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Abd-Bcr/Abl原核表达载体的构建和表达

作者:康志杰 李国辉 黄斯勇 梁亮 尹郸丹 何飞 胡兴斌 韩骅 梁英民 第四军医大学 唐都医院血液科 遗传与发育生物学教研室 西安710038
慢性髓细胞性白血病  

摘要:构建Bcr/Abl-Abd原核表达载体,并表达、观察对白血病细胞K562的影响。以慢性白血病PGD210质粒为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增出Abd编码区序列,克隆入pMDl8t载体,经酶切测序鉴定正确。再通过酶切重组克隆入原核表达载体pET32a,构建pET32a-Abd重组表达质粒,经酶切、测序鉴定,序列、读码框均正确。通过转化EcoliBL21(DE3),经IPTG诱导表达,纯化。结果PCR扩增出特异性的501bp的目的片断,以此构建的重组质粒pET32a-Abd能够在上清中表达约36.6kd的目的蛋白,Western blot鉴定为特异表达。证明成功构建了原核表达载体pET32a-Abd,并表达在上清中,表达蛋白约占菌体总蛋白的6%,纯化后达到74.3%,Western blot检测为特异性表达,为进一步研究该蛋白对慢性白血病细胞的作用奠定了分子基础。

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