摘要：报道一种新的不依赖于连接的克隆（LIC）载体．该载体被缺刻的内切酶N．BbrCIA和限制性内切酶SwaI作用产生长的粘性末端．靶向基因的PCR片段在4mmol／LdGTP的孵育下被T4DNA聚合酶处理生成互补粘性末端．将处理过的载体和PCR产物共转化到大肠杆菌体内，插入载体的接合能够被宿主酶和给定的重组质粒修复．接着引入到大肠杆菌表达系统，该融合蛋白能够被表达和纯化，再用烟草蚀刻病毒TEV蛋白酶处理将移去靶蛋白的N末端，产生天然蛋白．两个基因，绿色荧光蛋白基因egfp和硫氧环蛋白基因txn已被用于这个系统．结果表明LIC策略对于高通量克隆和表达是高效的，对于天然蛋白的产生也同样高效．

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