摘要:目的用Grp78基因转染人肝细胞癌SMMC-7721,筛选阳性克隆并鉴定。方法利用真核表达载体pcDNA3.1+Crp78转粢SMMC-7721,peDNA3.1+Grp78与转染试剂的比例(μg/μL)分别为2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9,400μg/μL G418筛选阳性克隆后,传代扩增,Western Blot鉴定克隆的GrP78表达情况。应用peDNA3.1空载体作为阴性对照。结果Western Blot显示,转染后的SMMC-7721经G418筛选,除一个克隆不高表达外,其余克隆均高表达Grp78。结论Grp78转染SMMC-7721的最佳转染效率是8:2(转染试剂/DNA),由于假阳性克隆的存在,筛选后的克隆需要鉴定。
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