方法进行外源筛靶确定PEDF基因RNAi 有效靶序列.有效RNAi 病毒质粒和其他3种辅助包装原件载体质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细...
作者:李望; 孙晓青; 胡书群; 裴东生; 陈波 期刊:《徐州医科大学学报》 2006年第01期
目的 建立真核细胞表达的大鼠FasL基因重组慢病毒载体三质粒包装细胞系统,为进一步研究转FasL基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受、保护移植物的作用奠定基础。方法 制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(pL0134-FasL),包装质粒(ΔNRF)及包膜蛋白质粒(VsV-G)。脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,72h后收集病毒上清,Western-blot法检测293T细胞的FasL蛋白表达。结果 转染后的293T细胞表达FasL蛋白。结论 成...
作者:李望; 孙晓青; 张成静; 胡书群; 裴东生 期刊:《徐州医科大学学报》 2005年第06期
目的克隆大鼠FasL基因全长序列,构建其用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLO134-FasL,为进一步研究FasL蛋白生物学功能奠定基础.方法根据大鼠FasL cDNA序列设计合成上、下游引物,以大鼠脾细胞提取的总RNA为模板,行RT-PCR扩增.扩增片断经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,插入慢病毒载体pLO134中并转化感受态细胞JM101.扩增后酶切鉴定,对正确的阳性克隆行DNA全序列分析.结果 RT-PCR扩增获得870 bp DN段,DNA序列分析结果与发表于G...
作者:李振宇; 徐开林; 潘秀英; 鹿群先; 何徐彭; 孙海英; 主鸿鹄 期刊:《中华血液学》 2004年第09期
目前很多基因治疗实验中选择造血干细胞(HSC)等非分裂期细胞作为靶细胞.常用病毒性载体为逆转录病毒和腺病毒载体系统[1,2].逆转录病毒只能转导分裂期细胞,腺病毒载体在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反应.来源于人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒载体由于可以感染非分裂期细胞、容纳外源性目的基因片段大、免疫反应小等特点越来越受到人们的重视[3,4].我们成功构建了慢病毒载体的三质粒包装系统并重...
作者:白元松; 陈玉丙; 石张镇; 卢振霞 期刊:《中华血液学》 2008年第06期
目的研究慢病毒载体(1entivirus vector)基因转导技术对脐血CD34^+细胞基因表达的影响。方法将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的第三代自身失活(self-inactivating,SIN)慢病毒载体导入CD34^+细胞。提取被病毒感染细胞的总RNA,应用cDNA微阵列技术对慢病毒载体感染的脐血CD34’细胞及正常对照细胞进行差异基因表达谱分析。结果在23000个被检测基因中,与无基因导入的对照组细胞比较,基因导入细胞中表达的上调基因共2个,分别...
作者:刘颖; 杨晶; 李亚祯; 阎潇; 张强; 任大鹏; 杨芳; 袁晓; 郭庆圆 期刊:《口腔疾病防治》 2019年第05期
作者:张源; 王丽; 张慧; 马依彤; 杨毅宁; 马苗苗; 朱晓丽 期刊:《中国全科医学》 2016年第15期
目的:用两种不同的方法构建β3肾上腺素能受体(β3-AR)过表达的 SD 乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)模型,并对两种方法的效果进行比较,为今后在细胞水平观察β3-AR 对心功能,尤其是对慢性心力衰竭(CHF)的影响提供新的实验方法。方法2015年3—6月,选取出生1~3 d 的 SFP 级 SD 乳鼠8只。分离 SD 乳鼠CFBs 并体外培养,随机分为3个感染复数(MOI)组,分别为 MOI 50组、MOI 100组、MOI 200组,采用β3-AR 基因过表达的慢病毒载体感染...