摘要：为构建嗜水气单胞菌穿梭质粒载体,试验根据质粒pBK760基因序列设计特异性引物,对质粒pBK760进行PCR扩增,并将纯化后的PCR产物连接到pMD20载体中,构建嗜水气单胞菌穿梭质粒载体pBKPU01,提取重组质粒载体进行鉴定,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性转化子,最后将阳性转化子转入嗜水气单胞菌,获得具有标记抗性基因的嗜水气单胞菌。结果显示,构建的嗜水气单胞菌穿梭质粒载体pBKPU01经PCR和酶切鉴定正确,并且能在大肠杆菌中表达,表明质粒pBK760成功插入pMD20载体中,嗜水气单胞菌穿梭质粒pBKPU01构建成功。

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