作者:尤星力; 杨延丽; 苏志国; 张媛; 张松平 期刊:《过程工程学报》 2019年第06期
建立了离子交换层析介质一步纯化鸡白痢沙门氏菌兔抗血清获得多抗免疫球蛋白G (IgG)的方法,利用IgG与杂蛋白等电点的差异,指导阴阳离子交换层析介质筛选和操作条件优化;针对多抗IgG易失活的难题,采用差示扫描荧光法为纯化后的IgG筛选稳定剂。结果表明,通过毛细管等电聚焦测得兔抗血清多抗IgG的等电点为6.04~7.08,阳离子交换介质CM Sepharose FastFlow层析纯化的IgG最高电泳纯度为63.5%,高效液相尺寸排阻色谱测得IgG回收率为15.5%;...
作者:郝东; 史瑾; 王维; 邓晗; 王俊; 杨晓琳; 赵金礼 期刊:《生物化工》 2018年第01期
目的:以毕赤酵母表达的重组角质细胞生长因子-1(KGF-1)发酵液为原料,建立一种KGF-1纯化方法。方法:高速离心技术、膜过滤技术、超滤技术为主要的粗纯工艺,应用离子交换色谱的精细纯化工艺。结果:以该纯化工艺可生产获得单一组分的KGF-1,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳及反相高效液相色谱C8柱检测其纯度可达90%以上。结论:本工艺得到的KGF-1纯度大于90%、可用于进一步工业化研究。
作者:董青; 刘坚; 陈可夫 期刊:《中国医药导报》 2005年第17期
根据生物制药原理,用黄曲霉菌种通过微生物发酵作用大量产生黄曲霉,再度利用黄曲霉中的β-酪氨酸酶的作用把L-酪氨酸转化成L-多巴;利用生化工艺方法,通过系列的实验达到提纯目的药物.
作者:孙雷; 朱孝霖; 李环; 韦萍 期刊:《生物技术通报》 2005年第05期
木聚糖酶应用广泛,其分离纯化是进行酶学性质研究、分子研究的前提条件,是成功确定氨基酸序列和三维结构的基础.综述微生物木聚糖酶分离纯化的方法,分析了常用方法在其分离纯化中的优缺点;强调了特异性分离纯化技术是高效的分离纯化方法;并对其它方法进行了概括.
作者:王伟; 孟超; 朱平; 程克棣 期刊:《中国生物工程》 2005年第09期
为对重组蛋白的表达进行直观检测并简化蛋白纯化的步骤,构建了能在大肠杆菌中表达融合蛋白的通用表达载体pHis-EGFP.该载体含有源自表达载体pET-32a的T7启动子、终止子和源自质粒pUC18的ColE1复制子与绿色荧光蛋白报告基因.应用该载体成功地表达并纯化了酵母GGDP(geranylgeranyl diphosphate,GGDP)合酶融合蛋白,结果表明所构建的载体是一个实用的表达载体,并建立了离子交换层析和亲和层析两步纯化融合蛋白的方法.
作者:陈璟; 李彦英; 周育森; 李玉玲; 周长林; 方宏清; 陈惠鹏 期刊:《生物技术通讯》 2005年第03期
以大肠杆菌表达载体pET22b为载体,直接表达SARS病毒S蛋白425~569及894~1033等2片段.表达所获得的包涵体形式蛋白经尿素溶解后分别经过2次离子交换层析,获得初步纯化.在酸性和低尿素浓度环境中,2种S蛋白片段极易沉淀.Western印迹鉴定显示其与抗SARS病毒血清呈阳性反应.获得的纯化蛋白可用于检验受体结合能力等研究.
作者:王永权; 路秀玲; 苏志国 期刊:《生物工程学报》 2005年第03期
发展了一条从红细胞裂解液中同时制备超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶和血红蛋白的新工艺.采用0.75%的聚乙二醇600作为层析伴侣,使血红蛋白直接流过阴离子交换层析柱,同时吸附SOD和过氧化氢酶.经过梯度洗脱获得SOD和过氧化氢酶组分,再经过疏水性相互作用层析与凝胶过滤层析相串联,使SOD和过氧化氢酶得到纯化.纯化后的SOD和过氧化氢酶的比活力分别达到15932u/mg和65918u/mg,血红蛋白的纯度达到99.9%以上.总回收率为:SOD,47.4%;过氧...
作者:浦宇; 王芝祥 期刊:《生物工程学报》 2004年第06期
层析是蛋白质纯化的关键技术之一,作为层析技术的核心--层析介质一直以来是层析技术研究的一个热点.近年来,越来越多的新型层析介质被开发出来,如粒度均匀的交联多糖、人工合成的大孔聚合物、触角型吸附剂、软胶包裹在硬胶表面等介质.主要介绍应用较为广泛的IEC和HIC介质的组成、特性及其在蛋白质纯化中的应用,还研究了与HIC技术相关的两种新技术:亲硫层析和疏水电荷诱导层析(HCIC),重点介绍了HCIC的介质及其应用,同时也讨论了在蛋...
作者:薛晓畅; 李志兰; 张存; 王多宁; 王春娟; 党林涛; 王增禄 期刊:《分子影像学》 2019年第01期
目的建立从猪脾纯化Ro/SSA自身抗原系统中60KD组分的方法.方法从猪脾提取ENA(可提取核抗原),以硫酸铵沉淀结合离子交换层析分离ENA蛋白组分,并用对流免疫电泳检测60KD SSA抗原的活性,以得到纯化60KD SSA抗原的具体条件.结果 60KD SSA抗原在Tris-HCl缓冲液(pH8.3)中的硫酸铵沉淀范围是硫酸铵饱和度50%~60%.60KD SSA抗原在50mM Tris-HCl缓冲液(pH8.3)+NaCl中的DE52离子交换层析洗脱范围为电导值35~40ms/cm.结论结合硫酸铵沉淀和DE5...
作者:孙春来; 干信 期刊:《湖北工业大学学报》 2004年第02期
采用硫酸铵分级盐析,DEAE-SephadexA-50离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶过滤层析从粘质沙雷氏菌发酵上清液中分离纯化磷脂酶C,纯化倍数为59.28,收率为20.35%.
作者:刁海平; 侯翠英; 赵明日; 孙力 期刊:《烟台大学学报·哲学社会科学版》 2019年第03期
本研究以海生红藻多管藻(Polysiphoniaurceolata)为材料,用DEAESepharoseFastFlow离子交换层析和ButylSepharose4FastFlow疏水作用层析,从SephacryS-300(S-300)凝胶过滤所得R-藻红蛋白中分离纯化出在带电性和疏水性表现结构特性差异的2种R-藻红蛋白组分,R-PEI和R-PEII。这2种R-藻红蛋白在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和非变性等电聚焦(nativeisoelectricfocusing,Native-IEF)中均表现单一条带,等电点(pI)分别为R-PEI4.7,...
作者:郭承华; 韩宝芹; 刘万顺; 刘传琳; 董新伟; 郑舜泽 期刊:《高技术通讯》 2005年第10期
利用碱提法从黄海海燕中提取了多糖,粗品中糖和蛋白含量分别为28.6%和50.8%;Serag法脱蛋白后,糖含量57.1%,蛋白含量13.8%;二次酶解后,糖和蛋白含量分别为63.2%和7.0%;粗品除蛋白、脱色后,用25%、42%、66%、88%乙醇分级沉淀分别得到多糖Ⅰ、多糖Ⅱ、多糖Ⅲ和多糖Ⅳ,糖含量分别为20.6%、20.7%、29.2%、19.9%,蛋白含量分别为29.2%、27.8%、59.5%、65.7%;多糖Ⅰ依次用离子交换层析(DEAE-52)和葡聚糖凝胶(G-75)进行分离、纯化,结果表明...
作者:王席; 李国攀; 陈清清; 徐保娟; 荣俊 期刊:《中国畜牧兽医》 2019年第06期
为获得较高纯度的猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)并对其进行结构和功能研究,本试验以大肠杆菌表达系统表达了PCV2重组Cap(PCV2 rCap)蛋白,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300 HR凝胶过滤层析、Capto Q离子交换层析、CsCl密度梯度离心等方法对其进行了纯化。通过Western blotting对纯化所得蛋白进行免疫反应性鉴定,透射电镜(TEM)观察纯化蛋白的粒径及形态,高效液...
目的:建立亲和层析法纯化Ro/SSA自身抗原系统中 60 KD 组分的方法.方法:从猪脾提ENA(可提取核抗原),以硫酸铵沉淀、离子交换层析进行初步纯化.挑选单纯抗 60 KD SSA 抗体阳性的病人的血清,制备亲和层析柱.用ELISA法检测所制备的抗原.结果:60 KD SSA抗体阳性标准血清ELISA检测为阳性,Sm和RNP、Jo-1、Scl-70的标准抗血清为阴性.结论:该方法可获得高纯度的抗原,可用于ELISA检测等目的.
作者:邓晗; 史瑾; 郝东; 王维; 赵金礼 期刊:《中国生物制品学》 2019年第03期
目的建立重组人溶菌酶(human lysozyme,h LYZ)的分离纯化方法,并对纯化产物进行鉴定。方法采用固液分离、膜过滤、疏水层析及离子交换层析对hLYZ进行分离纯化;SDS-PAGE及HPLC法检测hLYZ纯度;按《中国药典》二部(2015版)蛋清溶菌酶效价检查法检测其效价;Western blot法检测其特异性;基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定其相对分子质量。结果该分离方法可获得单一组分的重组hLYZ;SDS-PAGE检测纯度达99%,HPLC分析纯度达98. 8...
作者:崔慧娥; 李昌模; 张燕; 潘涛; 王硕 期刊:《食品工业科技》 2009年第07期
燕窝经60℃水浴提取、醇析,得糖蛋白粗品,再经DEAE-SepharoseFastFlow离子交换层析、SephacrylS-200凝胶过滤层析分离纯化得到了成分均一的燕窝特征组分-燕窝糖蛋白,经SDS—PAGE凝胶电泳测定其分子量约为60kDa;通过p消去反应,表明燕窝糖蛋白中存在0型糖肽键。经一定程序免疫新西兰大白兔,获得了兔抗燕窝糖蛋白抗血清,采用ProteinA-Sepharose4B亲和层析纯化,获得抗燕窝糖蛋白抗体。本实验为进一步利用抗原抗体特异性识别的...
作者:许永平; 罗欣; 孙清亮; 胡鹏; 毛衍伟 期刊:《食品工业科技》 2007年第05期
实验通过DEAE离子交换层析对牛背长肌中钙激活酶(Calpains)的分离研究,比较了DEAE—Sepharose—FF和DEAE—Sephacel对钙激活酶(Calpains)的分离效果,确定了Calpains分离纯化的条件。Sephacel不耐压,分离时间长,因此选择Sepharose—FF分离纯化Calpains。
作者:王庆华; 钟细娥; 吕振岳 期刊:《食品工业科技》 2006年第12期
利用离子交换层析方法,从鸡蛋清分离纯化了转铁蛋白,并用SDS—PAGE方法测得其分子量为7.7kDa,光谱分析在465nm处有特征吸收峰。
项目编号:0536009 项目简介:项目在国内率先采用染料亲和层析与QAE离子交换层析两步法,以绝经期妇女尿为原料制备高纯度尿卵泡刺激素。产品质量达到英国药典98版要求,整个工艺先进、稳定、高效,达国内领先水平。尿卵泡刺激素可作为制备生殖药物的原料,用于试管婴儿的辅助药物及治疗不孕不育症等,市场需求量大,并可出口创汇。