作者:王普; 岑沛霖; 陈希杨 期刊:《中国现代应用药学》 2005年第03期
目的 优化简单节杆菌17α-羟基-1β-甲基-孕甾-4,9(11)二烯-3,20-二酮(简称HMPDD)脱氢酶产酶条件.方法采用摇瓶培养方法,考察培养基组成及发酵条件对HMPDD转化率的影响。结果较佳产酶培养基为:葡萄糖0.4%、玉米浆1.2%、KH2PO4 0.2%、蛋白胨0.3%.较佳产酶条件为:培养基初始pH7.0;接种量20%;摇瓶装量100mL/250mL三角瓶;接种后4h内添加0.05g/L底物作为诱导物对产酶有利;添加10^-4mol/L Co^2+和Mg^2+,可使酶活分...
作者:张璟; 张玉富; 秦慧民; 毛淑红; 路福平 期刊:《中国生物工程》 2016年第11期
为实现胆固醇的高效生物氧化,利用基因工程手段将编码简单节杆菌胆固醇氧化酶的DN段克隆到质粒pTY2中,构建pTY2-5332插入表达载体。该载体以简单节杆菌基因组中的16S rDNA位点为整合点,提高了胆固醇氧化酶在基因组中的拷贝数,实现了简单节杆菌胆固醇氧化酶的过表达。重组菌的生长实验分析表明,插入到16S rDNA位点的胆固醇氧化酶没有影响简单节杆菌的生长。重组菌可在20h将2g/L的胆固醇完全转化为4-胆甾烯-3酮,比原始菌的转化时间缩...
作者:李玉; 王稳航; 路福平; 邹菁; 杜连祥 期刊:《工业微生物》 2007年第04期
简单节杆菌3-甾酮-1-脱氢酶(KSDH),是甾体母核降解的关键酶,属于黄素蛋白类,并且是一种膜蛋白.膜蛋白的高效表达一直是一个难题.本文尝试利用三种不同的大肠杆菌表达体系,pET-30a/BL21(DE3)、pET-40b(+)/BL21(DE3)和pTrc99A/JM109对C1,2位脱氢酶进行诱导表达,并对蛋白的表达量和酶活力进行比较分析,确定出最适的表达系统.
作者:谌蓉; 李光; 张娟; 刘芳; 彭智辉; 邓乐 期刊:《湖南师范大学自然科学学报》 2010年第02期
采用有机介质中微生物转化的方法,对甾体C1,2位的生物脱氢进行了研究.通过考察有机溶剂对甾体底物和产物的溶解度,微生物细胞在不同有机溶剂中的存活率以及有机溶剂的加入量,构建了较合适的二甲苯/发酵液两相体系,且二甲苯加入量占总体积的15%为宜.然后以雄甾-4-烯-6-亚甲基-3,17-二酮为底物,利用简单节杆菌(Arthrobacter simplex)完整细胞在两相体系中对甾体A环C1,2位进行生物脱氢,得到抗肿瘤药物依西美坦(雄甾-1,4-二烯-6-亚...
作者:杨玉芬; 王普; 何军邀; 谢松霖 期刊:《生物工程学报》 2009年第06期
为改善过程传质,提高甾类药物中间体11β-羟基甲羟孕酮C1,2生物脱氢转化率,采用简单节杆菌Arthrobacter simplex UR016菌株在Tween-80/乙醇/食油/水构成的微乳体系中进行生物脱氢,并考察了微乳体系组成、转化温度、投料浓度对脱氢反应的影响。结果表明:以菌体培养液作为水相,食油作为油相构建微乳体系,食油最适加量为10g/L,表面活性剂Tween-80加量为4g/L;底物经醇溶后水析投料,乙醇最适加量为发酵液体积的7%(V/V);最适转化温度为...
作者:王建锋 骆健美 宋妍 刘洋 郑宇 王敏 期刊:《化学与生物工程》 2011年第03期
研究了乙醇体积分数对简单节杆菌TCCC 11037生长和细胞性质的影响。结果表明,随着乙醇体积分数的增大,菌体的延滞期延长,生物量和比生长速率下降,当乙醇体积分数为6%时几乎不能观察到明显的菌体生长;菌体形态随着乙醇体积分数的增大出现较明显的改变,当乙醇体积分数为8%时,细胞完整性明显破坏,胞浆大量外泄;菌体的耗糖能力随着乙醇体积分数的增大受到明显抑制,菌体生长到32 h时,对照组和3%乙醇添加组中的葡萄糖浓度由9.8g.L-1分别...
作者:张艺 别松涛 刘雁红 李玉 路福平 期刊:《中国新药》 2008年第24期
目的:研究不同基团的甾体底物在不同反应体系中的生物脱氢规律及细胞壁、细胞膜对生物转化的影响。方法:将研究底物置于4种不同的反应体系中,即采用普通直接转化、双液相转化、破碎细胞转化和原生质体转化方法,测定各甾体的熔点、比旋度、吸光系数等理化性质,并通过非线性拟合方法建:正了甾体化合物C1,2位脱氢转化率与其理化性质之间变化规律的数学模型。结果和结论:保证细胞的完整性对C1,2位脱氢转化至关重要;甾体底物在...
作者:骆健美 宋妍 王建锋 宁静 成永新 郑宇 申雁冰 期刊:《化学与生物工程》 2012年第05期
通过对简单节杆菌细胞性质的研究,探讨了不同有机溶剂(乙醇、DMF、DMSO、甲醇)加入后醋酸可的松生物转化反应效率产生差异的原因。采用底物转化法检测生物转化率,采用平板活菌计数法计算细胞存活率,通过糖代谢活力保留值表征细胞的生理代谢活力,用原子力显微镜观察细胞超显微结构,以FDA法表征细胞膜通透性。在体积分数为4%的条件下,4种有机溶剂均能提高简单节杆菌生物转化醋酸可的松的初始转化速率和最终转化率,转化率从高到低依...