摘要:以人肝cDNA为模板克隆了人血小板生成素(HumanThrombopoietin,hTPO)基因,利用基因重组技术构建了带有新霉素抗性基因(neo)筛选标记的pcDNA3.1(+)-hTPO真核表达载体,将重组质粒瞬时转染293T细胞,用鼠抗人TPO单抗Westernblot检测TPO蛋白的瞬时表达;再将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamsterOvary,CHO),应用400txg/mL的G418筛选克隆,经PCR及Westernblot验证,获得了3株hTPO蛋白表达水平不同的CHO细胞系,为获得大量蛋白并进行活性功能试验及临床应用奠定基础。
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