作者:卢美; 邹翔; 万圣; 杨瑞军; 杜海娟; 张剑锋 期刊:《热带病与寄生虫学》 2019年第04期
目的对环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术检测感染性钉螺的条件进行优化,并评估其在浙江开化县感染性钉螺检测的应用。方法优化LAMP反应条件,建立基于LAMP方法的血吸虫感染性钉螺的检测方法,并用于开化县的钉螺监测。对传统压碎镜检法与LAMP法进行比较。结果引物02-SjR28为最优引物、65℃为最优反应温度、7.8 mM为最优Mg2+浓度。LAMP技术检测结果与压碎镜检法鉴定结果完全相符;LAMP法与压碎镜检法...
作者:丁小龙; 程芳珍; 李茜; 李国秀 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2019年第21期
为了建立一种针对猪水泡病毒(SVDV)的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),用于减少猪水泡病与口蹄疫因临床症状相似而造成的误诊,试验针对SVDV VP1基因序列设计4个LAMP引物,其中外侧引物用于SVDV PCR检测,并利用RT-LAMP和RT-PCR方法进行敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测。结果表明:针对SVDV的RT-LAMP检测方法的敏感性是RT-PCR的10倍;RT-LAMP方法的特异性良好,与口蹄疫病毒无交叉反应;两种方法对临床样品检测的符合率为100%...
作者:吴潇; 吕贝贝; 蒋玮; 白蓝; 武国干; 王金斌; 王荣谈; 潘爱虎; 唐雪明 期刊:《食品与生物技术学报》 2019年第08期
为了建立肉产品中鸭源成分的现场快速检测技术,根据动物种间特异性的原则,筛选出一对品种特异的PCR引物,在此引物扩增片段的基础上,设计了环介导等温扩增(LAMP)引物序列,能特异检测鸭源成分。通过条件优化实验,发现在25μL的扩增体系中,内外引物浓度比为1∶4,温度为63.5℃,MgSO4添加量为5mM/μL,dNTPs添加量为1.75mM/μL,BstDNA聚合酶添加量为0.4U/μL,甜菜碱添加量为0.25μmol/μL,LAMP反应时间为30min时,LAMP检测体系检测效果达到最优,...
作者:万宇平; 吴小胜; 张瑜; 杜美红; 王兆芹; 冯才伟; 赵正苗; 何方洋 期刊:《山东畜牧兽医》 2019年第12期
通过对金黄色葡萄球菌的femA基因设计两对特异性引物,运用环介导等温扩增技术(LAMP)扩增基因的特定区域,探索出一种金黄色葡萄球菌的快速检测方法。结果表明,该方法对金黄色葡萄球菌菌液检测的最低检出浓度为102~103CFU/Ml;使用不同浓度的金黄色葡萄球菌处理样品,不同样品LAMP方法检测结果与国标方法一致,两者符合率为100%。该方法中金黄色葡萄球菌的femA基因特异性引物及建立的LAMP方法能有效检测食品中的金黄色葡萄球菌,操作简单...
作者:郭建平; 万佳佳; 陆兆新; 吕凤霞; 张充; 赵海珍; 别小妹 期刊:《食品科学》 2019年第20期
应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立基于颜色判定的快速、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法.根据金黄色葡萄球菌特异性靶基因SAR0395设计LAMP引物,建立可视化LAMP检测方法.优化的反应体系为:1.6μmol/L内引物(FIP和BIP),0.2μmol/L外引物(F3和B3),4.0 mmol/L MgSO4,1.0 mmol/L dNTPs,0.4 U/μL Bst 2.0 WarmStartTMDNA聚合酶,120μmol/L羟基萘酚蓝,扩增温度60℃,扩增时间60 min.在可视化LAMP体系中...
作者:陈欢; 余蓓蓓; 黄世旺; 徐昌平; 毛争争 期刊:《预防医学》 2019年第04期
目的应用环介导等温扩增技术(LAMP)和横向流动试纸条检测技术(LFD)联合检测金黄色葡萄球菌。方法从GenBank数据库下载多条金黄色葡萄球菌nuc基因序列,在其保守区域设计LAMP引物,建立LAMP-LFD恒温扩增快速检测技术;优化反应温度和体系后通过检测多种病原菌验证检测特异度和灵敏度,并比较LAMP-LFD和荧光PCR法的检测效果。结果 LAMP-LFD在最佳反应温度60℃条件下检测金黄色葡萄球菌具有高特异度,构建的阳性质粒DNA灵敏度达到1.0×101co...
作者:王品雪; 李云香; 任玫; 姚倩; 王丹; 林青 期刊:《畜牧与兽医》 2019年第06期
为了探索环介导等温扩增技术(LAMP)在牦牛粪便阿米巴原虫检测中的实用性,利用阿米巴原虫的18S rRNA基因序列进行引物设计,在优化LAMP检测方法的同时,对该方法在进行阿米巴原虫检测时的特异性、敏感性、重复性进行分析。结果显示:已建立的阿米巴原虫LAMP检测方法具有一定的特异性,敏感性优于PCR,并具有良好的重复性;在临床应用性方面,其检出率与利用传统PCR得到的检出率完全相同。结果表明:该LAMP检测方法可用于牦牛粪便中阿米巴原...
作者:孙志国; 吴昊; 周珩 期刊:《科学技术创新》 2013年第28期
环介导等温扩增技术作为当前技术条件支持下,发展最为迅速的核算扩增技术之一,在对各类病原微生物进行检验的过程当中发挥着突出的优势与价值,是常规免疫荧光、DNA探针等检验方法所不可比较的。在将此种技术应用于微生物检验工作的过程当中,表现出了极高的灵敏度、特异性、同时检验过程中的耗时较短,反应速度较快,相较于传统意义上的检验方法而言,产物检测更加的方便与快捷。以上均为应用环介导等温扩增技术的优势所在。主...
作者:孙兴泽; 程兴东; 张能英; 吴愚; 王欢 期刊:《广州化工》 2015年第04期
通过对我市手足口病病毒种类进行初步筛查鉴定,建立逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)的研究平台,以评价LAMP技术在手足口病病毒毒检测方面是否具有优越性。通过采集临床确诊病人的咽拭子比较RT-PCR、RT-LAMP三种检测方法来确定对于手足口病病毒最有优势的检测方法。RT-PCR检出阳性率为70%,RT-LAMP的检出阳性率为65%。RT-LAMP方法用于手足口病病毒的检测准确可行,简单快速,值得在基层医院推广。
作者:余胜标 期刊:《世界最新医学信息文摘》 2018年第56期
目的利用环介导等温扩增技术(LAMP)对不同时间的钉螺体内血吸虫DNA进行检测,可以鉴定出血吸虫幼虫发育早期阶段的感染性钉螺。方法选择我区三个不同流行类型的,具有代表性的重点环境,分别采集钉螺100只,在解剖镜下镜检的基础上,再利用环介导等温扩增技术(LAMP)对其进行检测,了解我区目前是否有感染性钉螺。结果三个不同的流行村的钉螺直接解剖镜检和LAMP技术检测结果均为阴性,未发现感染性钉螺,与本地血吸虫病疫情相符合。结论通过...
作者:袁向芬; 冯春燕; 吕继洲; 吴绍强 期刊:《中国动物检疫》 2018年第12期
根据GenBank中收录的罗斯河病毒(RRV)基因序列,以其保守的E2基因为靶序列,设计并筛选出一套特异性LAMP引物;通过优化反应条件,最终建立了RRVRT-LAMP检测方法,并对其灵敏度、特异性进行了验证。结果显示:本方法对RNA样本的最低检测限可达10拷贝/25μL,而荧光RT-PCR方法和常规RT-PCR方法的灵敏度分别为10拷贝/25μL、100拷贝/25μL;其特异性良好,不与同属或相似病毒发生交叉反应。结果表明,本方法灵敏、特异、快速、便捷,可应用于我国虫...
作者:王品雪; 李云香; 姚倩; 任玫; 王丹; 林青 期刊:《动物医学进展》 2019年第10期
环介导等温扩增技术(LAMP)作为一种新的分子检测技术,具有广阔的应用前景,为了将该技术应用于牦牛粪便样品中芽囊原虫的检测,提高芽囊原虫的筛查效率,利用芽囊原虫SSU rRNA基因设计引物,建立与优化芽囊原虫的LAMP检测方法,同时对已建立的芽囊原虫LAMP检测方法进行特异性、灵敏度及重复性的试验,用102份牦牛粪便样品进行临床验证。结果表明,该方法在进行芽囊原虫检测时具有较高的特异性,优于PCR的敏感性、重复性与临床应用性。
作者:刘志科; 张洁; 杨宁宁; 徐锦凤; 徐明国; 荆明龙; 吴文星; 曹旭东; 任艳; 石峰; 陈创夫 期刊:《动物医学进展》 2018年第03期
建立沙门菌病原体的一种可目视化环介导等温扩增技术(LAMP),实现对沙门菌的高效快捷检测。针对沙门菌的invA基因的高度保守区域,设计一套特异性引物,优化LAMP扩增反应体系和条件,并对该方法的特异性、灵敏性和人工污染样品以及临床样品分别进行检测。与传统的细菌分离与鉴定、PCR和real-timePCR方法进行敏感性比较。该方法优化后的最佳反应体系为内外引物浓度比例为3:1,dNTPs为2.5μL,MgS04为1.5gL,2.5μL甜菜碱(10mol...
作者:李家伟; 王建科; 张淑琴; 张加力; 郭利 期刊:《中国兽医学报》 2019年第05期
牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)是引起牛呼吸道疾病的一种病毒性病原体。本研究建立一种利用环介导等温扩增技术(RT-LAMP)快速检测BRSV的新的方法,针对BRSV N基因(GeneBank:AF054668.1)设计4对特异性LAMP引物,每组引物特异性识别靶基因序列上4个独立区域,利用扩增靶DNA的Bst2.0 DNA聚合酶,63℃恒温水浴50 min完成病毒检测,使用钙黄绿素检测荧光目视和琼脂糖凝胶电泳方法,同时对牛的其他主要病毒进行特异性检测,结果证明特异性好。该RT-L...
作者:袁向芬; 吕继洲; 吴绍强; 王巧黎; 赵宏 期刊:《生物技术通报》 2018年第10期
环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型分子诊断技术,具有灵敏度高、反应快速等优点,且仅利用简单的恒温水浴设备即可实现对特异性靶基因的高效扩增,在分子诊断领域具有巨大潜力。近几年来LAMP技术在分子诊断领域的研究非常广泛,涉及细菌、病毒、寄生虫的检测及食品转基因成分检验等诸多方面,受到越来越多学者认可,有研究者认为其可作为PCR的替补技术应用于临床基因诊断工作中。然而由于目前该技术缺乏规范化且成熟配套的上下游技术...
作者:徐美迪; 木兰; 牛超 期刊:《生物技术通讯》 2019年第01期
环介导等温扩增(LAMP)是一种新兴的核酸扩增方法,由于其具有高灵敏、高特异、操作简单、检测快速、价格低廉等诸多优势,现已成为分子生物学诊断技术的重要组成部分,并广泛应用于基层实验室及野外致病微生物的快速检测中。我们简要介绍了LAMP的技术优势,总结了近年来LAMP在快速检测致病微生物中的应用及新进展,希望能为其发展提供参考。
作者:洪颖; 段勇; 徐秋月 期刊:《中国社区医师》 2018年第05期
本文介绍环介导等温扩增技术(LAMP)原理、特点及应用前景。因LAMP具有特异性高、灵敏度高、易操作、污染风险低的特点,因而目前在传染病、真菌、细菌,检测领域中作为诊断工具得到了认可。
作者:温福利 期刊:《实验动物与比较医学》 2018年第03期
建立检测兔斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)环介导等温扩增技术(LAMP)的方法。方法根据E.stiedai的ITS1-5.8s RNA-ITS2基因序列设计特异引物,通过优化反应条件,建立E.stiedai的LAMP检测方法。结果 25μL的反应体系中Bst聚合酶的最优添加量是1.5μL,DNA的最优添加量是75 ng,环引物、内引物和外引物的最优浓度依次是0.8μmol/L、1.6μmol/L和0.15μmol/L,在63℃反应1 h后能特异性地扩增目的基因,并且具有较高的灵敏度。结论建立了E.stiedai...
作者:吴丹丹; 张超群; 马士朝; 李东; 孙殿兴 期刊:《解放军医药》 2019年第01期
目的建立逆转录-环介导等温扩增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法检测乙型肝炎病毒(HBV)RNA,为乙型肝炎抗病毒治疗安全停药的研究提供技术支持。方法从NCBI数据库下载HBVA~D型,通过序列对比选出S区保守序列设计LAMP引物;提取HBV血清样本RNA与DNA,用RT-LAMP、LAMP进行检测;通过对非特异模板扩增实验验证扩增特异性;通过倍比稀释的HBV-RNA模板,用RT-PCR法与RT-LAMP法检测以评价灵敏性。...
作者:潘奕如; 曹景龙; 王静远; 黎洁 期刊:《大连海洋大学学报》 2018年第04期
病害的早期诊断是水产动物病害防治中的重要环节,传统的早期诊断主要通过生化反应和血清学试验来实现,该方法耗时久,要求操作人员具备一定的专业素质。随着分子生物学技术的快速发展,一种高效、简便且特异性强的核酸扩增技术——环介导等温扩增技术(LAMP)应运而生,LAMP是基于聚合酶链式反应和探针核酸检测技术的分子检测手段,可以检测动植物体内的病原菌、病毒、寄生虫和真菌等病原生物,在水产动物病原生物检测中应用广泛,如虹彩病...