摘要:目的建立实时荧光定量PCR检测皮层肌动蛋白基因表达水平的方法。方法提取人肝癌组织总RNA,RT—PCR扩增CTTN和GAPDH基因片段并分别构建两片段阳性表达载体。采用SYBR Green I实时荧光定量PCR绘制两基因拷贝数标准曲线,实测人肝癌标本并进行方法学评价。结果成功构建pMD18-T(+)/CTTN和pMD18-T(+)/GAPDH重组质粒。CTTN和GAPDH基因模板拷贝数分别在1.6×10^3-1.6×10^7和1.6×10^4-1.6×10^7之间时标准曲线有良好线性关系,R^2分别为0.996和0.985。由Ct值统计两基因组内变异系数分别为0.11%~2.25%和0.75%-3.63%;组间变异系数分别为0.83%~1.48%和0.47%~1.36%。组间无统计学差异(P〉0.05)。结论成功建立实时荧光定量PCR检测人肝癌组织CTTN基因的方法,为研究人肝癌组织CTTN基因表达水平奠定了方法学基础。
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