摘要：为建立一种用SYBR Green I荧光染料检测PK-15细胞a干扰素（α-IFN）效应因子Mx1、OAS的mRNA表达水平的qPCR检测方法，通过在猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus Type 2，PCV2）抑制α-IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。根据GenBank中目的基因的序列，利用分子生物学软件Premier 5．0在其保守区设计并合成相应的特异性引物。利用TRIzol法提取总RNA，经Oligod（T）15进行反转录，利用PCR扩增各段目的基因，并克隆至pMD18-T载体，转化大肠杆菌DH5α，经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR Green I qPCR标准曲线和溶解曲线，并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时qPCR方法，检测PCV2对α-IFN效应因子的抑制效果。对建立的PK-15细胞α-IFN效应因子SYBR Green I qPCR方法进行分析，结果表明Mx1、OAS和内参β—actin基因的Ct值与标准品稀释度在1×10^1～1×10^8copies／gL的范围分别呈良好的线性关系。PK-15细胞在接种PCV2，并受到α-IFN刺激后Mxl、OAS的相对表达量较未接种PCV2明显降低。本试验建立了PK-15细胞d—IFN效应因子的qPCR检测方法，为在mRNA水平上对PK-15细胞α-IFN效应因子的定量分析奠定了基础，并成功地初步应用于PCV2抑制α-IFN发挥效应的信号通路研究中。

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