作者:冯雳; 丁梅; 邢俊俏; 李丽丽; 蒋俊龙 期刊:《湖北师范大学学报·哲学社会科学版》 2019年第04期
IFT80蛋白是莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)纤毛内运输蛋白(intraflagellar transport,IFT)复合体中的一个重要组分,获得IFT80蛋白抗体为研究该蛋白作用机理提供有力的实验材料。通过构建大肠杆菌重组表达载体pGEX-4T-ift80,将重组表达载体转化到大肠杆菌E.coli Rosetta中,构建表达IFT80蛋白的重组菌株;在合适的时间点加入浓度适当的IPTG诱导重组菌株表达IFT80蛋白;将收集的蛋白上清液过柱纯化,再以纯化后的IFT80蛋白作为抗...
用PCR扩增出绿色荧光蛋白(GFP)基因,插入到pGEX-KG表达载体中,并将构建出的重组质粒命名为pKG-GFP. 将重组载体导入大肠杆菌DH10β中,经IPTG诱导产生GST-GFP融合蛋白,同时以可溶蛋白和包涵体两种形式存在.GST-GFP分子量大约为53kDa,与其理论值大小一致,用亲和层析以及凝血酶处理纯化GFP.纯化的产物经证实具有很好的均一性.以GFP免疫新西兰家兔,制备多克隆抗体,Western blotting测定抗血清效价.
作者:赵伟; 王欣生; 李晓荣; 程伟; 陈星; 王英典 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2005年第06期
植物光合作用产生的蔗糖是植物生长发育的主要碳源物质,还是诱导植物生长发育过程中诸多相关基因表达的特异信号分子[1].
作者:吴秀秀; 蒋顺; 于峰; 曹建中; 汪龙 期刊:《生命科学研究》 2019年第05期
类受体蛋白激酶参与调控植物的器官发育和抗逆性,是一种重要的蛋白激酶。通过对水稻中类受体蛋白激酶家族成员FERONIA-like receptor 1 (FLR1)进行蛋白质结构预测分析,发现FLR1蛋白具有跨膜结构,其N端在细胞膜外(FLR1-BW, 1~450 aa), C端在细胞膜内(FLR1-BN, 474~892 aa)。为了得到FLR1抗体用于其功能分析,将FLR1的N端和C端分别构建到原核表达载体pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b、pTriEx-4上,比较FLR1-BW和FLR1-BN在不同载体和不同条...
作者:王海; 何成彦; 令狐志宏; 宋丽娜 期刊:《中国实验诊断学》 2018年第09期
真核延伸因子2 (eEF2)是一种GTP依赖的转位酶,可介导核糖体的移位,因此与蛋白质的延伸和翻译密切相关[1]。eEF2主要受eEF2K (真核延伸因子2激酶)的调控,是蛋白质合成过程中的关键调控因子,在肿瘤的发生、发展中起到重要的作用[2-5]。本研究以纯化的eEF2融合蛋白为抗原免疫Bal b/c小鼠,制备eEF2单克隆抗体,探究大肠癌组织中eEF2的表达情况.
作者:范学政; 徐璐; 赵启祖; 宁宜宝; 邹兴启; 朱元源; 丁家波; 王琴 期刊:《中国兽药》 2015年第01期
为制备猪瘟特异性抗体,将猪瘟兔化弱毒E2基因序列修饰后克隆到pFastBac1质粒载体,经转座、转染后构建重组杆状病毒,并用纯化的重组猪瘟E2蛋白免疫大耳白兔制备特异性抗体。实验结果表明成功获得能分泌重组猪瘟E2蛋白的杆状病毒,使用纯化的重组猪瘟E2蛋白制备的猪瘟抗体具有良好的特异性和敏感性,为猪瘟病毒荧光抗体染色液的制备奠定了基础。
作者:喻华英; 高丰; 王景林 期刊:《中国兽医学报》 2005年第06期
根据GenBank中Ⅰ型痢疾志贺菌ShT-A基因的核苷酸序列,设计合成了2对引物,分别进行PCR扩增,将PCR产物分别与pGEM-T连接构建了克隆质粒pGEM-TA1和pGEM-TA 2.用BamH Ⅰ和Kpn Ⅰ以及BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切pGEM-TA1和pGEM-TA 2,均得到大小为895 bp的ShT-A基因片段,分别与pQE30和pET21a(+)原核重组表达载体连接,构建pQE30-A2和pET-21A1原核重组表达质粒.工程菌M1 5/pQE30-A2和BL-21/pET-21A1经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,均没有目的蛋白...
作者:丁敏; 王锋; 苏军; 陈志厚; 陈在杰; 孙明 期刊:《农业生物技术学报》 2004年第06期
用限制性内切酶酶切的方法把人工合成的GFM cry11B基因编码区克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,构建成重组表达质粒pGC。在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达了GST-GFMCry11B融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的21%,其表达产物主要以包涵体的形式存在。对包涵体蛋白进行可溶性处理,用Glutathione Sephrose 4B纯化出GST-Cryl1B融合蛋白。Thrombin酶切后得到Cry11B蛋白,将其作为抗原免疫家兔获得了滴度(ELISA)为1:8000的抗血清,并...
作者:王中亮; 胡悦; 郁建锋; 陈珏; 马丽晨; 陈迟迟; 姚文; 顾志良 期刊:《农业生物技术学报》 2019年第05期
肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α, HNF4α)是核受体超家族成员之一,广泛地调控葡萄糖、胆固醇及脂肪酸代谢途径中多种基因的表达。为了获得鸡(Gallus gallus) HNF4α特异性抗体,本研究首先根据大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好性,优化并合成鸡HNF4α基因,构建原核重组表达载体pET-30a(+)-HNF4α。其次,将该重组表达载体转化至E.coli BL21 (DE3)进行诱导表达,并对诱导温度和异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-...
作者:赵永娟; 王傲雪; 贾琪; 华子春 期刊:《植物生理学报》 2005年第02期
研究了SENU3蛋白表达载体的构建、大肠杆菌表达、纯化及其抗体的制备.
作者:李楚芳; 刘萱; 李平; 马清钧; 曹诚 期刊:《生物技术通讯》 2004年第05期
利用多聚酶联反应(PCR)扩增获得人hPLIC-2基因,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-2T上.转化大肠杆菌JM109,在27℃经IPTG诱导后,GST-hPLIC-2融合蛋白获得高效可溶性表达,并通过Glutathione Sephorase 4B获得纯化.使用结合有GST-hPLIC-2的Glutathione Sephorase 4B凝胶珠免疫大白兔制备了兔抗hPLIC~2多克隆抗体,抗体滴度大于1:16 000.该抗体制备为研究hPLIC-2的功能提供了有用的工具.
作者:何莉; 朱旭东; 毛志勇; 朱恒奇; 黄培堂 期刊:《生物技术通讯》 2004年第05期
用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增转录因子CTCF的cDNA序列,克隆至pGEM-T Easy载体上.将CTCF蛋白N段的编码序列亚克隆至pET22b(+)载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用镍柱进行亲和纯化.用纯化后的CTCF N段蛋白免疫家兔,获得CTCF的多克隆抗体,进而用于细胞内CTCF蛋白的免疫印迹检测.
作者:李军林; 韩骅; 兰莉; 杨曦; 李军锋; 王亚蓉; 祝仰庭 期刊:《医学争鸣》 2005年第08期
目的: 在大肠杆菌中融合表达编码小鼠nestin 肽链C段的cDNA序列,制备特异性多克隆抗体;方法: 采用RT-PCR的方法获得编码小鼠nestin 肽链C段的cDNA序列,将测序正确的片段克隆入pET-32 a,构建pET-32 a-nestin-C表达载体.在大肠杆菌BL-21中IPTG诱导下表达6×His-nestin-C融合蛋白,纯化后免疫新西兰兔,制备兔抗鼠nestin血清,以Western Blotting和免疫组化方法分析其特异性.结果: 6×His -nestin-C融合蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体...
作者:丛日旭; 刘先菊; 滕永康; 向志光; 佟巍; 张丽芳; 阮研硕; 刘云波 期刊:《中国比较医学》 2018年第06期
目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western...
作者:孙宁波; 隋正红; 包振民; 王春燕 期刊:《海洋科学集刊》 2009年第01期
<正>中国是全球受赤潮危害较重的国家之一(周名江等,2001),随着现代化工农业生产的迅猛发展,沿海地区人口的增多,大量工农业废水和生活污水排入海洋,导致近年来赤潮的频繁发生和规模的不断扩大,严重破坏了渔业资源和海产养殖业,并威胁着人类的生命安全。中国海岸线较长,引起赤潮爆发的藻种种类多样,赤潮异弯藻(Heterosigmaakashiwo)、共生甲藻(Symbiodinium sp.)、链状亚历山大藻(Alexandrium catenella)等藻种是常见的赤潮...
作者:喻华英; 王景林; 高丰; 康琳; 赵金红; 吴东林 期刊:《生命科学研究》 2004年第01期
用KpnⅠ、Hind Ⅲ酶切克隆载体pGEM-ShTB3,然后亚克隆入带有二氢叶酸还原酶(DHFR)的融合表达栽体pQE40,构建重组质粒pQE40-ShTB,转化到E。coli M15中,经IPTG诱导,实现了ShTB-DHFR融合蛋白的高表达,表达量约占菌体总蛋白的21.9%,为包涵体形式,在变性条件下,包涵体蛋白经螯合镍离子的次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和柱一步纯化,得到了纯度为90.5%的重组ShT-B.以纯化的shTB-DHFR融合蛋白免疫昆明鼠,并结合腹腔注射S180细胞,...
作者:王蕾; 霍景瑞; 张国安; 贾力; 田毅; 杨晓晖; 张晶晶; 刘颖; 吴楠; 刘英富 期刊:《天津医药》 2019年第08期
目的通过纳米抗体CDR3区展示β-HCGC端表位的方式,验证纳米抗体在抗原表位展示中的作用。方法采用基因合成的方法,将β-HCGC端表位(氨基序列151~165)插入到纳米抗体CDR3区,酶切、连接原核表达载体pET24a,IPTG诱导表达。将His标签填料纯化得到的高纯度目的蛋白免疫新西兰大耳白兔,经5次免疫后,间接ELISA检测效价,抗原偶联纯化介质进行免疫多抗纯化,Western blot进行多抗特异性检测。结果成功构建原核表达重组载体,并获得高表达菌株,IP...
作者:陈伟; 李玉娟; 洪敏晶; 林月霞; 施静雯; 罗利琼; 覃富健 期刊:《环境昆虫学报》 2019年第02期
HSPs(热休克蛋白)是机体在不利环境条件刺激下合成的一类蛋白质,在进化上高度保守,普遍存在于生物体,其中Hsp70是最为保守的成员。研究发现,昆虫滞育过程中普遍存在Hsp70表达上调的现象。然而,现有的研究均是在基因水平的检测结果。为了能从蛋白水平检测棉铃虫中Hsp70的表达,本研究制备了棉铃虫Hsp70的多克隆抗体。构建了hsp70的原核表达载体并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白经镍柱纯化后免疫兔子,制备了棉铃虫Hsp70的多...
作者:李金娜; 宋书婷; 陈宏伟; 刘涛; 赵爱云; 李有文 期刊:《中国畜牧兽医》 2017年第10期
为了研究羊痘病毒(capripox virus),制备其毒力因子KLP2的多克隆抗体,试验采用基因同源重组的方法分别构建了羊痘病毒两个结构域(KLP2-1和KLP2-2)的原核表达载体并进行测序鉴定。提取质粒后转化大肠杆菌BL21感受态细胞并用IPTG诱导表达,目的蛋白采用SDS-PAGE和Western blotting检测,并用KCl染色切胶纯化,纯化蛋白加弗氏佐剂免疫家兔,制备的抗体用Western blotting和ELISA检测评价。结果表明,试验成功构建了表达载体p ET42b-KLP...
作者:胡太蛟; 苏军; 胡昌泉; 陈在杰; 林天龙; 王锋 期刊:《福建农业学报》 2005年第02期
通过构建pcDNA3.1-CpTI真核表达载体,肌肉注射免疫Balb/c纯系小鼠,获得特异性的核酸免疫CpTI抗体,其效价达1:800,所获抗体可与纯化的CpTI蛋白发生特异性反应,检测OD405值和包被蛋白量相关系数为O.996 1;间接法测定转cpti基因水稻结果表明,核酸免疫制备的抗体能与转基因水稻CpTI蛋白产生特异性反应,可用于转基因水稻cpti基因表达的定性测定.