首页 期刊 家畜生态学报 人血小板生成素基因的克隆及CHO稳定细胞系的建立 【正文】

人血小板生成素基因的克隆及CHO稳定细胞系的建立

作者:马倩倩; 宋玲玲; 王红梅; 方永志; 王立群; 何洪彬 东北农业大学生命科学学院; 黑龙江哈尔滨150030; 山东省农业科学院奶牛研究中心; 山东济南250100; 济南军区军犬训练大队; 山东济南250100
人血小板生成素   基因克隆   cho稳定细胞系   western   blot  

摘要:以人肝cDNA为模板克隆了人血小板生成素(HumanThrombopoietin,hTPO)基因,利用基因重组技术构建了带有新霉素抗性基因(neo)筛选标记的pcDNA3.1(+)-hTPO真核表达载体,将重组质粒瞬时转染293T细胞,用鼠抗人TPO单抗Westernblot检测TPO蛋白的瞬时表达;再将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamsterOvary,CHO),应用400txg/mL的G418筛选克隆,经PCR及Westernblot验证,获得了3株hTPO蛋白表达水平不同的CHO细胞系,为获得大量蛋白并进行活性功能试验及临床应用奠定基础。

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