作者:赵晓蕴; 陈雪 期刊:《信息通信技术与政策》 2004年第11期
介绍了GPON的特点和GEM的产生,阐述了GEM功能、帧格式、定界、分片等,并对比了GEM和GFP的异同,探讨了GPON和城域网的互通问题。
作者:李芳; 敖立 期刊:《信息通信技术与政策》 2004年第07期
介绍了ITU-T SG15第六次全会在光传送网和接入网标准方面的最新进展。
作者:高重天; 陈鹏; 孙群 期刊:《生物学通报》 2009年第11期
介绍如何用自制的GFP血清抗体为本科生开展免疫印迹实验。实验包括大肠杆菌表达的GFP的超声破碎抽提、GFP的非变性PAGE制备电泳和SDS-PAGE制备电泳、GFP血清抗体的快速亲和纯化及最后的免疫印迹分析等实验组成的完整系列。学生通过本实验的训练在蛋白质免疫印迹的操作上有明显的进步。
作者:赵小惠; 李琛; 张华; 郑铭喆; 季延红 期刊:《转化医学电子》 2017年第10期
目的:淋巴细胞特异性重组激活基因(RAG)蛋白1和2共同组成的RAG重组酶是造成淋巴细胞发育及产生抗体多样性的关键性蛋白.本研究构建并优化同时表达RAG1和RAG2的慢病毒载体,为研究RAG1和RAG2的结构和功能奠定基础.方法:构建同时表达RAG1、RAG2和绿色荧光蛋白(GFP)的载体;Western Blotting验证该载体RAG1和RAG2蛋白表达;体外重组实验证实该载体表达的RAG蛋白具有催化断裂DNA的功能.结果:构建了表达RAG重组酶的载体pWPI-RAG2-P2A-RA...
作者:刘娣; 张巨源; 陈雯莉; 王莉 期刊:《生物资源》 2015年第04期
绿色荧光蛋白(GFP)能够作为报告分子对活体细胞中特定基因的时空表达进行实时追踪,因此广泛应用于生物学研究领域。在用GFP对细胞活动进行追踪的实验中,常有无法在取样后及时对样品进行荧光观察的情况,此时需要先将样品进行固定以便对其进行观测。然而,不恰当的细胞固定方法会导致胞内GFP荧光信号强度减弱、位置改变等后果。甲醛是最常用的细胞固定剂,也常被用于固定表达GFP蛋白的细胞样品。但对甲醛固定GFP样品的报道多是针对于真...
作者:毛建平; ZicaiLIANG; 毛秉智 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2004年第03期
基因mRNA的结构靶点筛选是反义核酸药物研发的一个难题,免(Oryctolagus cuniculus)β珠蛋白基因mRNA的结构靶位点通过运用MAST技术筛选获得,和计算机软件RNAstructure3.71模拟分析的位点进行了比较,也和寡核苷酸微阵列杂交技术筛选获得的靶点结果(M.Natalie,1997)进行了比较,显示:据MAST技术获得的兔β珠蛋白基因2个反义核酸结合靶位点,和用RNAstructure3.71软件给出的模拟分析的2个靶位点相同,且它们与寡核苷酸微阵列杂交...
作者:毛建平; 王全会; 施水兰; 袁国刚; 左刚; 崔玉芳; 毛秉智 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2005年第04期
基因mRNA的靶点筛选是设计反义寡核苷酸的关键.建立了PARASS(poly-A anchored RNAaccessible sites screening)方法,即通过在mRNA末端引入poly A,与生物素标记的polyT退火结合,将其同链亲和素磁珠混合,使mRNA通过3'末端得到固定,保持mRNA的自然伸展和折叠,与寡核苷酸文库杂交筛选mRNA的结合靶点.PARASS筛选获得了绿色荧光蛋白(GFP)mRNA的3个反义寡核苷酸结合靶点,据其设计了多条反义寡核苷酸,与对照组相比,体外RNase H分析显示3个...
作者:欧阳梅; 徐明明; 卢韬; 黄越玲; 易咏红 期刊:《广州医科大学学报》 2011年第05期
目的:通过杂交技术获得能表达GAD67-GFP的fmr1基因敲除小鼠模型。方法:fmr1基因敲除(fmrl—ko)雌性小鼠(X—X-)和GAD67-GFP敲入基因杂合雄性小鼠(2+2-)杂交。鼠尾巴提取基因组DNA,用PCR方法鉴定所有子代基因型。对杂交后代小鼠进行行为学观察,并行脑组织切片观察绿色荧光蛋白在γ-氨基丁酸能神经元的表达。结果:PCR方法证实通过杂交繁殖出四种基因型小鼠:同时带有杂合fmrlko及GAD67-GFP位点的雌性小鼠(X+X-/2+2-)...
作者:邹东霆; 李冰 期刊:《广州医科大学学报》 2010年第05期
目的:以绿色荧光蛋白(GFP)作为报道基因,探讨转染GFP的培养细胞检测细胞周期的流式细胞技术。方法:用贴壁细胞MCF-7细胞以脂质体转染PEGFP—C,,转染后24h收集细胞,分别用70%乙醇固定、1%多聚甲醛固定和1%多聚甲醛固定后用透膜齐3透膜PI染色,以非转染细胞作为阴性对照,转染CFP非固定细胞作为阳性对照,用流式细胞仪检测。结果:用70%乙醇固定细胞导致GFP完全淬灭;用1%多聚甲醛固定保持99%的GFP阳性率,荧光强度稍...
作者:向湘; 强永刚; 廖永华; 安梦林 期刊:《影像研究与医学应用》 2018年第18期
目的:对比A549-GFP移植瘤裸鼠模型肿瘤切片的荧光扫描和99mTc-MIBI显影的图像,评价核素标记方法对肿瘤生长特性的指示价值。方法:构建能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的肺癌A549细胞系,建立A549-GFP裸鼠移植瘤模型,培养一段时间,注射99mTc-MIBI显像剂后取下肿瘤,制成合适的切片,分别进行绿色荧光和99mTc-MIBI扫描成像,利用计算机软件图像处理技术对切片图像进行处理。结果:荧光图像的肿瘤边缘清晰,切片内部呈大范围高亮度的荧光;99mTc...
作者:张平平; 龚清秋 期刊:《南开大学学报·自然科学版》 2019年第04期
Hippo通路是迄今为止发现的最重要的负调控动物器官大小的信号通路之一,其核心由两对级联的激酶-脚手架蛋白复合物构成.本实验室在前期工作中首次发现了拟南芥Hippo(Hpo)的同功能基因SIK1,并建立了与Hpo-Mats对应的SIK1-MOB1模块,发现其通过促进退出细胞分裂与细胞延展,参与植物侧生器官大小的调控.为进一步探究SIK1调控器官大小的分子机制,构建了SIK1-GFP转基因株系,用GFP-Trap免疫共沉淀方法捕获与SIK1内源互作的蛋白,并进行质谱...
作者:李振宇; 徐开林; 潘秀英; 鹿群先; 主鸿鹄; 何徐彭 期刊:《徐州医科大学学报》 2004年第02期
目的构建以泛醌启动子(PUB)驱动绿色荧光蛋白(GFP)表达的慢病毒载体三质粒表达系统,并建立其包装细胞系获得GFP的表达.方法载体的构建采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接等方法.三质粒系统中,转移质粒含PUB启动子及标志基因GFP,包装质粒为△NRF,内含CMV启动子和来自胰岛素基因的Poly(A)位点,包膜蛋白质粒编码水疱性口炎病毒G糖蛋白(VSV-G).载体构建成功后,用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染来源于人胚肾细胞系的包装细胞--293T,12 ...
作者:王新武; 刘 期刊:《中国现代医生》 2010年第06期
目的探讨携带人bFGF和GFP基因慢病毒(1enti—bFGF—GFP)转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)及不同MOI(multiplicity of infection)的转染效率。方法实验组:带有bFGF和GFP基因慢病毒感染的BMSCs(bFGF—GFP—BMSCs)。空载体组:带GFP基因慢病毒感染的BMSCs(GFP—BMSCs)。空白组:未经感染的BMSCs;ELISA、RT—PCR检测各组细胞培养72h后bFGF的表达。MOI分别为10、30、50转染BMSCs的转染率。结果bFGF—GFP—BMSCs组表达bFGF蛋白量...
作者:孙丽翠; 刘朋朋; 杨国庆; 仲飞; 刘维全; 齐顺章 期刊:《中国兽医学报》 2004年第04期
采用胶原酶分阶段消化法对家兔的原代乳腺上皮细胞进行了分离培养,并且构建了以牛β-乳球蛋白(BLG)基因5′调控序列为启动子、以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因的真核表达载体.将该载体转染兔原代乳腺上皮细胞,然后用不同质量浓度的皮质醇、胰岛素和催乳素诱导.结果表明,用5 mg/L催乳素+5 mg/L胰岛素+1 mg/L皮质醇诱导,在诱导36 h后开始有荧光出现,诱导48~60 h时荧光更强一些,而未经诱导的细胞GFP则不表达.
作者:刘旭阳; 王宁利; Paul; Kaufman 期刊:《中国生物工程》 2005年第08期
目的:探讨腺病毒载体介导的外酶C3转移酶(exoenzyme C3 transferase,C3)表达对体外培养的正常或地塞米松处理的人类小梁细胞的作用.方法:构建C3和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒表达载体(AdC3GFP).用AdC3GFP转导人类正常或经地塞米松处理的小梁细胞.观察(1)小梁细胞肌动蛋白、粘着斑蛋白(vinculin)、β-链蛋白(β-catenin)的变化;(2)地塞米松能否诱导小梁细胞形成肌动蛋白交联网(cross linked actin networks,CLANs)结构以及AdC3GFP对CLA...
作者:邱珊莲; 崔中利; 樊奔; 戴青华; 李顺鹏 期刊:《应用与环境生物学报》 2004年第06期
用Sau3A I酶切甲基对硫磷降解菌DLL-1总DNA,与BamH I酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连,转化E.coliDH5a,在选择性平板LB(Amp')七从大约1×10^4个菌落筛选到50个含启动子片断的阳性克隆.挑选其中一个阳性克隆,将启动子片断克隆到pIJ2925和pBBR-MCS2上构建成重组质粒pHGFP和广宿主标记载体pBBRGFP.然后将pHGFP载体上的启动子片断克隆到广宿主载体pTR102上,获得第二个广宿主标记载体pTRGFP.将pTRGFP和pBBRGFP通过三亲接合分别...
作者:叶中德; 沈倍奋; 宋伦 期刊:《生物工程学报》 2004年第02期
为了研究Stat3入核的分子机制,将SV40大T 抗原的经典核定位序列NLS(nuclear localization sequence)分别融合在Stat3-GFP分子和缺失突变体Dstat3-GFP的分子之间,构建Stat3-NLS-GFP和Dstat3-NLS-GFP融合分子.转染293T细胞,以NLS-GFP为阳性对照,通过激光共聚焦显微镜的观察融合分子的亚细胞位置,未经白介素-6刺激的Stat3-NLS-GFP和经白介素-6刺激的Stat3-GFP呈胞核分布,未经白介素-6刺激的Stat3-GFP和Dstat3-NLS-GFP呈胞浆分布. 初步...
作者:左妍; 杨克迁 期刊:《生物工程学报》 2005年第01期
将来源于水母的绿色荧光蛋白基因(gfp)和来源于E.coli转座子Tn10的四环素阻遏蛋白基因(tetR)共同构建到E.coli表达载体pET-30a+上,获得TetR C-端与GFP N-端融合蛋白.对经诱导表达并纯化后的融合蛋白(TR::GFP)进行荧光发射光谱分析表明,该融合蛋白保留了GFP的荧光特性,即在395 nm激发下,可在510 nn附近有特征发射峰.在加入四环素后,融合蛋白在395 nm激发下,在400 nm~700nm范围内的发射光谱发生明显变化,荧光强度普遍增加,且以510 n...
作者:王蓉蓉; 张龙兴 期刊:《国际医学寄生虫病》 2005年第03期
为了了解子孢子在蚊虫唾腺中如何运动,法国巴斯德研究所的研究人员利用鼠疟原虫子孢子可由期特异性的CS启动子启动表达绿色荧光蛋白(GFP)的原理,运用滞时荧光显微镜,跟踪拍摄了标记GFP的子孢子在斯氏按蚊活体内和分离唾腺中的运动过程。
目的探讨超声介导基因转染小鼠骨骼肌细胞的作用.方法采用质粒GFP作为目的基因,超声(频率1 MHz,脉冲波,工作周期20%)作用于H2K成肌细胞,分别使用两种空间时间峰值强度(0.5 W/cm2、1 W/cm2),照射时间分别为10 s、20 s、30 s、40 s、50 s、60 s.流式细胞仪测定GFP阳性细胞率,台盼蓝染色测定细胞生存率.结果较低能量超声(0.5 W/cm2)GFP阳性细胞率总体显著低于较高能量超声(1 W/cm2),超声增强GFP转染H2K细胞的最佳条件为:空间时间峰值...