摘要：目的设计及构建ELK-1微小干扰核糖核酸（miRNA）质粒,最终鉴定出有效干扰质粒。方法设计及构建4对ELK-1的pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR miRNA及1对无效对照miRNA干扰质粒,通过测序鉴定。将干扰质粒用脂质体法转染293T细胞,通过顺时转染获得细胞系。通过倒置荧光显微镜下观察绿色荧光确定转染效率,RT-PCR检测4对干扰质粒、阴性对照质粒ELK-1的mRNA的表达水平。结果测序表明,ELK-1干扰序列及读框完全正确,干扰质粒瞬时转染的293T细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光达90%以上。RT-PCR结果显示,MR-2、MR-3干扰质粒对ELK-1mRNA有较好的抑制效果。结论成功构建了ELK-1干扰真核表达载体,筛选出有效干扰质粒,为进一步研究ELK-1在肿瘤细胞中的作用提供参考。

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