作者:彭坚; 施媛; 杨镭镭; 吴辉振 期刊:《基因组学与应用生物学》 2019年第09期
作者:李连涛; 张宝福; 李慧忠; 郑骏年 期刊:《徐州医科大学学报》 2012年第09期
目的研究荷载管家基因GAPDH shRNA的溶瘤腺病毒(TD-GAPDH)对人。肾癌细胞OSRC增殖抑制的作用。方法病毒TD—GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染OSRC细胞、人肾小管上皮细胞HK-2。Western blot法检测E1A表达;逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、Western blot法分别检测GAPDH的mRNA、蛋白的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;结晶紫染色法检测细胞毒作用。结果TD—GAPDH、TD55、ZD55-EGFP感染的OSRC细胞均表...
作者:顾玉明; 王洵; 裴冬生; 郑俊年 期刊:《徐州医科大学学报》 2012年第12期
目的构建含复制蛋白A70(RPA70)基因的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达质粒,诱导RNA干扰(RNAinterference,RNAi)。方法根据GenBank中RPA70基因的mRNA序列,设计、合成2条反向重复多聚寡核苷酸序列,退火形成双链DNA。利用分子克隆技术,将含RPA70基因的双链DNA与经双酶切后的载体psi—U6-GFP—Neo连接,构建psi—U6-GFP—Neo—shRNA—RPA70重组质粒,通过DNA测序证实表达质粒构建成功。设空白对照组、阴性对照组及实...
作者:王璟; 庞义存; 赵向寨; 李萍 期刊:《中国妇幼保健》 2014年第05期
目的:观察在人绒癌JEG-3细胞株中应用短发夹RNA抑制存活素表达的效果。方法:选取已证实有效的靶向Survivin的shRNA序列,将其转染JEG-3细胞后检测SurvivinmRNA水平的变化,同时进行荧光报告检查。结果:shRNA表达载体构建成功,转染JEG-3报告细胞后转染组24h孔中均有弱荧光表达,48h荧光表达增强,转染率60%-75%,测序证实构建的表达载体序列正确,转染后转染组JEG-3细胞中的Survivin mRNA和蛋白的表达明显减弱。结论:靶向Sur...
作者:孟繁杰; 曹斌; 冯增利; 王海刚; 马顺茂; 赵文增; 尹东剑 期刊:《中国全科医学》 2013年第09期
目的观察载体介导的RNA干扰(RNAi)技术对肝癌细胞突变的H—ras““。表达的抑制作用。方法将针对突变H—ras的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体转染肝癌细胞株BEL7402和SMMC7721,用免疫印迹(Westernblot)法检测H—ras蛋白的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。计量资料比较采用t检验;计数资料比较采用,检验。结果(1)转染前、后SMMC7721的H—ras蛋白表达量[光密度值分别(17524-21)和(1736±28)]比较,差异无统计学意义...
作者:王曼; 孙长花; 李东; 李婷婷; 张文慧; 金晶; 左其生; 张亚妮; 陈国宏; 李碧春 期刊:《农业生物技术学报》 2018年第09期
原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)作为精细胞的祖细胞,广泛用于研究精子的发生。成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)家族对PGCs的形成至关重要。为了探究成纤维生长因子8(FGF8)的具体功能,本研究通过构建家鸡(Gallus domesticus) FGF8的短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)慢病毒干扰载体,获得稳定低表达FGF8的鸡胚胎干细胞株,并进一步研究FGF8在鸡胚胎干细胞(embryonic stem cells, E...
作者:莫世贤; 邓勇军; 刘焕鹏; 李珏; 陈理军; 赵金燕; 张良 期刊:《中国病理生理》 2019年第03期
作者:闫冬; 吴怡娴; 董娟娟; 李秀梅; 封敏 期刊:《癌变畸变突变》 2018年第05期
目的:探讨在食管鳞癌ECA109细胞中Survivin对c-myc基因的调控作用。方法:将食管鳞癌ECA109细胞分为Smwivin shRNA干扰组、阴性质粒对照组(Control shRNA)和空白细胞株(未加任何处理的食管癌ECA109细胞),将2μg Survivin shRNA质粒、2μg Control shRNA质粒分别转染ECA109细胞,48hA收集各组细胞,采用RT-PCR法检测各组Survivin、c-myc mRNA的表达,Western blot法检测Survivin、c-myc蛋白及p-ERK蛋白的表达;采用ERK、p38、JN...
作者:田军; 刘晓红; 韩林 期刊:《国际心血管病》 2019年第03期
作者:胡皓; 孟威; 刘安堂; 汪汇; 朱晓海; 江华; 钱玉鑫 期刊:《第二军医大学学报》 2018年第10期
作者:王学中; 刘志广; 刘平 期刊:《中国免疫学》 2019年第16期
目的:探究shRNA干扰骨形成蛋白和激活素的穿膜抑制剂(BAMBI)对非小细胞肺癌A549细胞生长、侵袭和迁移的影响及其潜在的分子机制。方法:构建shRNA BAMBI质粒和shRNA scramble载体。将构建好的质粒转染A549细胞后,实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹检测转染效果;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移能力;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹检测Ki67、Bax、cl-caspase-3、血管...
作者:卢娜; 李成长; 罗晓秋; 杨坤丽 期刊:《中国应用生理学》 2018年第05期
目的:构建Beclin-1基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,感染人SH-SY5Y细胞,观察沉默Beclin-1基因后低氧对SH-SY5Y细胞自噬的影响。方法:构建特异性靶向Beclin-1基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体;再将载体转染入SH-SY5Y细胞;RT-PCR检测Beclin-1的mRNA表达;Western blot检测Beclin-1蛋白表达;CCK-8法测定Beclin-1 shRNA对SH-SY5Y细胞活力的影响。再将空白对照、阴性对照、转染型三种细胞分别以21%常氧及5%低氧培...
作者:刘伏友; 刘虹; 袁芳; 彭佑铭; 刘映红; 段绍斌 期刊:《中华肾脏病》 2004年第02期
目的研究pcDU6载体质粒介导的转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)对体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMC)TGF-β1表达的影响,并与TGF-β1反义RNA对HPMC的作用比较.方法针对TGF-β1的以ggcc开始的21碱基大小的片段,分别设计2对寡核苷酸,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的pcDNA3.1(-)载体(命名为pcDU6).2.对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由6碱基序列间隔的反向互补序列,构建成TGF-β1短发夹RNA的产生质粒.并构建反义TGF-β1...
作者:邢智远; 张凤娟; 王志伟 期刊:《中国普外基础与临床》 2018年第12期
作者:主余华; 张春清; 赵幼安; 褚衍六; 孙成刚 期刊:《世界华人消化》 2005年第24期
目的:利用pEGFP质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达的质粒.方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体pEGFP中,构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析.结果:CTGF的sRN段被成功克隆到pEGFP质粒载体中,3个重组质粒shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切与测序证实构建成功.结论:成功构建了能表达CTGF shRNA...
作者:汤建光; 唐北沙; 谭利明; 张玉虎; 曹立; 江泓 期刊:《中国医师》 2005年第06期
目的构建Survivin的短发夹RNA表达质粒并通过由其介导的RNA干扰来下调神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞中Survivin的表达.方法针对人Survivin的Mrna序列设计合成两对寡核苷酸序列,退火后将其连入Pbshh1,对重组质粒Pbshh1-S1和Pbshh1-S2进行酶切和测序鉴定,然后将质粒转染SH-SY5Y细胞,运用RT-PCR和Western印迹检测Survivin基因的表达.结果酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被克隆到Pbshh1,Pbshh1-S1和Pbshh1-S2转染SH-SY5Y细胞后,Surv...
作者:王亮; 吴友平; 郑振中; 殷然; 王梦洪; 郑泽琪; 彭景添; 魏云锋 期刊:《中国老年学》 2014年第11期
目的:探讨人纤维介素(fgl2)对心肌微血管内皮细胞(MMVECs)增殖、迁移的影响。方法制作并包装fgl2的RNA干扰慢病毒,转染MMVECs。实验分为单纯MMVECs(对照组)、空载质粒慢病毒( GFP组)、fgl2短发夹 RNA( shRNA)慢病毒( fgl2-RNAi-LV组)。稳定转染4 d后,实时定量RT-PCR( qRT-PCR)检测各组fgl2 mRNA表达,MTT检测细胞增殖;Transwell 检测细胞迁移能力。结果 qRT-PCR 结果显示,与对照组与GFP组比较,fgl2-RNAi-LV组...
作者:杨长庚; 文华; 王美姿; 陆星; 蒋明; 田娟; 喻丽娟 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期
探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2 ( Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA ( short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5 ℃/d降温速率对转染后的罗非鱼肾脏细胞进行低温胁迫,分别在25、20、15、10 ℃进行细胞采集。随后,利用实时荧光定量PCR检测Gas2基因及P53基因mRNA表达变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并开展WST-1细胞增殖实验检测细胞...
作者:马晋平; 詹文华; 汪建平; 彭俊生; 高劲松; 朱孝峰; 殷勤伟 期刊:《外科理论与实践》 2004年第03期
目的:观察针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(small hiirpin RNA,shRNA)表达载体(SHipU6-GFP)对SGC 7901胃癌细胞中GFP的抑制作用.方法:设计针对GFP基因的shRNA序列,构建SHi-pU6-GFP质粒.采用质粒pCX-GFP(5510 bp)和含有鼠U6启动子pU6(3.3kb)质粒,应用LipofectamineTM2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染SGC 7901细胞.荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率.结果:质粒SHi-pU6-GFP经酶切电泳后,出现33kb和约350 bp...
作者:刘燕玲; 刘欢; 项颖卿; 陈晓燕; 徐萍; 闵卫平 期刊:《细胞与分子免疫学》 2017年第12期
目的以吲哚胺2,3双加氧酶2(IDO2)作为治疗靶标,研究IDO2基因表达在肿瘤治疗中的作用及其对免疫应答的影响。方法采用B16-BL6细胞株构建小鼠黑素瘤种植模型,以携带IDO2小干扰RNA的质粒(IDO2-shRNA)及对照组质粒(scramble-shRNA)尾静脉高压注射法治疗小鼠黑素瘤;游标卡尺测量肿瘤大小;流式细胞术检测各组引流淋巴结内调节性T细胞(Treg)百分比、T细胞凋亡百分比,以及脾脏内树突状细胞(DC)表面共刺激分子CD80、CD86表达情况;...