作者:刘春媛; 廖峰; 汝文文; 张建岭; 李萍; 苏宁 期刊:《安徽农业科学》 2020年第03期
[目的]研究阿胶多糖的分离提纯工艺及其抑制酪氨酸酶活性。[方法]针对阿胶多糖提取中蛋白质的干扰,通过对几种脱蛋白方法(TCA法、Sevage法、蛋白酶法)的比较,优选出阿胶多糖提取液的脱蛋白方法,并探讨阿胶多糖对酪氨酸酶的抑制作用。[结果]TCA法、Sevage法及蛋白酶法的脱蛋白率分别为78.94%、87.73%和29.97%,多糖保留率分别为73.96%、32.14%和72.57%。所得阿胶多糖对酪氨酸酶有一定的抑制作用,当浓度为1 mg/mL时,抑制率为24.42%。[...
作者:张宇飞; 曹满园; 王丽英; 赵伟刚; 李晓霞; 常彤; 许保增 期刊:《中国农业科学》 2020年第05期
【目的】体外真核表达梅花鹿(Cervus nippon)激活素A重组蛋白并测定其生物活性,为进一步明确激活素A在梅花鹿卵母细胞体外成熟过程中的生理学功能提供基础。【方法】利用RT-PCR技术克隆梅花鹿激活素βA (ActivinβA, ACTBA)亚基基因的cDNA全长序列,同时利用生物信息学对梅花鹿激活素βA的基因特征进行分析。在NCBI数据库下载其他物种激活素βA同源序列,利用Clustalx和MEGA 4软件进行同源比对并构建进化树。构建pcDNA4/ACTBA重组质粒并...
作者:李春艳; 林子英; 潘展春; 邹宝安; 刘刚 期刊:《广东医科大学学报》 2017年第03期
目的构建针对Smad家族相关系列原核表达载体,观察其相应蛋白诱导表达纯化情况。方法 PCR扩增Smad2/3/4全长及截短片段,定向插入p GEX-6P-1载体中,构建原核表达重组质粒pGEX-6P-1-Smad2/3/4。经酶切和测序正确后,重组质粒转化表达菌株BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达;上清经GST-Sepharose4B亲和纯化,SDS-PAGE考马斯亮蓝染色鉴定。结果原核表达载体p GEX-6P-1-Smad2/3/4构建成功,SDS-PAGE证实Smad3A和Smad4存在...
作者:周稳; 金前跃; 陈晓; 丁培阳; 李旭峰; 王垚; 柴永笑; 张雨航; 周恩民; 郭军庆; 郅玉宝; 张改平 期刊:《动物医学进展》 2020年第01期
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,呈世界性分布,对养猪业危害严重。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,在自然条件下只感染猪。E2蛋白是猪瘟病毒的重要结构蛋白,也是猪瘟病毒的主要保护性抗原。以猪瘟病毒E2蛋白胞外区基因为模板,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-E2,并通过电转获得毕赤酵母X-33阳性克隆,经SDS-PAGE、Western blot鉴定筛选出猪瘟病毒E2蛋白表达菌株。通过亲和层析技术纯化蛋白,并将...
作者:贺大芳; 邱文英; 陈奕帆; 邹瑶; 王德 期刊:《养猪》 2020年第01期
试验以猪塞内卡病毒A(SVA)VP1基因为研究对象,利用基因重组技术构建原核表达载体pET-28a(+)-VP1。重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后经1 mmol/L异丙基茁-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37益条件下诱导6 h,后经15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测。结果:SVAVP1基因能在BL21(DE3)中成功表达,融合蛋白相对分子质量约36 kDa;表达的融合蛋白以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,以包涵体为主要存在形式。以上研究结果为后续SV...
作者:刘玉伟; 辛长财; 孙盼盼; 王颂; 高梅; 时建立; 彭喆; 吴晓燕; 王永明; 李俊 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2019年第24期
为了表达并纯化猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV-2)Cap蛋白,试验将ORF2基因的密码子改造为大肠杆菌嗜好的密码子,但编码的氨基酸序列不变。合成优化后将ORF2基因全部基因序列,克隆于pET-30a原核表达载体并转化至大肠杆菌BL21中,经PCR和测序鉴定阳性克隆后,采用IPTG诱导表达目的蛋白。优化蛋白表达条件,采用Ni-NTA亲和层析胶纯化目的蛋白。结果表明:基因序列合成正确,无点突变。重组质粒成功转化入大肠杆菌BL21中,经诱导表...
作者:陈风晔; 刘孟雨; 周雅博; 梁晓雨; 黄波; 解静 期刊:《基础医学与临床》 2020年第01期
目的建立重组人穿孔素的表达和快速纯化方法。方法在sf9昆虫细胞内表达带His标签人穿孔素。使用人工制作简易的镍(Ni)柱装置进行蛋白质亲和层析。采用考马斯亮蓝染色、银染法及流式细胞计量术纯化的蛋白分析其理化性质;用人乳腺癌细胞MCF-7的PI染色法鉴定其生物学活性。结果纯化出的穿孔素具有在细胞膜打孔的生物学活性。与常规蛋白纯化方法如离子交换色谱、分子筛和疏水作用层析等方法相比,该方法操作简便、成本低,为人穿孔素接下...
作者:李妮; 王海杰; 吕诗韵; 杜沧浩; 孙鸽; 魏艳红; 胡康洪 期刊:《中国病原生物学》 2019年第09期
目的构建编码肠道病毒71型(EV71)3D聚合酶基因的重组质粒,表达和纯化3D聚合酶并检测其活性。方法将编码3D聚合酶的基因片段克隆至pGEX-4T-1原核表达载体,重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析、TEV酶酶切、Ni-NTA柱亲和纯化后获得高纯度3D聚合酶蛋白,放射测量法是体外酶活力测定方法中较常见的一种方法,本研究通过测定插入poly(U)RNA放射性标志UMP的量确定3D聚合酶的活性。结果经酶切、PCR、...
作者:袁媛; 陈志; 罗卫星; 蔡惠芬 期刊:《黑龙江医药科学》 2019年第05期
目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor)上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体...
作者:王亚芬; 韩钰 期刊:《武汉生物工程学院学报》 2008年第03期
用RT—PCR从人肺癌细胞株中获得精脒/精胺N~1-乙酰基转移酶(SSAT)编码区cD—NA,克隆到大肠杆菌原核表达载体pET15b中,并让该载体在大肠杆菌中高效表达出SSAT重组蛋白,利用Ni—NTA树脂亲和层析纯化出重组蛋白,从而建立了SSAT原核表达和纯化系统。
作者:陈佩新; 高松; 王书生; 徐海华; 黄秀东 期刊:《中国高新科技》 2010年第09期
文章对毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-PfCP2.9表达的重组疟疾疫苗PfCP2.9的纯化工艺进行了研究。研究表明,分泌在发酵上清液中的目的蛋白,先后经Phenyl疏水层析,超滤更换缓冲液,Q强阴离子交换层析,SP强阳离子交换层系和Superdex75凝胶过滤层析,获得纯度大于98%的目的蛋白,蛋白得率为50%,Wetern—blot分析其具有免疫原性,能够满足后续临床试验用药的要求,为疫苗的产业化铺平了道路。
作者:杜晓悦; 杨晓野; 田占成 期刊:《畜牧与兽医》 2019年第06期
子孢子与裂殖体2(spm2)是环形泰勒虫重要的表面抗原。为了深入研究环形泰勒虫spm2主要抗原区域spm-N蛋白的功能,利用大肠杆菌表达系统表达重组spm-N蛋白并进行纯化及鉴定。通过序列设计合成特异性引物,利用PCR扩增环形泰勒虫spm-N基因片段,将目的片段定向克隆至表达载体pET30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌,用IPTG诱导表达重组蛋白。结果显示:重组spm-N蛋白以可溶性的形式表达,获得了较高纯度的spm-N蛋白,且该蛋白的反应原性和...
作者:张淑芝; 夏海武; 高明刚 期刊:《畜牧与兽医》 2018年第11期
为研究水通道蛋白8 (aquaporin 8,AQP8)的结构和功能,构建AQP8原核表达载体,表达纯化GST-AQP8融合蛋白。PCR扩增小鼠AQP8羧基端270bp的特异序列,定向连接到pGEX-4T-1载体,构建原核表达载体pGEX-4T-1/AQP8,转化大肠杆菌表达菌株BL21,IPTG诱导表达GST-AQP8融合蛋白,并对融合蛋白进行亲和层析纯化。酶切鉴定和DNA测序结果表明p GEX-4T-1/AQP8表达载体构建成功; SDS-PAGE结果证实GST-AQP8融合蛋白有效表达且成功纯化。本研究成功制备...
作者:唐青蓝; 李红梅; 张礼林; 王玉丰; 颜礼完; 周君 期刊:《贵州医科大学学报》 2019年第05期
目的:对小鼠FGF21基因进行克隆并诱导表达FGF21融合蛋白。方法:以带有小鼠FGF21的T载体pMD19-T-mFGF21为模板特异性扩增FGF21基因片段,将扩增产物克隆至pET-28a(+),得到pET-28a(+)-mFGF21的重组子,并转化于大肠杆菌BL21(DE3),使用IPTG诱导融合蛋白的表达,纯化后采用WesternBlot进行鉴定。结果:pET-28(+)-mFGF21重组质粒构建成功,表达出可溶性的his-mFGF21融合蛋白,经纯化后该蛋白his-mFGF21可与FGF21抗体特异性结合。结论:成功构建...
作者:李晶晶; 谢莹; 陈月; 郑敏英 期刊:《南开大学学报·自然科学版》 2019年第05期
m6A受到甲基转移酶(METTL3,METTL14,WTAP等)/去甲基化酶(FTO,ALKBH5等)以及一些RNA结合蛋白(YTHDF1/2/3,ELAVL1等)的共同调控,在细胞内是一个动态可逆的过程.甲基化转移酶METTL3是甲基转移酶复合物中重要的组成部分,参与调控真核生物mRNA的甲基化水平.目前关于MET-TL3的分子结构基础以及整个甲基化转移酶的复合物的组装机制还不是很清楚.本研究中构建了原核表达载体pET.32M.3C-METTL3^(1-305),利用大肠杆菌原核表达系统表达出了可...
作者:侯丹丹; 王云龙; 张怡青; 孙新城; 李玉林; 米海; 王继创; 程蕾 期刊:《轻工学报》 2013年第06期
通过构建重组表达质粒,诱导表达纯化麻疹病毒N蛋白.将麻疹病毒N蛋白基因片段与载体pET-32a(+)相连接,通过PCR方法扩增获得重组质粒pET-32a(+)/N,然后将重组质粒转入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)内,并优化诱导表达时间、温度、诱导剂浓度等条件.SDS—PAGE和Western blot蛋白印迹检测表明,麻疹病毒N蛋白分子质量约为60kD,表达产物用Ni—NTA亲和层析和DEAE纯化后,纯度达90%.
作者:韦艳霞; 卫东锋; 程卫东; 赵春燕; 苏刚 期刊:《时珍国医国药》 2012年第07期
目的建立和优化红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法采用标准裂解法提取HPS-3 100 mg/(kg.d)灌胃14 d小鼠的胸腺组织总蛋白,后续进行三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和去脂蛋白纯化法获取胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条进行双向凝胶电泳,并对等电聚焦程序进行改良和优化,同时将去脂蛋白纯化法运用于A549细胞蛋白的纯化并进行双向电泳,银染色后进行凝胶图像比较。结果去脂蛋白纯化法不仅能减少蛋白降...
作者:刘秀财; 李耕慧; 郭伟华 期刊:《中国医药导报》 2010年第15期
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)NS5A蛋白原核表达载体,获得高产量的纯化目的蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:应用聚合酶链反应技术,PCR扩增获得NS5A基因,将NS5A基因插入至原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠埃希菌DH5α提取质粒,验证正确后,转化大肠埃希菌BL21中,以IPTG诱导,获得NS5A融合蛋白的可诱导性表达.通过SDS—PAGE电泳、Western blot免疫印迹分析证实融合蛋白表达的特异性。利用Ni^+亲和柱对表达蛋白进行纯...
作者:余晓颖; 田园; 张国利; 吴广谋; 刘雨玲; 李泽鸿; 岳玉环 期刊:《中国兽药》 2019年第01期
为制备犬流感病毒(H3N2) M1蛋白纯品,针对M1基因序列设计引物,用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段,扩增产物克隆至表达载体pET-SUMO中并转化至宿主菌BL21(DE3),诱导表达目的蛋白,探索纯化工艺,制备目的蛋白,并用Western blot检测纯化的M1目的蛋白。通过PCR成功扩增出大小为771 bp的M1基因,成功构建p ET-SUMO-M1表达载体,表达的融合蛋白相对分子量为41 kD,主要以可溶形式表达,纯化后获得蛋白纯品,Western blot检测显示用M1蛋白(...
作者:裴仉福; 陈瑞爱; 唐秀英; 朱文冠; 唐满华; 李琳; 程含波; 温纳相 期刊:《中国兽药》 2007年第02期
以pcDNA3.1-IL18为模板进行PCR扩增获得猪白细胞介素-18(IL-18)的成熟肽基因,以KpnⅠ、SacⅠ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5a,经双酶切、PCR鉴定及测序筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c—IL18和pET32c—IL18。将pET41c—IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1mmol/LIPTG37℃诱导表达。SDS-PAGE及Western—blotting分析结果表明,所表达的重组蛋...