作者:宁维颖; 鲍晓明; 王瑞明; 郭利美 期刊:《齐鲁工业大学学报》 2007年第02期
通过对筛选得到的海藻糖产生菌N235(Pseudomonas sp)的培养温度、初始pH、溶氧量、接种量、渗透压、培养时间等参数对菌体生物量和单位菌体海藻糖合酶酶活力的影响的研究,得到了最佳酶活培养条件为:培养温度35℃、培养基初始pH5-6、装液量100mL/500mL三角瓶、渗透压浓度为5%NaCl、培养时间为64h,在此条件下,酶活达到252U/g干菌体。
作者:吴傲; 张显; 徐美娟; 杨套伟; 李华钟; 饶志明 期刊:《生物工程学报》 2019年第07期
从天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor克隆得到海藻糖合酶基因(ScTreS),在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行了异源表达,通过Ni-NTA亲和柱对表达产物进行分离纯化得到纯酶,经SDS-PAGE测定其分子量约为62.3 kDa。研究其酶学性质发现该酶最适温度35℃;最适pH7.0,对酸性条件比较敏感。通过同源建模和序列比对分析,对该基因进行定点突变。突变酶K246A比酶活比野生酶提高了1.43倍,突变酶A165T相对提高了1.39倍,海藻糖转化率分...
作者:王希晖; 刘洪玲; 隋松森; 杨少杰; 王瑞明; 王腾飞 期刊:《食品与发酵工业》 2019年第07期
以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为表达平台,海藻糖合酶为表达蛋白,研究了单启动子和多个启动子串联对外源蛋白表达的影响。分别选择6个启动子构建PsrfA、P43单启动子和PabrB-spoVG-LytR-mmgA四个时期特异性启动子串联表达系统进行验证。根据实验结果分析,组成型启动子P43转录强度最高,摇瓶中酶活达到3 381 U/g,串联启动子PabrB-spoVG-LytR-mmgA强度次之。针对验证酶活最高的重组菌pHT01-P43-treS进行发酵优化,并在5 L发酵罐中...
作者:黄珍; 王慧; 黄芳; 李欣; 王志; 代俊; 陈雄 期刊:《食品工业科技》 2018年第19期
利用壳聚糖作为载体,将大肠杆菌BL21异源表达且纯化后的海藻糖合酶(TreS),采用吸附法制备成固定化酶。固定化单因素实验结果表明,最适海藻糖合酶与壳聚糖的加入量为32.0 mg/g,最适吸附时间为2.5 h。固定化酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为6.0,酶活回收率为40.17%,重复使用9次后,固定化酶酶活残留率为64.64%,重复使用性良好。在4-60℃范围内放置20 min后,固定化酶的相对酶活均高于87%,与游离酶相比温度稳定性没有明显变化。在pH...
作者:刘红娟; 王腾飞; 汤丹丹; 王升; 戴琨; 王瑞明 期刊:《食品工业科技》 2015年第11期
以海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)为研究对象,以海藻糖合酶的酶活为考察指标,对海藻糖合酶基因工程菌E.coli BL21(p ET15b-Tre S)的培养基进行优化。首先运用单因素实验对大肠杆菌(E.Coli)产海藻糖合酶进行了优化,利用Plackett-Burman进行两因素两水平设计对影响其产酶因素进行评估并筛选出具显著效应的3种因素:葡萄糖、酵母浸粉和K2HPO4。用最陡爬坡实验逼近以上三种因素的最大响应面区域后,采用Box-Behnken进行...
作者:王一雯; 马焕; 权淑静; 刘德海; 解复红; 王佰涛; 安明理 期刊:《中国酿造》 2018年第03期
海藻糖合酶是一种能够催化麦芽糖和海藻糖之间发生双向替换反应的分子异构酶,这种合成途径是目前己知的海藻糖生成方式中最简洁的一条路径。该异构酶的结构特点及作用机制受到学术界和药理学界的广泛关注。该文从海藻糖合酶的晶体结构、催化机制及应用现状三个方面阐述有关海藻糖合酶的最新研究成果,有助于改进海藻糖相关产品研发模式,增加海藻糖工业生产经济效益。
作者:张峻; 陈晓云; 齐欣; 陈颖; 魏雪生 期刊:《南开大学学报·自然科学版》 2005年第05期
研究了亚栖热菌CBS-01菌株细胞的渗透处理工艺,并对所得透性化细胞海藻糖合酶的性质进行了考察.结果表明:以2%的甲苯为渗透剂,对10%浓度的菌悬液,50℃渗透处理30~60 min即得透性化细胞海藻糖合酶.该透性化细胞酶的最适反应pH为6.2~7.2,最适反应温度为50~65℃;50℃时,催化麦芽糖生成海藻糖的转化率为70%.
作者:陈晓云; 陈颖; 肖辰鹏; 杨丽维; 李明春; 唐柳; 张峻 期刊:《南开大学学报·自然科学版》 2013年第02期
交联酶聚集体(CLEAs)是一种高活性的无载体固定化酶,常用的基于溶液法(Sheldon法)制备的CLEAs呈无定形的集簇体,影响其连续使用效率.以海藻糖合酶为模型酶,首次在油包水乳化体系中构建了CLEAs,利用扫描电镜和光学显微镜分析了所得CLEA的微观结构,考察了CLEAs的活性和重复使用性能.结果表明,乳化法制备的CLEAs外观呈较规则的微球形,粒径约20~60μm,其活性和重复使用性能均高于参照Sheldon法制备的CLEAs.
作者:韩登兰; 王腾飞; 汪俊卿; 韩海红; 王瑞明 期刊:《中国酿造》 2017年第03期
以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168-Tres基因组为模板,PCR扩增得到同源臂基因sle B1和cwl J1,重叠PCR连接sle B1与卡那霉素抗性(kmr)基因,电转获得B.subtilis 168-TresΔsle B菌株;连接cwl J1与博来霉素抗性(zeor)基因,电转获得B.subtilis 168-TresΔsle BΔcwl J菌株。结果表明,经kmr、zeor抗性筛选及PCR鉴定,成功获得sle B、cwl J基因双缺失菌株B.subtilis 168-TresΔsle BΔcwl J;发酵结果显示,B.subtilis 168-TresΔsle BΔ...
作者:张悦; 宿玲恰; 吴敬 期刊:《食品与生物技术学报》 2016年第09期
为了实现来源于嗜热栖热菌的海藻糖合酶的高效表达,对E.coli BL21(DE3)/pET24a(+)-TreS基因工程菌在3 L发酵罐进行了发酵工艺优化,获得的最优发酵条件为:诱导温度32 ℃,当OD600达到50时以0.2 g/(L·h)的速率补加乳糖进行诱导产酶,在该条件下发酵35 h时酶活达到472 U/mL,是优化前的2.3倍;进而采用该条件在30 L发酵罐进行了初步放大研究,酶活达到356 U/mL。由于该海藻糖合酶热稳定性好,因此尝试了高温处理破碎E.coli...
作者:张峻; 陈颖; 陈晓云; 齐欣; 魏雪生 期刊:《中国生物工程》 2007年第11期
将海藻酸盐凝胶包埋法与交联法和聚电解质静电自组装覆膜法相耦合,对含有海藻糖合酶活性的亚栖热菌的透性化细胞进行了固定化研究。结果表明,利用重氮树脂和聚苯乙烯磺酸钠对海藻酸凝胶微球交替覆膜,可以显著提高凝胶微球在磷酸盐缓冲液中的稳定性,以碳二亚胺对固定化细胞进行交联处理则可以提高固定化细胞中海藻糖合酶的热稳定性。透性化细胞经包埋-交联-覆膜耦合固定化后,酶活回收率为32%,最适酶反应pH值由6.5左右升至7.0左右,最...
作者:胡耀辉; 于寒松; 王欢 期刊:《吉林农业大学学报》 2006年第01期
将从水生栖热菌FL-03中获得的海藻糖合酶粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析、Sephaeryl S-200HR凝胶过滤层析后,纯化68.48倍,产率为18.4%。研究表明:该酶分子量约为101kD,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0,在40~80℃、pH 6.0~9.0范围内具有较高的反应活性和稳定性。Fe^3+对该酶具有一定的激活作用,Cu^2+、Tris、Zn^2+对该酶具有较强的抑制作用。该酶具有高度的底物特异性,只能专一地将麦...
作者:刘建龙; 谭海刚; 王瑞明; 杨连生 期刊:《中国酿造》 2006年第03期
通过高温、高渗等手段从土壤中筛选到l株产海藻糖合酶(trehalosesynthase)滑性较高的菌株T007,其生长湍度15℃-41℃、pH3.0~9.0,并能往〈7%的NaCl盐性培养基中生长。实验证实,T007菌广生的海藻糖合酶能以麦芽糖为底物合成海藻糖。
作者:薛鸿毅; 张莉; 徐汝意; 王瑞明 期刊:《中国食品添加剂》 2011年第04期
海藻糖是一种安全的非还原性二糖,广泛存在于自然界中,具有保湿性,抗冻抗干燥性,热酸稳定性等特殊的生物学功能,对生物大分子有着非特异性的保护作用,因此在医学、农业、化妆品、食品等行业应用潜力巨大。自20世纪80年代后,各国相继开展了海藻糖生理生化和分子生物学的研究,该糖现已成为国际上最近开发的主要低聚糖之一。本文介绍了海藻糖的生产背景、功能和机理、研究意义和酶合成的生产方法,着重讨论了透性化细胞技术生产海藻糖...
作者:王宇凡; 朱玥玥; 魏东盛; 张峻; 邢来君; 李明春 期刊:《微生物学通报》 2009年第05期
我们通过对来自红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)CBS.01中的海藻糖合酶(Trehalose synthase)序列比对及三维模型构建,我们构建了D200G/H165R,R227C,R392A三个定点突变体,检测其对麦芽糖及海藻糖的转化能力。结果发现:在50℃时,D200G/H165R、R392A基本失去其原有活性,而R227C产生海藻糖的能力降低。37℃时,D200G/H165R失去转化能力,而R392A及R227C保有部分能力。因此我们推测,R392位点可能是维持酶的结构及热稳定...
作者:吴秀丽; 岳明; 丁宏标 期刊:《微生物学通报》 2009年第07期
海藻糖是一种天然存在的非还原性二糖, 对生物膜和蛋白质等大分子有独特的保护作用, 在食品、医药、化妆品等多个领域中都有广泛的发展空间。海藻糖合酶(TreS)是一类分子内转糖苷酶, 专一性地以麦芽糖为底物, 一步转化生成海藻糖, 操作工艺简单、底物价格低廉、应用前景良好。本文综述了海藻糖合酶的酶学性质、催化机理、基因工程以及目前存在的主要问题和拟解决方案。
作者:王建彬; 王腾飞; 吕磊; 李丕武; 王瑞明 期刊:《食品工业》 2013年第10期
海藻糖作为一种功能糖,在生命科学、医药、农业、食品工业、化妆品工业等领域都有着广阔的应用前景。长期以来,由于海藻糖制取和提取上存在的困难使海藻糖的价格昂贵。试验通过基因工程技术获得一株具高效表达海藻糖合酶的大肠杆菌,该菌海藻糖合酶产量稳定,产酶酶活高。该大肠杆菌基因工程菌产海藻糖合酶最适温度为50oC,pH7.0-7.5,底物质量浓度为0.3g·mL-1,反应时间为8h,其最高转化率62.14%,每克大肠杆菌干菌体产酶...
作者:聂海彦 刘俊梅 胡耀辉 期刊:《农业机械》 2011年第10期
海藻糖合酶(Trehalose synthase,TreS)属于α-淀粉酶家族(α-amylasefamily),是生物体内通过TreS途径生成海藻糖的一种酶类。利用PCR技术,从本试验室筛出的高产海藻糖突变菌株YUV3中扩增了海藻糖合酶基因(TresY),将其克隆到原核表达载体pET-28a(+),得到重组质粒P-TresY,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白经sDs-PAGE分析,得到一条分子量约为110kDa的特异条带,并经Western blotting分析鉴定,表明...
作者:尚宏丽 顾英 付丽 张力莉 期刊:《中国酿造》 2009年第08期
在筛选出产海藻糖合酶菌株SH-110基础上研究其培养特性和最佳的发酵条件。优化培养基组成为:1%麦芽糖、0.5%蛋白胨、0.2%牛肉膏、0.1%K2HPO4、0.12%NaH2PO4。其最佳的发酵条件为:最佳发酵温度为36℃,最佳发酵pH值为7.2,选取最佳装液量为15mL,发酵终点确定为48h。
作者:张峻 陈晓云 陈颖 齐欣 魏雪生 期刊:《食品科学》 2008年第03期
含有海藻糖合酶的亚栖热菌CBS-01菌株细胞经过透性化处理后,以海藻酸锶凝胶对透性化细胞进行了固定化,当加酶量为12U/g海藻酸钠时,所得固定化细胞的载酶量可达6U/g海藻酸钠。细胞固定化后,最适酶反应pH值由6.5升至7.0,最适酶反应温度未变,为60℃,但热稳定性有所提高,70℃保温60min时,固定化细胞的残存酶活为60%,而未固定化细胞的残存酶活约30%。间歇反应时,固定化细胞催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率可达60%,重...