摘要:为研究家蝇防御素融合蛋白对肿瘤细胞K562有抑制作用,在GenBank中检索家蝇defensin基因,设计特异引物,在家蝇幼虫组织中提取RNA,并通过PCR扩增defensin基因成熟肽部分(Maturedefensin,MD),将该基因与原核质粒表达载体pGEX.6P-1进行重组,构建家蝇抗菌肽重组蛋白pGEX-6P-1/MD。通过双酶切鉴定证明目的片段已稳定融合到载体pGEX-6P-1中并将其转化至BL21(DE3)感受态细胞中,经25℃IPTG诱导在大肠杆菌E.coliDH5u中表达。用GST—Sefinose亲和层析纯化蛋白,15%SDS—PAGE分析鉴定,可见相对分子量为约30kDa的特异性目的条带。运用琼脂孔穴平板扩散法测定表达产物的活性,得知纯化后的重组融合蛋白pGEX-6P-1/MD对大肠杆菌生长有一定的抑制作用,并首次证明家蝇防御素融合蛋白pGEX.6P.1/MD对肿瘤细胞K562有抑制作用。家蝇抗菌肽融合蛋白pGEX-6P-1/MD被成功克隆和表达,证明纯化融合蛋白pGEX-6P-1/MD对肿瘤细胞K562有抑制和损伤作用,这为以后研发蝇防御素抗菌肽药物提供了依据。
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